電感耦合等離子體質譜法測定大七厘制劑中五種可溶性重金屬含量

吳良發，許妍，鄭盈瑩，姜軍華

江西省藥品檢驗檢測研究院，國家藥品監督管理局中成藥質量評價重點實驗室，江西省藥品與醫療器械質量工程技術研究中心，江西 南昌 330029

大七厘丸、大七厘片、大七厘膠囊、大七厘散屬于同方制劑，均由自然銅、硼砂、大黃等十一味藥材全部以生藥粉投料制成，各品種現行標準對重金屬控制項目各不相同，大七厘散無總重金屬檢查項，大七厘丸無總重金屬但有酸可溶性重金屬檢查項，而大七厘膠囊和大七厘片有總重金屬檢查項且限量要求不一樣（大七厘膠囊規定含總重金屬量不得過百萬分之三十，大七厘片規定含總重金屬量不得過百萬分之十、含砷量不得過百萬分之二）。由于含有礦物藥，大七厘膠囊和大七厘片制定的重金屬限量過于嚴格，總重金屬和砷含量常出現不合格情況。重金屬控制指標和限量不合理以及標準不統一造成品種之間不公平競爭，因此，有必要建立大七厘制劑中重金屬含量測定的通用方法。

自然銅和硼砂是常用礦物藥，在發揮藥效的同時伴生的重金屬元素易在體內積蓄，對人體有一定的危險，影響人體正常的生理功能［1］。目前，文獻報道多集中在重金屬總量方面的研究［2-5］，而有關可溶性重金屬方面的研究較少，尚未見大七厘制劑中可溶性重金屬的研究。本文建立ICP-MS 法測定大七厘制劑中可溶性重金屬的含量，為含礦物中成藥中重金屬限量標準的制訂提供參考依據。

1 儀器與試藥

電感耦合等離子質譜儀ICP-MS（型號：Agilent 7700），微波消解儀（型號：MARS-Xpress），超聲波清洗器（型號：KQ-500E），萬分之一電子天平（型號：ML204），低速臺式離心機（型號：TDL-40C）。

銅、砷、鉛、鎘混合元素標準溶液（5283-4682，10 μg/mL）、汞單元素標準溶液（10-37HGY2，10 μg/mL）以及鋰、鈧、鍺、銦、鉍混合內標儲備液（5188-6525，100 μg/mL）均購自美國安捷倫公司；人發標準物質（GBW09101）購自國家標準物質中心；硝酸為優級純試劑，胰酶為生化試劑，試驗用水為超純水。所用玻璃儀器均以20%硝酸溶液浸泡24 h，再用去離子水沖洗干凈。

4 家企業的22 批樣品，包括11 批大七厘丸（江西仁豐藥業有限公司，規格：每丸重0.2 g）；2 批大七厘片（江西桔王藥業有限公司，規格：每片重0.35 g）；3 批大七厘散（廈門中藥廠有限公司，規格：每袋裝1.5 g）；6 批大七厘膠囊（江西昂泰制藥有限公司，規格：每粒重0.3 g）。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

2.1.1 混合對照品溶液制備精密吸取銅、砷、鉛、鎘混合元素標準溶液適量，用5%硝酸溶液制成1 μg/mL 的混合溶液；精密吸取汞單元素標準溶液適量，用5%硝酸溶液制成0.1 μg/mL 的溶液。

2.1.2 供試品溶液制備取本品適量，研細（過四號篩），精密稱取0.2 g，精密加入人工腸液［按中國藥典2020 年版四部通則8004 磷酸鹽緩沖液（含胰酶）（pH6.8）制備］25 mL，置37 ℃水浴中超聲處理（功率：500 W，頻率：40 kHz）2 h，搖勻，離心5 min（速度：4 000 r/min），取上清液，即得。取相同體積的人工腸液，同法制備樣品空白溶液。

2.1.3 內標溶液制備精密吸取鋰、鈧、鍺、銦、鉍混合內標儲備液適量，用5%硝酸溶液制成1 μg/mL的內標溶液。

2.2 儀器工作參數

在氦模式下進行測定，使用調諧液調整儀器分辨率、靈敏度、氧化物、雙電荷等各項指標，使達到測定要求［6］。優化參數見表1。

表1 儀器工作參數

2.3 測定方法［7］

測定時選取的同位素為63Cu、75As、114Cd、202Hg 和208Pb，其 中63Cu、75As 以72Ge 作為內標，114Cd 以115In 作為內標，202Hg、208Pb 以209Bi 作為內標。儀器的內標進樣管在儀器分析工作過程中始終插入內標溶液中，依次將儀器的樣品管插入各個濃度的對照溶液中進行測定(濃度依次遞增)，繪制標準曲線。將儀器的樣品管插入供試品溶液中，測定，取3 次讀數的平均值，扣除相應的樣品空白后，從標準曲線計算得相應的濃度。

2.4 線性范圍及檢出限

精密吸取銅、砷、鉛、鎘混合元素標準溶液（1 μg/mL）0、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mL，分別置50 mL 量瓶中，加5%硝酸溶液制成系列混合對照品溶液。精密吸取汞單元素標準溶液0、0.4、0.8、1.2、1.5、2.0 mL，分別置100 mL 量瓶中，加5%硝酸溶液制成系列對照品溶液。橫坐標（x）為對照品濃度，縱坐標（y）為3 次讀數的平均測量值，繪制標準曲線，并平行測定樣品空白溶液11 次，計算該方法對樣品中各元素的檢出限。結果見表2。

表2 5種重金屬元素線性范圍及檢出限

2.5 精密度試驗

取4 種混合元素溶液（40 ng/mL）和汞單元素溶液（1.2 ng/mL），分別進樣測定6 次，結果測得銅、砷、鉛、鎘、汞濃度RSD 分別為0.8%、1.7%、1.1%、1.5%、1.8%，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取銅、砷、鉛、鎘混合對照品溶液（40 ng/mL）和汞對照溶液（1.2 ng/mL），每間隔一定時間（0、6、12、18、24 h）測定濃度，結果銅、砷、鉛、鎘、汞濃度RSD 分別為0.9%、1.5%、1.0%、1.6%、1.4%，表明待測元素在24 h 內基本穩定。

2.7 準確度試驗

采用人發國家標準物質（GBW09101）作為參考，考察方法的準確度，結果見表3。結果表明測定值與參考值基本相符，該方法準確可靠。

表3 準確度試驗結果（μg/g）

2.8 樣品含量測定

采用上述方法對22 批大七厘制劑中5 種可溶性重金屬元素進行含量測定，結果見表4。

表4 樣品中可溶性重金屬含量測定結果（μg/g）

目前國際上對含礦物類中成藥中重金屬的限量沒有明確的規定，因此，鉛參照香港中成藥注冊安全性要求（不得過179 μg/d），砷參照美國重金屬允許攝入量的要求（不得過130 μg/d），銅、鎘、汞參照中藥注射劑中重金屬及有害元素殘留量檢查指導原則（銅不得過150 μg/d，鎘不得過3 μg/d，汞不得過2 μg/d）以及口服制劑的重金屬限度為注射劑的三倍（銅不得過450 μg/d，鎘不得過9 μg/d，汞不得過6 μg/d）的要求，再根據大七厘制劑的用法用量計算各品種的推薦限量，結果見表5。按此標準判定，1 批大七厘片砷含量超過限量，其他樣品均未超過限量。

表5 大七厘制劑中可溶性重金屬推薦限量

3 討論

本文建立了ICP-MS 法測定在模擬人體環境下可溶解于人工腸液中的重金屬。經分析探索研究后，最終模擬體內的吸收過程，建立極限量法（最大量法）來測定可溶性重金屬，通過采用人工腸液、較為激烈的提取方法，來保證所提取的可溶性重金屬是在模擬人體環境下的極限值，避免因試驗參數無法完全復制而造成重現性差的問題；同時因人體能吸收的可溶性重金屬的量遠小于極限值，可避免病理、生理、人種、年齡、性別等帶來的不確定性，達到安全化控制最大化。樣品的粒徑對測定結果有影響，研細過四號篩的粉末測定效果最好。

從樣品檢測結果來看，大七厘不同劑型和同劑型不同批次之間可溶性重金屬含量有差異，可能與投入生產的原料有關。1 批大七厘片砷含量超過限量，而未加自然銅的大七厘片中重金屬含量顯著降低，提示自然銅是造成重金屬偏高的主要原因。自然銅在入藥前需經煅制,煅后重金屬含量顯著降低［8］。如企業使用煅制不充分或未煅制的自然銅投料，則可能造成含自然銅中成藥中重金屬含量偏高［9］。因此，控制好原料尤其是自然銅的質量，可有效降低成品中重金屬的含量。

研究表明，可溶性重金屬含量遠低于總重金屬含量［10-12］，說明經人體胃腸液消化后大部分重金屬元素被排出了體外，只有被人體吸收的重金屬才具有毒性作用［13］。因此，不能單純以重金屬總量作為毒性限度指標，建議將可溶性重金屬作為含礦物中成藥的質控指標之一，制訂合適的限量標準［14-15］。同時應考察重金屬的生物溶出度及形態價態［16］，為科學全面評價重金屬的毒性提供數據支撐。