氨基酸蛋白營(yíng)養(yǎng)液對(duì)3 種常見(jiàn)淡水綠藻生長(zhǎng)的影響

趙旭民，吳陳炎，曾 霖，張延軍，陳東良，毛 帥，李繼姬

(1.國(guó)家海洋設(shè)施養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，浙江舟山 316022；2.浙江華太生物科技有限公司，浙江義烏 322005；3.浙江海洋大學(xué)海洋科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，浙江舟山 316022)

微藻——光能自養(yǎng)型單細(xì)胞藻類，廣泛分布于淡水、海水生態(tài)系統(tǒng)，種類繁多。微藻細(xì)胞太陽(yáng)能利用率高、生長(zhǎng)繁殖迅速、且營(yíng)養(yǎng)豐富：富含蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖類、維生素（A、B1、B2、B6、C 及E）、類胡蘿卜素（蝦青素及β-胡蘿卜素）、不飽和脂肪酸（EPA 及DHA）、藻多糖、礦質(zhì)元素及抗氧化物質(zhì)等多種營(yíng)養(yǎng)成分[1]，可滿足水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物在幼苗期的正常生長(zhǎng)發(fā)育營(yíng)養(yǎng)需求。利用微藻餌料加強(qiáng)種苗營(yíng)養(yǎng)的做法已經(jīng)應(yīng)用于對(duì)蝦、海參、海膽、雙殼貝類、甲殼類等動(dòng)物育苗工作中[2-4]，微藻餌料在提高育苗存活率、保證幼苗正常變態(tài)和發(fā)育、提高生長(zhǎng)速度、提高免疫力等方面具備一定的作用[5]。另外，微藻可以高效地利用光合作用降低養(yǎng)殖水體中常見(jiàn)的氨、氮等有害無(wú)機(jī)物并產(chǎn)生氧氣，凈化水質(zhì)保證溶解氧的供應(yīng)[6]。因此，微藻已成為水產(chǎn)養(yǎng)殖的重要基礎(chǔ)保障，養(yǎng)殖水體中養(yǎng)殖動(dòng)物與微藻的合理搭配成為高效、健康養(yǎng)殖的必備舉措，實(shí)踐意義顯著。

小球藻Chlorella sp.為普生性單細(xì)胞綠藻，隸屬于綠藻門(mén)Chlorophyta，綠藻綱Chlorophyceae，卵囊藻科Oocystaceae，小球藻屬Chlorella，具備適應(yīng)能力強(qiáng)、分布廣、生長(zhǎng)速度快、營(yíng)養(yǎng)豐富等特點(diǎn)[7]。斜生柵藻Scenedesmus obliquas，隸屬于綠藻門(mén)Chlorophyta，綠球藻目Chlorococcales，柵藻科Scenedesmaceae，柵藻屬Scenedesmus，具備易存活、繁殖能力強(qiáng)、環(huán)境耐受性強(qiáng)、氮磷利用率高、油脂及蝦青素含量高等特點(diǎn)[8-9]。卵囊藻Oocystis sp.，屬于綠藻門(mén)Chlorophyta，綠藻綱Chlorophyceae，綠球藻目Chlorococcales，卵囊藻科Oocystaceae，卵囊藻屬Oocystis，廣泛分布于小型湖泊和池塘等常見(jiàn)淡水水體中[10]。此3 種綠藻在水產(chǎn)養(yǎng)殖中均具有較高的應(yīng)用價(jià)值：研究表明小球藻能夠明顯提高南美白對(duì)蝦的存活率、促進(jìn)生長(zhǎng)[11]；斜生柵藻細(xì)胞中富含的蝦青素作為魚(yú)類維生素A 的前體具備增強(qiáng)魚(yú)類和蝦、蟹類的免疫功能、促進(jìn)生長(zhǎng)和提高存活率的特點(diǎn)[12-14]；卵囊藻因細(xì)胞吸附有害物質(zhì)的能力而具備調(diào)控改善養(yǎng)殖水環(huán)境及增強(qiáng)對(duì)蝦抗病力的特點(diǎn)[15]；因此水產(chǎn)養(yǎng)殖對(duì)上述綠藻的需求和依賴性是很高的。

針對(duì)3 種綠藻細(xì)胞的生長(zhǎng)和繁殖已有諸多報(bào)道，研究發(fā)現(xiàn)不同添加物和培養(yǎng)基對(duì)于不同綠藻發(fā)揮了積極作用：維生素B1 對(duì)小球藻的增殖有極顯著的促進(jìn)作用[16]，蛋白胨和牛肉膏對(duì)小球藻的生長(zhǎng)促進(jìn)作用大[17]，BG11-N 培養(yǎng)基有利于小球藻的快速生長(zhǎng)，SE 培養(yǎng)基更有利于小球藻對(duì)油脂的積累[18]；BG11 培養(yǎng)基有利于斜生柵藻的生長(zhǎng)，F(xiàn)/2 培養(yǎng)基更適合斜生柵藻油脂以及中性脂的積累[19]；魚(yú)汁、海泥抽出液和尿液均能促進(jìn)卵囊藻的生長(zhǎng)[20]。目前針對(duì)單一藻種所需的無(wú)機(jī)鹽[21]、微量元素[22]、維生素[23]、有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等開(kāi)發(fā)針對(duì)性的單一最適培養(yǎng)基成為研究的側(cè)重點(diǎn)，但是投入成本偏高，作為淡水養(yǎng)殖水體的微藻也并非單一物種，而是多物種搭配，因此多物種普適性的水體添加物可能成為更經(jīng)濟(jì)、更高效的舉措。

本研究以F/2 和BG11 培養(yǎng)基為3 種綠藻的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，以市售華太氨基酸蛋白營(yíng)養(yǎng)液為培養(yǎng)添加物，在不同的溫度下設(shè)置不同濃度的雙向梯度實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)該添加物對(duì)3 種綠藻的擴(kuò)繁的效果，以期找到一種普適性的養(yǎng)殖水體添加物，為養(yǎng)殖體系中綠藻擴(kuò)繁環(huán)節(jié)提供一個(gè)高效、經(jīng)濟(jì)的選項(xiàng)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與及實(shí)驗(yàn)儀器

小球藻 (Chlorella sp.，GY-D19)、斜生柵藻(S.obliquus，GY-D13)及卵囊藻(Oocystis sp.，GY-D5)藻種購(gòu)自上海光語(yǔ)生物科技有限公司。配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基的所有無(wú)機(jī)鹽及氨基酸試劑購(gòu)自上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。氨基酸蛋白營(yíng)養(yǎng)液采用大米加工而成，其生產(chǎn)工藝如圖1 所示。對(duì)氨基酸蛋白營(yíng)養(yǎng)液組成進(jìn)行測(cè)定（國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18246-2000），其主要成分見(jiàn)表1。

圖1 氨基酸蛋白液生產(chǎn)工藝圖Fig.1 Production process diagram of amino acid protein nutrient

表1 氨基酸蛋白液主要成分含量Tab.1 Content of main components in amino acid protein nutrient

實(shí)驗(yàn)所用儀器有：生物顯微鏡(CX23LEDRFS1C 型，奧林巴斯)，血球計(jì)數(shù)板(AP-0650030 型，MARIENFELD)，紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)(UV-2550 型，島津)，人工氣候箱(RXZ-500D 型，寧波江南儀器廠)，純水儀(MilliporeElix)。

1.2 綠藻培養(yǎng)方法及雙梯度實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制與氨基酸蛋白營(yíng)養(yǎng)液脫水處理：F/2、BG11 基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方參照王麗娟等[19]實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。使用純水機(jī)處理后的超純水添加各組分無(wú)機(jī)鹽后經(jīng)121 ℃、20 min 高壓滅菌，隨后加入經(jīng)0.22 μm 孔徑濾膜過(guò)濾除菌的氨基酸組分制成基礎(chǔ)培養(yǎng)基備用。因營(yíng)養(yǎng)液為膏液狀，含水量會(huì)因生產(chǎn)批次的不同有起伏，為了實(shí)驗(yàn)的嚴(yán)謹(jǐn)性采取干重濃度設(shè)計(jì)（膏液狀營(yíng)養(yǎng)液經(jīng)烘干測(cè)得干濕比為0.773 2）。

3 種綠藻均在人工氣候箱中培養(yǎng)，各參數(shù)設(shè)置為：光照強(qiáng)度4 000 Lux、濕度75%、光照周期16 L/8 D，培養(yǎng)過(guò)程中每天搖瓶4 次。取生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期的藻種在無(wú)菌環(huán)境下接種于容量體積為100 mL 的透明錐形瓶中，培養(yǎng)體積為50 mL，用過(guò)濾孔徑為0.2～0.3 μm 的透氣封口膜封口以防止雜菌污染。綠藻初始接種濃度分別為小球藻0.33×105cells·mL-1、斜生柵藻0.16×105cells·mL-1和卵囊藻0.04×105cells·mL-1。

雙梯度實(shí)驗(yàn)設(shè)置是6 個(gè)實(shí)驗(yàn)溫度(16、19、22、25、28 及31 ℃)和4 個(gè)氨基酸蛋白營(yíng)養(yǎng)液(添加物)濃度(0、10、100 及1 000 mg·L-1)，其中0 mg·L-1為空白對(duì)照，其他均為干重濃度。不同溫度分批進(jìn)行，同一溫度下的4 組濃度實(shí)驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行，設(shè)置4 組平行組，連續(xù)培養(yǎng)并觀測(cè)11～12 d，每24 h 測(cè)定藻液濃度。

1.3 藻濃度測(cè)定

本實(shí)驗(yàn)采用紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)和血球計(jì)數(shù)板測(cè)量藻濃度。首先，取生長(zhǎng)至較高濃度的3 種藻液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描確定每種藻的光譜特征峰波長(zhǎng)：小球藻686 nm、斜生柵藻682 nm、卵囊藻687 nm。然后取培養(yǎng)好的3 種微藻懸浮液用基礎(chǔ)培養(yǎng)基按比例稀釋成各種濃度，用血球計(jì)數(shù)板法計(jì)算藻濃度（單位105cells·mL-1），重復(fù)6 次，取平均值。將相應(yīng)藻濃度用分光光度計(jì)在每種藻的特征峰波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，以基礎(chǔ)培養(yǎng)基為參比，求得每種藻細(xì)胞濃度(x)與藻液吸光度(y)之間的線性關(guān)系。

3 種微藻標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：

3 組標(biāo)準(zhǔn)曲線方程的r2均大于0.99，表明藻濃度與OD 值之間有較好的線性關(guān)系，可以用分光光度計(jì)法測(cè)定藻濃度，測(cè)得OD 值代入標(biāo)準(zhǔn)方程換算為藻濃度。

2 數(shù)據(jù)分析

所有藻液細(xì)胞濃度數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)的模式呈現(xiàn)，采用SPSS 軟件的單因素方差分析法(ANOVA)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的顯著性差異分析(P＜0.05)。使用比生長(zhǎng)率(SGR)來(lái)表示特定時(shí)間段內(nèi)藻細(xì)胞群體的單位時(shí)間增長(zhǎng)率，公式如下：

式中：A、B 為培養(yǎng)天數(shù)，d；CA、CB為第A 天和第B 天的藻濃度，105Cells·mL-1；(TB-TA)為第A 天到第B 天的培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)度，d。

3 結(jié)果與討論

3.1 不同溫度下?tīng)I(yíng)養(yǎng)液對(duì)3 種綠藻生長(zhǎng)的影響

以3 ℃為間隔的梯度設(shè)計(jì)橫跨16～31 ℃共6 個(gè)溫度，覆蓋了水產(chǎn)養(yǎng)殖實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中季節(jié)交換導(dǎo)致的多級(jí)溫度變化。圖2～7 的(a)分圖分別顯示的是6 個(gè)溫度下經(jīng)過(guò)11～12 d 培養(yǎng)后的3 種綠藻的細(xì)胞濃度，營(yíng)養(yǎng)液對(duì)綠藻生長(zhǎng)的影響因不同溫度和不同物種而存在較大的差異。

溫度梯度實(shí)驗(yàn)的最低溫是16 ℃，小球藻的對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組均停止生長(zhǎng)，斜生柵藻和卵囊藻均適應(yīng)低溫并對(duì)營(yíng)養(yǎng)液的添加作出積極響應(yīng)，相比對(duì)照組細(xì)胞濃度在一定程度上顯著增加，見(jiàn)圖2(a)。隨著實(shí)驗(yàn)溫度的上升，小球藻對(duì)照組均停止生長(zhǎng)，而營(yíng)養(yǎng)液的添加提升了小球藻的低溫耐受性并顯著提升了細(xì)胞濃度，見(jiàn)圖3(a)。在高溫31 ℃時(shí)，小球藻對(duì)照組同樣受到高溫脅迫停止生長(zhǎng)，而營(yíng)養(yǎng)液的添加同樣提升了小球藻的抗高溫性能并顯著提升了細(xì)胞濃度，見(jiàn)圖7(a)。由此可見(jiàn)，氨基酸蛋白營(yíng)養(yǎng)液的添加使得小球藻提升了溫度耐受性，適宜溫度跨度得到擴(kuò)展。然而，31 ℃(圖7(a))、28 ℃(圖6(a))及22 ℃(圖4(a))實(shí)驗(yàn)組的卵囊藻受到添加的營(yíng)養(yǎng)液的脅迫作用，細(xì)胞濃度顯著低于對(duì)照組，而其他溫度下呈促進(jìn)生長(zhǎng)的作用，暫未發(fā)現(xiàn)卵囊藻這種無(wú)規(guī)律變化的原因。對(duì)于斜生柵藻，所有溫度下的實(shí)驗(yàn)組均呈現(xiàn)較好的生長(zhǎng)態(tài)勢(shì)，相較于對(duì)照組促進(jìn)作用顯著。

圖2 添加氨基酸蛋白營(yíng)養(yǎng)液對(duì)3 種綠藻生長(zhǎng)的影響(16 ℃).(a)：經(jīng)過(guò)12 d 培養(yǎng)期的3 種綠藻細(xì)胞濃度柱狀圖；(b)、(c)及(d)：12 d 培養(yǎng)期內(nèi)小球藻、斜生柵藻及卵囊藻的生長(zhǎng)曲線圖Fig.2 Effects of adding amino acid protein nutrient on the growth of three green microalgae (16 ℃)(a)：Histogram of cell concentrations of three green microalgae after 12 d;(b),(c) and (d)：Growth curves of Chlorella sp., S.obliquus and Oocystis sp.,during 12 d culture period

圖3 添加氨基酸蛋白營(yíng)養(yǎng)液對(duì)3 種綠藻生長(zhǎng)的影響(19 ℃).(a)：經(jīng)過(guò)12 d 培養(yǎng)期的3 種綠藻細(xì)胞濃度柱狀圖；(b)、(c)及(d)：12 d 培養(yǎng)期內(nèi)小球藻、斜生柵藻及卵囊藻的生長(zhǎng)曲線圖Fig.3 Effects of adding amino acid protein nutrient on the growth of three green microalgae (19 ℃).(a)：Histogram of cell concentrations of three green microalgae after 12 d;(b),(c) and (d)：Growth curves of Chlorella sp., S.obliquus and Oocystis sp.,during 12 d culture period

圖4 添加氨基酸蛋白營(yíng)養(yǎng)液對(duì)3 種綠藻生長(zhǎng)的影響(22 ℃).(a)：經(jīng)過(guò)12 d 培養(yǎng)期的3 種綠藻細(xì)胞濃度柱狀圖；(b)、(c)及(d)：12 d 培養(yǎng)期內(nèi)小球藻、斜生柵藻及卵囊藻的生長(zhǎng)曲線圖Fig.4 Effects of adding amino acid protein nutrient on the growth of three green microalgae (22 ℃).(a)：Histogram of cell concentrations of three green microalgae after 12 d;(b),(c) and (d)：Growth curves of Chlorella sp., S.obliquus and Oocystis sp.,during 12 d culture period

圖5 添加氨基酸蛋白營(yíng)養(yǎng)液對(duì)3 種綠藻生長(zhǎng)的影響(25 ℃).(a)：經(jīng)過(guò)12 d 培養(yǎng)期的3 種綠藻細(xì)胞濃度柱狀圖；(b)、(c)及(d)：12 d 培養(yǎng)期內(nèi)小球藻、斜生柵藻及卵囊藻的生長(zhǎng)曲線圖Fig.5 Effects of adding amino acid protein nutrient on the growth of three green microalgae (25 ℃).(a)：Histogram of cell concentrations of three green microalgae after 12 d;(b),(c) and (d)：Growth curves of Chlorella sp., S.obliquus and Oocystis sp.,during 12 d culture period

圖6 添加氨基酸蛋白營(yíng)養(yǎng)液對(duì)3 種綠藻生長(zhǎng)的影響(28 ℃).(a)：經(jīng)過(guò)11 d 培養(yǎng)期的3 種綠藻細(xì)胞濃度柱狀圖；(b)、(c)及(d)：11 d 培養(yǎng)期內(nèi)小球藻、斜生柵藻及卵囊藻的生長(zhǎng)曲線圖Fig.6 Effects of adding amino acid protein nutrient on the growth of three green microalgae (28 ℃).(a)：Histogram of cell concentrations of three green microalgae after 11 d;(b),(c) and (d)：Growth curves of Chlorella sp., S.obliquus and Oocystis sp.,during 12 d culture period

圖7 添加氨基酸蛋白營(yíng)養(yǎng)液對(duì)3 種綠藻生長(zhǎng)的影響(31 ℃).(a)：經(jīng)過(guò)12 d 培養(yǎng)期的3 種綠藻細(xì)胞濃度柱狀圖;(b)、(c)及(d)：12 d 培養(yǎng)期內(nèi)小球藻、斜生柵藻及卵囊藻的生長(zhǎng)曲線圖Fig.7 Effects of adding amino acid protein nutrient on the growth of three green microalgae (31 ℃).(a)：Histogram of cell concentrations of three green microalgae after 12 d;(b),(c) and (d)：Growth curves of Chlorella sp., S.obliquus and Oocystis sp.,during 12 d culture period

相對(duì)于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如葡萄糖或尿素，溫度對(duì)小球藻細(xì)胞生長(zhǎng)的影響更大，最適宜的溫度在25～30 ℃之間[24]，本研究中的小球藻適宜溫度寬度相對(duì)得到擴(kuò)展(19～31 ℃)，是氨基酸蛋白營(yíng)養(yǎng)液的功效。

3.2 不同營(yíng)養(yǎng)液濃度對(duì)3 種綠藻生長(zhǎng)的影響

營(yíng)養(yǎng)液的濃度是決定細(xì)胞群體生長(zhǎng)的關(guān)鍵，不同營(yíng)養(yǎng)液濃度的設(shè)計(jì)的目的是期望為實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程提供使用劑量參考。圖2～7 的(b、c、d)分圖分別顯示的是3 種綠藻在4 種濃度(0、10、100 及1 000 mg·L-1)培養(yǎng)液施用后的生長(zhǎng)曲線，不同濃度營(yíng)養(yǎng)液產(chǎn)生的細(xì)胞群體生長(zhǎng)促進(jìn)程度不同。

對(duì)于小球藻，除低溫16 ℃實(shí)驗(yàn)組之外，其他溫度實(shí)驗(yàn)組的3 個(gè)濃度梯度與促進(jìn)效果均呈現(xiàn)正相關(guān)性，濃度越高，促進(jìn)細(xì)胞群體生長(zhǎng)的程度越高。與之類似的是斜生柵藻，16 ℃實(shí)驗(yàn)組的最高濃度(1 000 mg·L-1)的促進(jìn)作用明顯小于中濃度(100 mg·L-1)，其他溫度的促進(jìn)效果均與濃度呈現(xiàn)正相關(guān)性。而卵囊藻實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖的效果與營(yíng)養(yǎng)液濃度沒(méi)有呈現(xiàn)明顯的相關(guān)性。

營(yíng)養(yǎng)添加物或者必需微量元素對(duì)于微藻細(xì)胞具有促進(jìn)生長(zhǎng)和增殖的作用，但濃度升高之后便使藻細(xì)胞受到脅迫造成負(fù)面影響：高濃度種畜禽糞便浸出液對(duì)小球藻生長(zhǎng)產(chǎn)生脅迫[25]，超過(guò)0.015 mmol·L-1的磷添加使得小球藻的生長(zhǎng)速度降低[26]，質(zhì)量濃度大于0.284 9 μg·L-1的微量元素Co2+對(duì)斜生柵藻產(chǎn)生不同程度的抑制效應(yīng)[27]。本研究中出現(xiàn)的抑制效應(yīng)部分出現(xiàn)在高濃度，相關(guān)機(jī)制可能與上述現(xiàn)象一致，為高濃度脅迫。有研究表明：隨著培養(yǎng)液鹽度的上升，卵囊藻的生物量顯著下降，推測(cè)原因可能是卵囊藻生長(zhǎng)所需滲透壓較低[28]，這與本研究中高濃度氨基酸營(yíng)養(yǎng)液反而抑制生長(zhǎng)的現(xiàn)象吻合。

3.3 單位時(shí)間增長(zhǎng)率的變化與分析

經(jīng)過(guò)11～12 d 培養(yǎng)之后的細(xì)胞濃度反映的是最終的增殖結(jié)果，每天的細(xì)胞群體生長(zhǎng)情況與單位時(shí)間增長(zhǎng)率可以反饋不同時(shí)間段的生長(zhǎng)情況，可以給生產(chǎn)實(shí)踐提供第一手的信息。表2 表示3 種綠藻在不同溫度和不同濃度氨基酸蛋白營(yíng)養(yǎng)液的培養(yǎng)下的比生長(zhǎng)率，清晰展示了每天的細(xì)胞群體增殖情況，同時(shí)也直觀地反映在生長(zhǎng)曲線圖上(圖2～7(b、c、d))。

生長(zhǎng)曲線的交叉反映了比生長(zhǎng)率的變化，19 ℃高濃度營(yíng)養(yǎng)液在第5 天的時(shí)候顯著增強(qiáng)了斜生柵藻的細(xì)胞生長(zhǎng)(圖3(c))，SGR(4-5)=1.84±0.37 和SGR(5-6)=1.08±0.13 相較于SGR(3-4)=0.06±0.33 明顯增加，并高于同期中、低濃度及對(duì)照組，相似的增殖轉(zhuǎn)折情況在斜生柵藻22～31 ℃實(shí)驗(yàn)組均有所體現(xiàn)。高濃度(1 000 mg·L-1)的營(yíng)養(yǎng)液添加并未在培養(yǎng)前期1～3 d 內(nèi)發(fā)生較大的生長(zhǎng)率變化，反而有一定的抑制作用，進(jìn)入4～5 d 之后開(kāi)始發(fā)生明顯的上升轉(zhuǎn)折直至11～12 d 的培養(yǎng)期結(jié)束，相同的情況也發(fā)生在小球藻的培養(yǎng)體系內(nèi)。這一段0～4 d 的培養(yǎng)期可以稱為高濃度營(yíng)養(yǎng)液調(diào)整適應(yīng)期，因此高濃度營(yíng)養(yǎng)液的添加效果在4 d 之后呈現(xiàn)可以指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐過(guò)程中施肥操作。低溫情況下，最適宜斜生柵藻的營(yíng)養(yǎng)液濃度是中濃度(100 mg·L-1)，然而中濃度并未出現(xiàn)調(diào)整適應(yīng)期，這是一個(gè)值得注意的地方。而卵囊藻的生長(zhǎng)曲線多重交叉現(xiàn)象，生長(zhǎng)曲線未能呈現(xiàn)規(guī)律性的變化，可能需要更進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)去解析卵囊藻與營(yíng)養(yǎng)液之間的相關(guān)性。

4 結(jié)論

本研究雙梯度實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：華太氨基酸蛋白營(yíng)養(yǎng)液的添加對(duì)小球藻和斜生柵藻的細(xì)胞增殖具有顯著的提升作用，除16 ℃低溫特殊情況之外高濃度(1 000 mg·L-1)的增殖效果最好；對(duì)小球藻表現(xiàn)出顯著的適宜溫度跨度擴(kuò)展，增加了小球藻在高、低溫時(shí)期淡水水體擴(kuò)繁的可能性；部分濃度的營(yíng)養(yǎng)液在特定溫度下對(duì)卵囊藻表現(xiàn)出一定程度的抑制效應(yīng)，需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)探究造成抑制效應(yīng)的機(jī)理。期望本研究的結(jié)果可以為華太氨基酸蛋白營(yíng)養(yǎng)液在淡水養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應(yīng)用提供藻種篩選、培育溫度及培養(yǎng)濃度等方面的參考。