類風濕關節炎患者血清白細胞介素-32、白細胞介素-17和白細胞介素-10表達水平及臨床意義

安 新，馮 超，高利常

(開灤總醫院檢驗科，河北 唐山 063000)

類風濕關節炎(Rheumatoid arthritis，RA)是一種慢性復雜難治的自身免疫性疾病，以外周對稱性多關節慢性炎癥為主要特征，患者關節腫脹疼痛、功能障礙，晚期出現不同程度的畸形，甚至導致嚴重殘疾[1-3]。我國RA發病率為0.32%～0.36%，且其發病機制尚不完全清楚。近年來研究[4]表明，促炎、抗炎細胞因子水平的異常變動及免疫調節功能紊亂是可能是引起RA的重要原因。白細胞介素(Interleukin，IL)-32是一種炎癥細胞因子，存在6種剪接變異體，主要功能是誘導IL-6、IL-1β、腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor，TNF)-α、促分裂原活化蛋白激酶和趨化因子等炎性介質的異常表達，在自身免疫方面起重要作用，可誘導T細胞凋亡，參與多種疾病過程[5-6]。IL-17是一種促炎細胞因子，主要功能就是誘發炎性反應因子和趨化因子的產生，促炎特性是其宿主保護能力的關鍵，但不受限制的IL-17信號與免疫病理學、自身免疫性疾病和癌癥進展相關[7-8]。IL-10是RA中一種重要的因子，由Th2細胞、巨噬細胞、B細胞等多種細胞合成并分泌，具有免疫刺激和免疫抑制雙重作用，在宿主防御過程中起重要的調節免疫應答作用，主要作用于白細胞[9]。超敏C反應蛋白(Hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP)是一種急性時相反應蛋白，臨床作為炎性標志物的檢測指標，機體發生損傷及炎癥反應時含量明顯升高，能迅速激活補體反應，促進吞噬作用[10]。本研究旨在探討RA患者血清中IL-32、IL-17、IL-10因子的表達情況，及三者與RA的臨床指標hs-CRP、類風濕因子(Rheumatoid factor，RF)、紅細胞沉降率(Erythrocyte sedimentation rate，ESR)、抗環瓜氨酸肽(Cyclic citrullinated peptide antibody，CCP)抗體的相關性，為免疫學上闡明RA發病機制及RA診治提供依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2020年4月至2021年4月期間臨床確診為RA的患者115例為RA組，其中男性25例，女性90例；年齡20～82歲，平均(56.52±20.38)歲。選取同期健康體檢者78例為對照組，其中男性18例，女性60例；年齡32～77歲，平均(55.2±19.79)歲。兩組患者年齡和性別比較差異無統計學意義(均P>0.05)。RA確診依據美國風濕病學會診斷標準，根據28個關節疾病活動度評估指數(DAS28)評分又分為兩個亞組：得分≥2.6分的病例為RA活動期組，共90例；得分<2.6分的病例為RA緩解期組，共25例。排除標準：①所有研究對象4周內無相關藥物治療史；②高血壓、糖尿病、血液病、腫瘤、心腦血管疾病者；③近1年受外傷或手術者；④伴有器官功能障礙者；⑤重度感染及其他免疫性疾病者。所有觀察對象均自愿參加本研究，并簽署知情同意書。本研究已通過開灤總醫院醫學倫理學委員會批準。

1.2 研究方法

1.2.1 樣本采集：采集所有研究對象空腹靜脈血2管。第一管采集5 ml，2500 g離心10 min，收集血清并分裝，-70 ℃保存待測。另一管采集1.6 ml全血，加3.8%檸檬酸鈉0.4 ml抗凝，用于ESR測定。

1.2.2 樣本檢測：血清IL-32、IL-17和IL-10用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測，試劑盒(批號依次為E11122602、E12013008和E120130576)購自上海百沃生物科技有限公司。抗CCP抗體試劑盒(批號：EC121001)購于上海科新生物技術股份有限公司，嚴格按說明書操作。采用BIO-RAD 680型酶標儀(美國伯樂)，測定450、630 nm波長處光密度(OD)值。以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，利用標準曲線法計算樣本濃度。RF和hs-CRP檢測均采用免疫比濁法，由全自動生化分析儀(日立7600-020)檢測。ESR使用動態血沉壓積測試儀測定(北京賽科希德科技發展有限公司SD-1000)。

2 結 果

2.1 兩組血清IL-32、IL-17、IL-10水平比較 見表1。RA組血清IL-32、IL-17、IL-10水平顯著高于對照組(均P<0.05)。

表1 兩組血清IL-32、IL-17、IL-10水平比較

2.2 RA患者不同時期及對照組血清IL-32、IL-17、IL-10水平比較 見表2。RA活動期組IL-32、IL-17、IL-10水平高于RA緩解期組及對照組(均P<0.05)。RA緩解期組與對照組IL-32、IL-17、IL-10水平比較，差異無統計學意義(均P>0.05)。

表2 RA患者不同時期及對照組血清IL-32、IL-17、

2.3 兩組患者抗CCP抗體、RF、ESR、hs-CRP水平比較 見表3。RA組患者抗CCP抗體、RF、ESR、hs-CRP水平高于對照組(均P<0.05)。

2.4 RA患者血清IL-32、IL-17和IL-10水平與抗CCP抗體、RF、ESR、hs-CRP相關性分析 見表4。Spearman相關性分析顯示，RA患者血清IL-32水平與抗CCP抗體、RF、ESR、hs-CRP呈正相關(均P<0.01)；RA患者血清IL-17水平與RF、hs-CRP呈正相關(均P<0.05)；RA患者血清IL-10水平與ESR、hs-CRP呈正相關(均P<0.05)。

表3 兩組患者抗CCP抗體、RF、ESR、hs-CRP水平比較

表4 RA患者血清IL-32、IL-17和IL-10水平與抗CCP抗體、RF、ESR、hs-CRP相關性

3 討 論

研究[4]發現，RA發病與機體內促炎、抗炎細胞因子的異常表達以及免疫調節異常相關，維持促炎細胞因子與抗炎細胞因子之間的平衡被認為是RA致病機制的核心。

IL-32存在廣泛，如NK細胞、T細胞、上皮細胞等，可誘發所在細胞產生多種細胞因子，參與炎癥級聯反應、細胞凋亡和細胞分化等過程，對機體正常免疫應答發揮調節作用[11]。近年來研究發現IL-32與RA發生密切相關。Joosten等[12]發現，RA患者滑膜組織中IL-32含量較高。桂明等[13]報道，RA患者外周血IL-32含量較高，并且升高水平與RA病情嚴重程度及骨質破壞程度密切相關，提示IL-32參與了RA病理過程。本研究發現，RA患者血清IL-32水平顯著高于對照組，活動期顯著高于緩解期，說明IL-32可能參與了RA的發生，并與疾病嚴重程度密切相關。同時，RA患者IL-32與抗CCP抗體、RF、hs-CRP、ESR水平呈正相關，并且隨著RA病情加重而表達增強，緩解期有所下降。由此可見，IL-32在RA疾病進程中具有抗炎功能，隨著病情減輕到消失，逐漸恢復正常水平。

有研究[14-15]表明，IL-17在損傷、生理應急和感染反應中，在維持健康方面具有重要的緩解和組織依賴性作用，且在RA炎癥形成中可能發揮了更為關鍵的作用。IL-17可能通過增強促炎及炎癥相關細胞因子表達擴大病灶范圍，進而導致關節炎的典型癥狀[16]。李茜等[17]發現，RA患者血清IL-17水平與RA病情嚴重程度高度相關，推斷IL-17可以作為判斷病情嚴重程度的指標。王小超等[18]研究發現，不同程度的骨關節損害患者血清IL-17水平有差異，與骨關節損害程度呈正比，提示IL-17早期參與了RA的發生，并在骨關節炎癥和損害過程中持續發生作用。本研究也發現，RA活動期組患者血清IL-17水平顯著高于RA緩解組和對照組，同時RA組患者血清IL-17水平與RF、hs-CRP呈正相關，說明IL-17在RA發病不同階段差異性表達，可以推斷其表達水平與骨關節損害程度相關。

IL-10既可發揮抗炎作用，也可發揮促炎作用[19]。黃建軍等[20]研究發現，RA患者病變關節的關節液中IL-10大量表達。朱江等[21]發現，IL-10低水平組RA動物關節腫大程度顯著高于IL-10高水平組，表明此過程中發揮抗炎作用。另有研究發現RA患者血清和滑液中IL-10表達水平均較高，但也有報道稱RA活動期患者IL-10水平降低[22]。本研究證實血清IL-10水平只有在RA活動期組升高，在RA緩解期組并不高。而且，IL-10水平只與ESR、hs-CRP水平呈正相關，提示IL-10此時可能具有促炎作用。由此推測，緩解期的IL-10可能兼有抗炎和促炎雙重作用。IL-10相對缺乏時，就無法抑制炎癥反應[23]。因此，通過免疫干預提高IL-10水平就能降低炎癥強度，對修復關節和保護軟骨有積極作用。

CRP在臨床上通常是區別細菌感染和病毒感染的一個重要指標。但其在正常檢測范圍內對低程度炎癥反應預測不靈敏。hs-CRP免疫比濁等技術使檢測靈敏度得到了很大提高。hs-CRP水平在RA診斷上意義重大[24]。本研究發現，RA活動期組患者hs-CRP水平顯著高于RA緩解期組及對照組，其血清水平與病情高度相關，說明hs-CRP在RA患者的療效及病情預后評估中有重要意義。

綜上所述，RA患者血清IL-32、IL-17、IL-10等細胞因子水平顯著升高，提示它們在一定程度上參與RA的病理過程；同時，活動期RA患者IL-32、IL-17、hs-CRP水平高于緩解期，說明上述因子與疾病嚴重程度及活動性高度相關，在RA炎癥及關節骨破壞過程中起重要作用，可作為判定RA病情的輔助指標。