腔隙性腦梗死患者miR-155表達與血管新生因子的關系及對病情進展的預測價值研究

王 燕，孫明麗

(1.鄭州工業應用技術學院醫學院，河南 鄭州 451150；2.新鄭市人民醫院神經內科，河南 新鄭 451100；3.鄭州市中心醫院神經內科，河南 鄭州 450000)

腔隙性腦梗死(LI)是由腦深部穿動脈閉塞引起的腦梗死，起病的早期癥狀不典型。有資料顯示，約20%LI患者發病后可能出現病情進行性加重即進展性LI，重者出現多區域缺血灶、癡呆，甚至死亡[1-2]。因此，在LI發病早期評估病情及預后能夠為臨床制定診療方案提供依據。微小RNA(miR)是一類長度18～25 nt的非編碼RNA，在心腦血管疾病中發揮多樣的生物學作用，其中miR-155在腦組織及心肌組織缺血缺氧過程中起到加重組織損傷的作用[3-4]。王興萍等[5]的研究證實，急性腦梗死發病過程中miR-155表達增加且靶向抑制血管新生基因缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)的表達。目前，miR-155在LI發病中的作用尚不清楚。因此，本研究將以LI患者為對象，探究外周血miR-155表達水平的變化及其與血管新生因子的關系、對病情進展的預測價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年6月至2020年12月在新鄭市人民醫院診斷為LI的患者作為LI組。納入標準：(1)符合LI的診斷標準[6]；(2)均采用簡易智力狀態檢查量表(MMSE)評價認知功能；(3)留取外周血標本及血清標本；(4)取得知情同意。排除標準：(1)有心肌梗死、腦出血、腦創傷等病史；(2)有精神疾病病史；(3)藥物或酒精依賴；(4)合并惡性腫瘤、自身免疫性疾病、急慢性感染。另選取同期體檢的健康志愿者作為對照組。LI組共78例，其中男45例，女33例；年齡46～68歲，平均(58.93±10.72)歲。對照組共90例，其中男56例，女34例；年齡45～65歲，平均(57.61±9.39)歲。兩組研究對象一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。本研究經過醫院醫學倫理委員會審批通過。

1.2方法

1.2.1外周血miR-155的檢測 在LI組患者入院后，在血常規采血管內采集LI組及對照組研究對象外周血3～5 mL，采用RNA提取試劑盒提取外周血中的RNA，采用cDNA第一鏈合成試劑盒將RNA反轉錄為cDNA，采用熒光定量PCR試劑盒對cDNA中的miR-155及U6進行擴增檢測，根據擴增曲線，以U6為內參計算miR-155的表達水平。

1.2.2血清HIF-1α、血管內皮生長因子(VEGF)的檢測 在LI組患者入院后，在生化采血管內采集LI組及對照組研究對象外周血3～5 mL，離心分離血清后采用酶聯免疫吸附法試劑盒(上海酶聯公司)檢測HIF-1α、VEGF的水平。

1.2.3認知功能的評估 采用MMSE量表評價LI組患者入院時的認知功能，得分大于27分為認知功能正常，>20～27分為輕度認知功能障礙，>10～20分為中度認知功能障礙，0～10分為重度認知功能障礙。

2 結 果

2.1LI組與對照組外周血miR-155表達水平比較 LI組患者外周血miR-155的表達水平[(1.23±0.30)]較對照組[(1.00±0.24)]明顯升高，差異有統計學意義(t=5.517，P<0.001)。

2.2LI組中不同認知功能患者外周血miR-155表達水平比較 LI組中重度、中度認知功能障礙患者的外周血miR-155表達水平高于認知功能正常患者，差異均有統計學意義(P<0.05)，輕度認知功能障礙患者的外周血miR-155表達水平與認知功能正常患者比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 LI組中不同認知功能患者外周血miR-155

2.3LI組中不同外周血miR-155表達水平患者血清HIF-1α、VEGF水平比較 LI組中外周血miR-155表達水平大于或等于中位數(1.21)患者的血清HIF-1α、VEGF水平低于miR-155表達水平小于中位數患者,差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 LI組中不同外周血miR-155表達水平患者血清HIF-1α、VEGF水平比較

2.4LI組中不同病情進展情況患者外周血miR-155表達水平比較 LI組中病情進展患者的外周血miR-155表達水平[(1.38±0.22)]高于病情未進展患者[(1.17±0.30)]，差異有統計學意義(t=2.870，P=0.005)。

2.5外周血miR-155預測LI患者預后的ROC曲線分析 外周血miR-155預測LI患者預后的ROC曲線見圖1，曲線下面積為0.717，95%可信區間0.598～0.836，差異有統計學意義(P=0.004)。

圖1 外周血miR-155預測LI患者預后的ROC曲線

3 討 論

LI主要由大腦前、中、后動脈和椎基底動脈深穿支梗死引起，梗死灶面積較小、直徑一般不超過1.5～2.0 cm，早期癥狀不典型、診斷難度大，隨著病情發展可出現進展。因此，早期診斷LI、評估LI病情進展的風險能夠為臨床制定診療方案提供依據。頭顱磁共振是目前診斷LI并評估病情的有效手段[7-8]，但檢查耗時較長、費用較高，在無癥狀LI患者中推廣使用存在較多限制。血液指標檢測具有取材方便、可重復性好的優點，目前尚缺乏能夠準確評估LI病情的血液標志物。本研究將以miR-155為切入點，將外周血miR-155作為評估LI病情的標志物，具體探究LI患者外周血miR-155表達的變化及臨床意義。

miR-155是一種在心腦血管系統中發揮多樣生物學作用的miR。XI等[9]和CHEN 等[3]的研究分別在心肌細胞缺氧復氧過程和心肌組織缺血再灌注過程中證實miR-155表達增加，抑制mIR-155能夠減輕心肌細胞及心肌組織的損害。ZHANG等[10]和SUOFU 等[11]的研究在腦組織缺血再灌注過程中檢測到miR-155表達增加，敲低或敲除miR-155可減輕缺血再灌注引起的腦損傷。除上述基礎實驗研究外，王興萍等[5]、ZHANG等[10]的臨床研究均證實急性腦梗死患者外周血miR-155的表達水平增加，且miR-155可作為評估急性腦梗死病情的標志物。本研究通過檢測LI患者外周血miR-155表達的變化可知：與對照組健康者比較，LI組患者外周血miR-155的表達明顯增加，表明miR-155的表達增加與LI的發病有關。

根據目前miR-155的相關研究，miR-155具有加劇心肌組織及腦組織損傷的作用。在LI的發病過程中，腦組織缺血損害可引起認知功能障礙[12-13]，本研究通過MMSE評分對患者的認知功能進行評價并分析其與miR-155表達的關系，結果顯示：與認知功能正常的LI患者比較，存在中度及重度認知功能障礙的LI患者外周血miR-155表達明顯增加，而存在輕度認知功能障礙的LI患者外周血miR-155表達無明顯變化，表明LI發病過程中miR-155表達增加與認知功能的減退有關，其可能機制是缺血缺氧腦組織中miR-155表達增加使組織損害加重，進而引起認知功能損害。

在腦組織缺血缺氧過程中，局部組織血管新生是重要的自身代償機制。HIF-1α是在缺氧條件下調控血管新生的重要分子，缺氧能夠刺激HIF-1α表達增加，進而啟動下游VEGF的表達并促進新生血管形成，在缺血缺氧局部建立側支循環，能夠在一定程度上對組織的缺血缺氧損傷進行代償[14-15]。王興萍等[5]和CHEN等[3]的臨床研究和基礎研究分別證實miR-155能夠靶向抑制HIF-1α，由此推測靶向抑制HIF-1α是miR-155參與腦組織及心肌組織缺血缺氧損害的相關機制。本研究通過分析LI患者血清中血管新生因子HIF-1α及VEGF的變化可知：隨著LI患者外周血miR-155表達增加，血清中HIF-1α及VEGF的水平降低，表明LI發病過程中miR-155表達增加可能對HIF-1α及VEGF具有抑制作用。

最后，本研究還對LI患者的病情進展進行了評估，通過比較入院時及入院后7 d時NIHSS評分的變化可知：共20例LI患者發生了病情進展，病情進展發生率為25.64%。進一步分析病情進展與miR-155表達的關系可知：病情進展LI患者入院時miR-155的表達水平高于病情未進展LI患者，且經ROC曲線分析證實miR-155的表達水平對LI病情進展具有預測價值。以上結果表明，miR-155高表達不僅與LI發病、認知功能損害有關，也與病情進展有關，可用于預測病情進展。

綜上所述，LI患者外周血miR-155表達增加與血管新生因子HIF-1α及VEGF減少、病情進展有關，檢測miR-155對病情進展具有預測價值。未來，miR-155有望作為診斷及評估LI病情的標志物。