基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接研究芪金合劑治療腎結(jié)石的作用機(jī)制

賀瀟 蔣偉平 劉起立 黃麗玲 毛璟弢 蔡蔚

〔摘要〕 目的 利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接技術(shù)預(yù)測(cè)芪金合劑（黃芪、金錢草）治療腎結(jié)石的作用機(jī)制及潛在靶點(diǎn)。方法 利用多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)獲取藥物有效成分、疾病靶點(diǎn)，取兩者交集基因;使用Cytoscape 3.8.0軟件構(gòu)建“中藥-成分-靶點(diǎn)”調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，將交集靶基因?qū)隨TRING數(shù)據(jù)庫(kù)，構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò);并對(duì)交集基因進(jìn)行拓?fù)浞治觥O和KEGG富集分析;將有效成分與核心基因分子對(duì)接，計(jì)算最低結(jié)合能，制作分子對(duì)接模型圖。結(jié)果 獲得黃芪有效成分21種，金錢草有效成分10種，黃芪作用靶點(diǎn)396個(gè)，金錢草作用靶點(diǎn)263個(gè)，交集基因109個(gè);根據(jù)KEGG富集分析結(jié)果獲得作用通路9條;“中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖中芪金合劑的有效成分為槲皮素、山柰酚、異鼠李素;槲皮素與核心基因分子對(duì)接結(jié)合穩(wěn)定。結(jié)論 芪金合劑可通過(guò)多靶點(diǎn)、多通路、多成分治療腎結(jié)石，槲皮素、山柰酚、異鼠李素可能是其治療作用的主要有效成分，其潛在的作用機(jī)制與炎癥、氧化應(yīng)激反應(yīng)、代謝、激素及免疫等通路密切相關(guān)，其作用靶點(diǎn)可能與AKT1、MAPK1、MAPK14、TNF、ESR1、JUN、FOS、TP53、MYC等多個(gè)基因有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 芪金合劑;腎結(jié)石;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);分子對(duì)接;作用機(jī)制

〔中圖分類號(hào)〕R285.5 ? ? ? 〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A ? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.12.015

Mechanism of Qijin Mixture in the Treatment of Kidney Stones Based on Network

Pharmacology and Molecular Docking

HE Xiao1， JIANG Weiping1， LIU Qili1， HUANG Liling1， MAO Jingtao1， CAI Wei2*

（1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 2. The First Affiliated Hospital of

Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007， China）

〔Abstract〕 Objective The mechanism and potential targets of Qijin Mixture [Huangqi （Astragali Radix）， Jinqiancao （Lysimachiae Herba）] in the treatment of kidney stones were predicted by network pharmacology and molecular docking technology. Methods Multiple databases were used to obtain drug active ingredients and disease targets， their intersection genes were selected; Cytoscape 3.8.0 software was used to construct a “traditional Chinese medicine-component-target” regulatory network， and the intersection target genes were imported into the STRING database to construct a protein-protein interaction network; and topological analysis， GO and KEGG enrichment analysis were performed for the intersection genes; the active ingredients and the core gene molecules were docked， the lowest binding energy was calculated， and a molecular docking model diagram was made. Results 21 kinds of active ingredients of Huangqi （Astragali Radix） were obtained， 10 kinds of active ingredients of Jinqiancao （Lysimachiae Herba） were obtained， 396 targets of Huangqi （Astragali Radix） were obtained， 263 targets of Jinqiancao （Lysimachiae Herba） were obtained， and 109 intersection genes were obtained. According to the results of KEGG enrichment analysis， 9 action pathways were obtained; the effective ingredients of Qijin Mixture in the network diagram of “traditional Chinese medicine-component-target” were quercetin， kaempferol and isorhamnetin; quercetin was stable in docking and binding with core gene molecules. Conclusion Qijin Mixture can treat kidney stones through multiple targets， multiple pathways， and multiple components. Quercetin， kaempferol and isorhamnetin may be the main active components of its therapeutic effect， and its potential mechanism of action is closely related to inflammation， oxidative stress response， metabolism， hormone and immune pathways， and its targets may be related to multiple genes such as AKT1， MAPK1， MAPK14， TNF， ESR1， JUN， FOS， TP53， MYC.

〔Keywords〕 Qijin Mixture; kidney stones; network pharmacology; molecular docking; mechanism

腎結(jié)石是泌尿外科常見(jiàn)的疾病之一，其發(fā)病率已達(dá)到1%～20%，呈逐年上升趨勢(shì)，治療后其復(fù)發(fā)率超過(guò)50%[1]，且復(fù)發(fā)結(jié)石患者再發(fā)的可能性更大[2]。現(xiàn)其手術(shù)治療多以微創(chuàng)為主，包括體外沖擊波碎石術(shù)、經(jīng)皮腎鏡取石術(shù)、輸尿管軟鏡取石術(shù)等。隨著腔鏡微創(chuàng)技術(shù)的不斷成熟，腎結(jié)石的治療手段也在不斷增多，但如何減少術(shù)后殘石、結(jié)石復(fù)發(fā)率高的現(xiàn)狀依然是眾多學(xué)者研究的熱點(diǎn)。

腎結(jié)石屬于中醫(yī)學(xué)“石淋”范疇，《諸病源候論·諸淋病候》中認(rèn)為“石淋者，淋出而石也。腎主水，水結(jié)則化為石，故腎客砂石”。中醫(yī)藥治療腎結(jié)石歷史悠久，且臨床療效顯著，芪金合劑是由三金排石湯化裁而來(lái)，組成成分為金錢草、黃芪兩味中藥，可有效改善上尿路結(jié)石術(shù)后癥狀，提高手術(shù)清石率，減少術(shù)后殘石及結(jié)石復(fù)發(fā)的可能性[3-4]。

現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，廣金錢草提取物可抑制腎組織草酸鈣結(jié)晶的形成與沉積，保護(hù)腎小管細(xì)胞，減輕擴(kuò)張程度，減輕腎間質(zhì)慢性炎癥，對(duì)腎功能起到保護(hù)作用[5]，黃芪具有調(diào)節(jié)免疫功能、改善炎癥反應(yīng)和微循環(huán)障礙、改善多器官損傷等作用[6]。

目前，對(duì)于金錢草、黃芪單藥藥理藥效研究較多，但對(duì)于二者聯(lián)合用藥的藥效研究較少，基于芪金合劑聯(lián)合應(yīng)用治療上尿路結(jié)石術(shù)后的臨床療效，故本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接技術(shù)探討芪金合劑治療腎結(jié)石的作用機(jī)制及潛在靶點(diǎn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 ?有效成分的獲取及靶點(diǎn)名稱規(guī)范化

以“金錢草”“黃芪”為檢索詞，通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP）（https：//old.tcmsp-e.com/tcmsp.php）進(jìn)行檢索，將口服生物利用度（oral bioa?

vailability， OB）≥30%、類藥性（drug-likeness， DL）≥0.18作為活性成分篩選條件，篩查出符合條件的活性成分和其相對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)。將物種設(shè)置為人，使用UniProt（http：//www.uniprot.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)將靶點(diǎn)基因名稱校正。

1.2 ?腎結(jié)石相關(guān)靶點(diǎn)的獲取

以“kidney stones”為檢索詞，通過(guò)GeneCards、OMIM、PHARMGKB、DrugBank等數(shù)據(jù)庫(kù)獲取腎結(jié)石相關(guān)靶點(diǎn)，利用R語(yǔ)言R-4.0.5軟件將腎結(jié)石的相關(guān)靶點(diǎn)取交集合并，將疾病靶點(diǎn)與藥物有效成分的作用靶點(diǎn)進(jìn)行映射取交集，制作Venn圖。

1.3 ?中藥-成分-靶點(diǎn)交互網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

利用Cytoscape 3.8.0軟件構(gòu)建“中藥-成分-靶點(diǎn)”調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，此網(wǎng)絡(luò)圖中，節(jié)點(diǎn)代表關(guān)鍵化合物和靶點(diǎn)，邊代表節(jié)點(diǎn)之間相互作用的關(guān)系。

1.4 ?蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)與拓?fù)浞治?/p>

考慮到交集靶基因之間的相互作用，將其導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string-db.org/cgi/input.pl），物種選擇“人類”，并以互動(dòng)分?jǐn)?shù)“>0.9”的評(píng)分篩選蛋白的相互作用關(guān)系，隱藏離散點(diǎn)，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)。利用Cytoscape 3.8.0軟件，下載插件Cyto-NCA，根據(jù)其網(wǎng)絡(luò)中心度進(jìn)行拓?fù)浞治觥?/p>

1.5 ?GO和KEGG富集

利用R語(yǔ)言R-4.0.5軟件及DOSE、clusterProfiler、enrichplot、pathview等程序包對(duì)交集基因進(jìn)行GO、KEGG富集分析，選擇顯著富集的的生物過(guò)程（biological process， BP）、細(xì)胞組分（cell component， CC）、分子功能（molecular function， MF）前10項(xiàng)繪制柱狀圖。選擇顯著富集的前30條通路繪制氣泡圖。

1.6 ?分子對(duì)接

選擇“中藥-成分-靶點(diǎn)”調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中含有最多相關(guān)靶基因的有效成分，利用PubChem CID數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）下載有效成分的3D結(jié)構(gòu)。選擇交集基因拓?fù)浞治龅暮诵幕颍肞DB數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www1.rcsb.org/）下載核心基因相關(guān)蛋白的3D結(jié)構(gòu)。使用AutoDock Tools 1.5.6軟件為受體蛋白添加氫原子和設(shè)置對(duì)接參數(shù)，所有配體和受體文件均保存為pdbqt格式。使用Autodock Vina軟件進(jìn)行分子對(duì)接，并計(jì)算最低結(jié)合能，使用PyMol軟件生成分子對(duì)接模型圖。

2 結(jié)果

2.1 ?活性成分和靶基因的篩選

在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中，以O(shè)B≥30%、DL≥0.18為條件進(jìn)行篩選，得到活性成分共30種，黃芪甲苷雖不滿足上述OB值與DL值的篩選條件，經(jīng)查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)[6]，黃芪甲苷為黃芪的主要活性成分，予以補(bǔ)充，故黃芪的活性成分有21種，金錢草11種（見(jiàn)表1）。將有效成分對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)利用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)，選擇人的已證實(shí)的數(shù)據(jù)進(jìn)行基因名稱標(biāo)準(zhǔn)化，最終獲得659個(gè)靶點(diǎn)，其中黃芪396個(gè)、金錢草263個(gè)。

2.2 ?“中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

如圖1所示，藥物作用靶點(diǎn)與腎結(jié)石的靶點(diǎn)基因交集為109個(gè)。將中藥、有效成分、交集靶點(diǎn)基因?qū)隒ytoscape 3.8.0軟件中，設(shè)置節(jié)點(diǎn)與邊線將其相互關(guān)系繪制成可視化“中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖（圖2）。黃芪與金錢草均含有的有效成分為槲皮素（MOL000098）、山柰酚（MOL000422）、異鼠李素（MOL000354），他們分別與84、31、16個(gè)靶基因相關(guān)。其中關(guān)聯(lián)度較高的靶基因?yàn)镻TGS2基因（16個(gè)節(jié)點(diǎn)），其次是NCOA2、HSP90AB1、PRSS1、ESR1、MAPK14、JUN、AKT1、TNF、TP53、MAPK1、FOS、MYC、RB1等。

2.3 ?PPI網(wǎng)絡(luò)和拓?fù)浞治?/p>

通過(guò)STRING數(shù)據(jù)庫(kù)獲PPI網(wǎng)絡(luò)見(jiàn)圖3，共98個(gè)蛋白質(zhì)節(jié)點(diǎn)和377條邊。利用Cytoscape插件CytoNCA進(jìn)行拓?fù)浞治觯x擇相關(guān)指標(biāo)：介度中心性 （betwee-nness centrality， BC）、接近中心性（closenesscentrality， CC）、借助度中心性（degree centrality， DC）、特征向量中心性（eigenvector centrality， EC）、局部邊連通性（localaverage connectivity， LAC）和網(wǎng)絡(luò)中心性（network centrality， NC），選擇大于所有指標(biāo)中位數(shù)的基因進(jìn)行篩選，經(jīng)過(guò)2次篩選，最終獲得核心基因10個(gè)，分別是ESR1、AKT1、JUN、FOS、MAPK1、MAPK14、TNF、TP53、MYC、RB1。見(jiàn)圖4。

2.4 ?GO和KEGG富集

GO富集分析從生物過(guò)程（BP）、細(xì)胞成分（CC）和分子功能（MF）3個(gè)水平闡明基因功能。BP主要涉及類固醇激素反應(yīng)、細(xì)胞化學(xué)應(yīng)激反應(yīng)、脂多糖反應(yīng)、對(duì)細(xì)菌起源分子的反應(yīng)、活性氧代謝過(guò)程、凋亡信號(hào)通路的調(diào)節(jié)、凋亡信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控等;CC主要與膜筏、膜微區(qū)、膜區(qū)、質(zhì)膜筏、囊泡內(nèi)腔、細(xì)胞質(zhì)囊泡腔、RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)復(fù)合物、分泌顆粒內(nèi)腔、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)復(fù)合物等相關(guān)。MF主要涉及核受體活性、配體激活、轉(zhuǎn)錄因子活性、DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子、RNA聚合酶II特異的DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子、類固醇激素受體活性、細(xì)胞因子活性、細(xì)胞因子受體結(jié)合、血紅素結(jié)合、受體配體活性、整聯(lián)蛋白結(jié)合等（圖5）。查閱國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)，黃芪-金錢草治療腎結(jié)石的作用機(jī)制主要與脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化、PI3K（磷脂酰肌醇-3-激酶）/Akt（蛋白激酶B）信號(hào)通路、流體剪切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化、AGE-RAGE（晚期糖基化產(chǎn)物-晚期糖基化終末產(chǎn)物受體）信號(hào)通路、MAPK（絲裂原活化蛋白激酶）信號(hào)通路、IL-17（白介素-17）信號(hào)通路、HIF-1（缺氧誘導(dǎo)因子-1）信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、雌激素信號(hào)通路等相關(guān)（圖6）。

2.5 ?分子對(duì)接

選擇中藥-成分-靶點(diǎn)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中含最多相關(guān)靶基因的有效成分作為小分子配體：槲皮素。選擇交集基因拓?fù)浞治龅暮诵幕颍篈KTI、ESR1、TNF、MAPK1、MAPK14、FOS、JUN、TP53、MYC、RB1共10個(gè)，分別與小分子配體進(jìn)行分子對(duì)接。使用Autodock Vina軟件進(jìn)行分子對(duì)接，并計(jì)算各個(gè)蛋白與小分子配體的最低結(jié)合能（表2），結(jié)合能小于0表示兩個(gè)分子自發(fā)結(jié)合，結(jié)合能越小，構(gòu)象越穩(wěn)定，使用PyMol軟件進(jìn)行可視化（圖7）。

3 討論

3.1 ?芪金合劑治療腎結(jié)石的關(guān)鍵靶點(diǎn)

本研究通過(guò)交集基因拓?fù)浞治霁@得AKT1、MAPK1、MAPK14、TNF、ESR1、JUN、FOS、TP53、MYC、RB1等核心基因。AKT1的缺失會(huì)加劇腎臟損害，其機(jī)制與AKT1參與腎缺血再灌注損傷中腎小管的凋亡和炎癥反應(yīng)有關(guān)[7]。ESR1通過(guò)調(diào)節(jié)脂肪組織的VEGF-A，增強(qiáng)血管生成，減少炎癥和改善脂肪組織功能[8]。Jun和Fos這2個(gè)原癌基因是MAPK信號(hào)通路的下游成員。c-Jun調(diào)節(jié)與動(dòng)脈粥樣硬化有關(guān)的各種載脂蛋白和促炎分子的轉(zhuǎn)錄[9]，在先天免疫中起重要作用[10]，c-Fos可激活先天免疫信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)以清除細(xì)菌，同時(shí)還參與了宿主防御機(jī)制[11]。MAPK1可以減輕脂多糖誘導(dǎo)的腎小球上皮細(xì)胞細(xì)胞損傷[12]。MAPK14可被促炎細(xì)胞因子激活，參與炎癥介質(zhì)細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1、IL-6、IL-1b）的生物合成，誘導(dǎo)相關(guān)炎癥蛋白。MYC原癌基因可通過(guò)對(duì)先天性和適應(yīng)性免疫效應(yīng)細(xì)胞以及免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的影響來(lái)調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境[13]。TNF是健康生物體和患病條件下免疫反應(yīng)的關(guān)鍵介質(zhì)，可增強(qiáng)巨噬細(xì)胞活化和抗原呈遞，通過(guò)不同機(jī)制調(diào)節(jié)免疫。TNF耐受性可能代表了一種涉及終止炎癥和防止過(guò)度或長(zhǎng)期炎癥的保護(hù)機(jī)制。否則，耐受性也可能是免疫麻痹的觸發(fā)因素，從而導(dǎo)致嚴(yán)重的炎癥性疾病，如敗血癥[14]。RB1是腫瘤抑制基因，經(jīng)查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)與本次研究無(wú)明顯關(guān)聯(lián)性。故芪金合劑治療腎結(jié)石與AKT1、MAPK1、MAPK14、TNF、ESR1、JUN、FOS、TP53、MYC等靶點(diǎn)相關(guān)。

3.2 ?芪金合劑有效成分

“中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖中，芪金合劑的有效成分為槲皮素、山柰酚、異鼠李素。槲皮素可有效預(yù)防尿石癥，主要潛在機(jī)制包括利尿、解痙和抗氧化活性，以及對(duì)結(jié)晶、成核和晶體聚集的抑制作用[15]。槲皮素通過(guò)上調(diào)PI3K/AKT通路降低組織炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)[16]。還可下調(diào)脂多糖誘導(dǎo)的相關(guān)蛋白表達(dá)，減少血清中促炎因子的生成，改善膿毒血癥相關(guān)的急性腎損傷[17]。高尿酸血癥早期在腎臟尚未形成尿酸鹽沉積時(shí)亦導(dǎo)致腎損傷，但槲皮素降尿酸、抗炎、抗氧化的作用可以減少這種腎損傷[18]。

山柰酚具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗腫瘤和抗糖尿病等多種藥理作用[19]。山柰酚能減少腎臟中AGE積累和ROS（活性氧）產(chǎn)生所引起的線粒體凋亡[20]。山柰酚能減少ROS和亞硝酸鹽生成，減少尿液中草酸鈣晶體的形成，具有急性和長(zhǎng)期利尿作用以及保護(hù)腎臟的特性[21]，同時(shí)可減少草酸鈣晶體沉積和晶體誘導(dǎo)的腎氧化和炎癥損傷[22]。異鼠李素能夠減少ROS、脂質(zhì)堆積，有抗動(dòng)脈粥樣硬化、減少巨噬細(xì)胞凋亡的作用，其作用途徑與PI3K/AKT通路相關(guān)[23]，還可通過(guò)抑制TNF-α達(dá)到抗菌消炎作用[24]。故芪金合劑可通過(guò)上述有效成分發(fā)揮抗炎、抗氧化應(yīng)激反應(yīng)以及減少晶體代謝沉積、保護(hù)腎臟的作用從而治療腎結(jié)石。

3.3 ?芪金合劑作用通路

芪金合劑治療腎結(jié)石的作用通路可分為兩類：（1）炎癥與氧化應(yīng)激反應(yīng)通路：PI3K-Akt信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路;（2）免疫、代謝與激素相關(guān)通路：脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化、AGE-RAGE信號(hào)通路、雌激素信號(hào)通路。PI3K/Akt信號(hào)通路的失活抑制了腎結(jié)石中腎小管上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)展和草酸鈣晶體的形成[25]，對(duì)腎草酸鈣晶體誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡也有抑制作用[26]。MAPK信號(hào)通路介導(dǎo)了草酸鈣-水晶體誘導(dǎo)的晶體黏附變化[27]，抑制MAPK磷酸化，增強(qiáng)Akt磷酸化，可減輕腎小管上皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷和凋亡，達(dá)到減少腎結(jié)石形成的可能性[28]。TNF、IL-17信號(hào)通路與炎癥反應(yīng)有關(guān)，其中，IL-17信號(hào)通路在對(duì)損傷、生理應(yīng)激和感染的反應(yīng)中維持健康方面具有重要作用[29]。TNF信號(hào)通路不僅介導(dǎo)多種炎癥反應(yīng)，同時(shí)參與免疫應(yīng)答。HIF-1是細(xì)胞對(duì)缺氧適應(yīng)性反應(yīng)的主要調(diào)節(jié)因子，在調(diào)節(jié)腎小管上皮細(xì)胞的多個(gè)細(xì)胞過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，包括凋亡、自噬、炎癥和代謝模式改變[30]。炎癥效應(yīng)機(jī)制在脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化通路中亦發(fā)揮著重要作用，嚴(yán)重的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可誘導(dǎo)下游TNF等炎癥細(xì)胞因子釋放，從而引發(fā)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷后的炎癥細(xì)胞活化和一系列慢性炎癥反應(yīng)[31]。AGEs通過(guò)與rage受體結(jié)合，通過(guò)產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子、ROS等來(lái)誘導(dǎo)炎癥和免疫抑制，這些病理分子導(dǎo)致腎系膜、內(nèi)皮和足細(xì)胞損傷[32]。雌激素信號(hào)可起到保護(hù)腎臟的作用[34]，雌激素β受體可通過(guò)減少草酸合成及草酸引起的腎臟氧化應(yīng)激損傷，從而抑制草酸鈣結(jié)石的形成[33]。故芪金合劑可通過(guò)上述通路起到抗炎、抗氧化應(yīng)激損傷、減少結(jié)石晶體的代謝沉積、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫等作用治療腎結(jié)石。

本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析了芪金合劑的有效成分，并對(duì)藥物作用靶點(diǎn)及通路進(jìn)行功能分析，以分子對(duì)接技術(shù)驗(yàn)證藥物有效成分與腎結(jié)石靶點(diǎn)的結(jié)合，預(yù)測(cè)芪金合劑治療腎結(jié)石潛在的作用機(jī)制與炎癥、氧化應(yīng)激反應(yīng)、代謝、激素及免疫等通路密切相關(guān)，其作用靶點(diǎn)與AKT1、MAPK1、MAPK14、TNF、ESR1、JUN、FOS、TP53、MYC等多個(gè)基因有關(guān)，說(shuō)明芪金合劑可通過(guò)多靶點(diǎn)、多通路、多成分的途徑治療腎結(jié)石。腎結(jié)石的發(fā)病原因與多種因素相關(guān)，中醫(yī)理論中講究“異病同治”，有望在今后的研究中找到多種疾病的協(xié)同作用靶點(diǎn)，發(fā)揮中藥治療的最大效果。此外，通過(guò)本次研究，可對(duì)中藥復(fù)方的作用機(jī)制、有效成分提取、藥物溶石等方面進(jìn)一步深入到實(shí)驗(yàn)研究中。

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〔收稿日期〕2021-06-19

〔基金項(xiàng)目〕湖南中醫(yī)藥大學(xué)校級(jí)科研基金項(xiàng)目（2018XJJJ57）;湖南省教育科學(xué)規(guī)劃課題（XJK015BGD049）;湖南省科技創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目（2018SK51206）。

〔作者簡(jiǎn)介〕賀 ?瀟，女，在讀碩士研究生，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合臨床-泌尿外科。

〔通信作者〕*蔡 ?蔚，女，博士，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：2240430455@qq.com。