VITEK2Compact微生物自動鑒定儀對布魯氏菌誤鑒定的原因及局限性

梅小燕　黃靜　溫小云

[中圖分類號]R446.5 [文獻標識碼]A [文章編號]2096-5249（2021）19-0205-02

布魯菌病（Brucellosis）是由布魯菌Bru.ceZ入侵人體所誘發的一種多宿主感染的世界性人獸共患傳染病，常見與人類共同感染的動物類別包括牛、羊、豬等，其中，我國以羊感染為主。隨著布魯菌病人畜感染疫情在世界范圍內發生率的提高，對于該疾病的檢測和控制也逐漸引起了廣泛的關注。國家疾病監測系統的病例統計結果證實，我國人與人之間布魯菌病傳染病例有增加趨勢，其中以內蒙古、東北和西北等地區流行趨勢最為嚴重，部分其他區域的布魯菌病報告病例也有所增加，同時，布魯菌病的臨床表現負責程度較高，臨床特征復雜多變，且病情輕重不一，會對感染主體多個系統造成直接的損害。總體來看，特征性布魯菌病病例已經較為少見，因而該疾病的臨床診斷難度也逐漸增加，早期確診可能性逐漸降低。現階段，布魯菌病的防控形勢逐漸嚴峻，以往的布魯菌或生物型鑒定的主要基礎是單項特異性血清（A、M和R血清）凝集試驗、堿性復紅染料抑菌試驗、噬菌體裂解、HS、CO的生長要求等，這也是布魯菌病鑒定診斷的金標準，但這些檢驗方法操作時間較長且較為復雜。隨著PCR檢測方法應用率的提高，其在BCSP31屬基因與AMOS種/型基因檢測中的應用率也有所提升，但過程較為復雜，容易受到操作條件的限制，因而應用價值較低。本研究對VITEK2Compact微生物自動鑒定儀對布魯氏菌誤鑒定的原因及局限性進行了分析。

1資料和方法

1.1菌株來源 本研究回顧分析2例無確切原因體溫異常升高患者的臨床資料，對其實施血培養菌株分離檢查。

1.2儀器與試劑 檢查設備：BD9240血培養儀和血培養瓶;480PCR擴增儀;VITEK2 Compact微生物鑒定儀;GN鑒定卡和試劑盒;TakaRa 16S rRNA Bacterial Identification PCR Kit 16S rRNA試劑盒。

1.3菌株分離鑒定 血培養檢測結果為陽性的標本置于5%羊血瓊脂平板上，通過恒溫箱進行處理，動態監測其菌落生長形態和進度，通過革蘭染色法用VITEK2 Compact微生物鑒定儀上機鑒定。

1.416SrRNA檢測和測序 按流程實施16Sr RNA基因擴增，并對結果實施測序處理。

1.5統計學分析 文中數據借助版本為SPSS 22.0的軟件包進行統計分析。

2結果

2.1菌株2次重復鑒定過程和結果比較 16SrRNA檢測數據與細菌鑒定結果有所不同，完成首次菌株檢測后可再次實施微生物檢測和GN鑒定。數據差異比較無統計學意義（P>0.05）。如表1所示。

2.2菌株樣本檢測指標結果比較 對菌株樣本分別使用國產機復合RBT、SAT和MRT抗原進行檢測，檢測結果符合率差異存在統計學意義（P<0.05）。如表2所示。

3討論

布魯菌病是一種牧區臨床常見疾病類型，且廣大城市和農村地區，該疾病的發生率也呈現出上升趨勢，布魯菌病的臨床表現極為復雜，常見特征表現為間斷性發熱，而其他明顯癥狀和特征則較為少見，因而臨床上容易與其他發熱特征疾病相混淆，只有在患者感染標本中確定分理處布魯菌后才可以確診，而疾病的誤診和漏診也會給患者造成嚴重的不良后果。臨床上針對于布魯菌病，除了結合發熱癥狀進行診斷外，還會實施骨髓、血液、腦脊液、乳汁、尿液等檢查。從以往的臨床研究結果來看，針對于布魯菌病常見的誤鑒定原因在于：血培養分離凍存傳代菌株以及原代培養細菌生長速度等特性的差異，造成部分生化反應速度差異，最終造成誤鑒定的結果，2次生化結果陽性數量存在差異能夠為這一判斷結果提供支持，另一方面，VITEK2鑒定儀GN卡使用的樣品量較少，因而容易影響結果和加樣讀數。更加值得關注的是，自動細菌鑒定儀無法在固定的時間獲得檢驗結果，這也是結果出現差異的一項主要影響因素，只要已檢測到的生化反應組合模式與數據庫中某種細菌編碼一致就會自動終止鑒定，獲得監測結果，對于生長較為緩慢及生化反應模式相近的的細菌種類，誤鑒定概率較高。

醫學報道證實，約有25%的實驗室獲得性細菌性感染是由布魯氏菌所導致的，布魯氏菌能夠經氣溶膠途徑的感染劑量為10～100個藺體。從以往的病例分析資料來看，未戴手套、口罩等不當操作是導致布魯菌感染的主要原因，盡管布魯菌病感染的具體作用機制尚未得到明確的分析，但從以往的研究結果來看，布魯氏菌的培養等操作應按照3級生物安全實驗操作的標志開展，首先對于疑似布魯菌病的患者，需要嚴格執行這些操作規范，但是，從實際的臨床運行結果來看，全部的布魯菌病感染源都在于關節病變患者的培養物，外科醫生只有在患者的關節修復手術過程中，確定存在關節腔內感染，并實施臨床標本培養檢查，才能夠確定出類似革蘭陰性菌的布魯菌。以往的布魯菌病患者的微生物實驗室檢驗結果均為被動檢驗，因而臨床上通常建議逐步完善細菌鑒系統生產廠家的系統數據庫，在細菌鑒定過程中，對于人蒼白桿菌、解脲寡源桿菌、苯丙酮酸莫拉菌、支氣管敗血鮑特菌、動物潰瘍伯格菌、莫拉菌屬或流感嗜血什菌生物等部分菌種做出系統完善的報道，并在鑒定儀器系統中提示需與行魯氏菌鑒別，同時，在實施微生物實驗室檢驗過程中，檢驗人員需要采取更加安全有效的防護措施，以降低布魯氏菌感染所致的實驗室獲得性感染問題。

VITEK2 Compact微生物自動鑒定儀對布魯氏菌誤鑒定錯誤的原因分析：兩次鑒定數據結果證實，檢驗鑒定為馬耳他布魯氏菌中，僅有1例出現陽性生化反應，共表現出9種生化反應，而這也是兩次進行流程和方法完全相同鑒定為布魯氏菌實驗，但最紅陽性反應項目數量不相同的主要原因。Panagopoulos（加拿大）等人對四年中收治的4例蒙特利爾兒童進行了血培養霍氏鮑特菌分離實驗，結果亨氏，API20E、NE檢驗準確性不足，VITEK2 Compact微生物檢測結果可以確定為洛菲不動桿菌。臨床研究對VITEK2 CompactGN鑒定卡對1株玫瑰假單胞菌反復進行3次鑒定，結果證實，皮氏羅爾斯頓菌、支氣管炎鮑特菌等低鑒定度細菌。本研究結果說明鑒定結果存在一定的誤差，其原因在于：凍存傳代菌株和血培養分離原代培養細菌生長速度不同，造成鑒定結果的差異。另一方面，VITEK2 Compact微生物自動鑒定儀以及GN鑒定卡所涉及的樣品數量相對較少，因而樣本和結果的讀數也會會受到直接的影響。

綜上所述，VITEK2Compact微生物自動鑒定儀對于布魯氏菌鑒定存在一定的誤鑒定風險，需要對相關影響因素進行控制，提高檢測準確性。