‘平陽黃湯’對高脂飲食大鼠腸道屏障和腸道菌群的影響

歐陽建，李秀平，周 方，盧丹敏，黃建安，曾呈理，謝前途，鐘維標，劉仲華,*

（1.國家植物功能成分利用工程技術研究中心，湖南農業大學 茶學教育部重點實驗室，植物功能成分利用省部共建協同創新中心，湖南 長沙 410128；2.浙江省平陽縣農業農村局，浙江 平陽 325400；3.浙江子久文化股份有限公司，浙江 平陽 325400）

肥胖是指可損害健康或增加死亡率的過量脂肪累積，與高血脂、糖尿病和非酒精性脂肪肝等代謝性疾病的發展密切相關[1]。隨著人們飲食習慣的改變和生活水平的提高，高脂食物攝入的增加已成為肥胖及非酒精性脂肪肝等代謝性疾病發生的主要原因。長期高脂飲食誘導肥胖與腸道菌群關系密切，高脂飲食干預可降低腸道菌群的豐富度和多樣性，改變機體的氧化還原狀態，損傷腸道黏膜屏障功能，最終誘導肥胖的發生[2]。

茶作為一種天然植物健康飲料，與腸道菌群和腸道屏障有著復雜的相互作用，能有效調節肥胖和相關代謝紊亂。微生物能將茶葉中的多酚和多糖等物質分解為短鏈脂肪酸和酚酸等代謝物，增強腸道屏障作用，有效發揮抗肥胖功能；同時，茶葉中的代謝物能夠調節腸道微生物的結構和功能，間接參與宿主的能量吸收與生理代謝，從而有效調控肥胖[3-5]。然而，茶葉調節腸道菌群和腸道屏障與預防肥胖的機制目前仍不清楚。

黃茶是我國特有的茶類，其獨特的悶黃工藝形成了干茶金黃、湯色杏黃、葉底嫩黃的“三黃”品質[6]。目前有研究表明，君山銀針和黃大茶等在調節血脂和改善肝組織損傷等方面具有良好效果[7-8]，卻鮮有研究涉及黃茶調節肥胖與腸道屏障和菌群之間的關系?！疥桙S湯’作為黃茶中的代表性名茶，對其健康功效研究較少，其調節肥胖的效果目前更是鮮有研究。因此，本實驗擬選取有代表性的‘平陽黃湯’為材料，建立肥胖模型，評估‘平陽黃湯’調控高脂飲食大鼠肥胖的效果及與腸道屏障和菌群的關系。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

SPF級4～5 周齡雄性SD大鼠40 只，體質量（180±10）g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，實驗動物生產許可證號：SCXK（湘）2019-0004。所用脂肪質量分數60%高脂飼料（編號23300，供能21.32 kJ/g）和脂肪質量分數10%正常飼料（編號23302，供能15.05 kJ/g）購自江蘇南通特洛菲飼料有限公司，主要成分包括玉米淀粉、豆油、蔗糖、纖維素等。

茶樣‘平陽黃湯’由平陽縣農業農村局提供。

甘油三酯（triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽（glutathione，GSH）、過氧化氫酶（catalase，CAT）檢測試劑盒 南京建成生物工程研究所有限公司；瘦素（leptin，LEP）、脂聯素（adiponectin，ADP）、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor α，TNF-α）、白細胞介素6（interleukin 6，IL-6）、脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）酶聯免疫吸附測試試劑盒 武漢華美生物工程有限公司；乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）抗原修復液、CY3-TSA、自發熒光猝滅劑等武漢塞維爾公司；21733-1-AP閉鎖小帶蛋白1（zonula occludens 1，ZO-1）抗體 美工Proteintech公司；閉鎖蛋白（ab216327）抗體 美國Abcam公司；其他常規試劑均為國產分析純。

1.2 儀器與設備

Varioskan Flash多功能酶標儀、Modulyod-230冷凍干燥機 美國Thermo公司、DHP-500電熱恒溫培養箱北京市永光明醫療儀器有限公司；H1650R臺式高速冷凍離心機 湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司；MIKRO 22R冷凍離心機 德國Hettich公司；UV-2550紫外分光光度計 日本島津公司；Eclipse C1正置熒光顯微鏡日本尼康公司。

1.3 方法

1.3.1 茶樣干粉制備

取適量‘平陽黃湯’茶樣，按照茶水比1∶10在沸水浴中浸提20 min，直接過濾，冷卻后于－20 ℃冰箱中預凍12 h后真空冷凍干燥48 h。收集茶粉，密封包裝，－20 ℃備用。

1.3.2 ‘平陽黃湯’感官評價和理化成分測定

參照GB/T 23776—2018《茶葉感官審評方法》對茶樣進行感官審評，對茶葉的外形、湯色、香氣和滋味等感官品質進行特征描述；水浸出物質量分數按GB/T 8305—2002《茶 水浸出物測定》測定；茶多酚質量分數按GB/T 8313—2018《茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法》測定；游離氨基酸質量分數按GB/T 8314—2013《茶 游離氨基酸總量的測定》測定；可溶性糖質量分數按蒽酮-硫酸比色法測定。

1.3.3 動物實驗設計

所有動物實驗方案經湖南農業大學動物實驗中心批準并符合動物倫理規范。將40 只SPF級SD大鼠在（25±2）℃條件下適應性飼養1 周后，稱體質量，隨機分為5 組：正常飲食（ND）組、高脂模型（HFD）組、‘平陽黃湯’低劑量（HFD-L）組、‘平陽黃湯’中劑量（HFD-M）組、‘平陽黃湯’高劑量（HFD-H）組，每組8 只。參照實驗室前期研究[9]，將制備所得茶粉按高、中、低劑量分別為300、150、75 mg/kgmb進行灌胃處理。大鼠在籠內自由飲水進食，每日固定時間對ND組大鼠灌胃超純水，飼喂正常飼料；HFD組灌胃超純水，飼喂高脂飼料；‘平陽黃湯’組灌胃用超純水溶解相應劑量的‘平陽黃湯’水提物，飼喂高脂飼料，每周稱體質量，并記錄體質量和攝食量，建立肥胖預防模型。

‘平陽黃湯’持續灌胃8 周后，將待取樣的大鼠放置于干凈、鋪有無菌濾紙的籠內，待其排便后立即收集糞便樣本，置于無菌EP管內，－80 ℃冰箱保存用于后續的微生物分析。取樣完畢后大鼠禁食12 h，每只大鼠注射1%戊巴比妥鈉麻醉，主動脈取血。收集各組大鼠脂肪、肝臟和腸道，－80 ℃保存，備用。

1.3.4 大鼠身體指標和進食量測定

大鼠體質量每周稱量1 次，另外每日給各組大鼠添加新鮮飼料，并于第2天同一時間稱取剩余飼料量，計算每日攝食量，并按式（1）計算能量轉化率。

用4 ℃生理鹽水沖洗大鼠附睪脂肪和腎周脂肪表面血漬，濾紙吸干表面水分后稱質量，按公式（2）計算脂肪指數。

1.3.5 血清生化指標測定

主動脈取血于EP管中，在4 ℃下3 500 r/min離心10 min，收集上層血清，放置于－80 ℃冰箱中保存。按照試劑盒說明書測定血清中TG、TC、GSH、LEP、ADP、TNF-α、IL-6水平以及SOD、CAT、LPS的活力。

1.3.6 大鼠肝臟TG和TC水平測定

準確稱取肝臟組織質量，加入9 倍體積的無水乙醇于冰水浴條件下機械研磨，3 000 r/min離心后取上清液測定肝臟勻漿TG和TC含量，結果以每克蛋白計。

1.3.7 大鼠肝臟和結腸組織切片病理學觀察

取大鼠肝臟和結腸的相同部位于4%多聚甲醛溶液中固定，然后對肝臟進行蘇木精-伊紅（hematoxylineosin，HE）和油紅O染色，對結腸進行HE和過碘酸雪夫染色（periodic acid-Schiff，PAS）染色，顯微鏡下觀察組織病理學變化并拍照[10]。

1.3.8 免疫熒光法檢測結腸組織緊密連接蛋白的表達水平

將石蠟包埋的結腸組織切片脫蠟、水化，置于EDTA修復緩沖液中抗原修復，封閉內源性CAT，甩干磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS），胎牛血清封閉30 min，加入第1種一抗4 ℃孵育過夜，玻片于PBS中洗滌（5 min、3 次），加入對應的辣根過氧化物酶標記的二抗，室溫孵育50 min，玻片于PBS中洗滌（5 min、3 次），加CY3-TSA孵育10 min后，玻片于PBS中洗滌（5 min、3 次），進行微波處理除去已結合到組織上的一抗、二抗；然后加入第2種一抗于濕盒內4 ℃孵育過夜，玻片于PBS中洗滌（5 min、3 次），甩干后在圈內滴加與一抗相應種屬的熒光二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50 min，4’,6-二脒基-2-苯基吲哚（4’,6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）復染細胞核，自發熒光猝滅，封片，同一背景視野下鏡檢拍照。用Image-pro Plus 6.0軟件測定陽性區域的平均積分光密度（integral optical density，IOD）。

1.3.9 糞便微生物菌群分析

將收集的大鼠糞便進行液氮處理后，采用十二烷基硫酸鈉方法對樣本的基因組DNA進行提取，并檢測其濃度和純度，然后使用稀釋后的基因組DNA為模板，以細菌正向引物（341F：CCTACGGGNGGCWGCAG）和反向引物（805R：GACTACHVGGGTATCTAATCC）對細菌16S rRNA基因V3～V4區進行聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）擴增，擴增產物經2%瓊脂糖凝膠進行電泳檢測，然后使用Illumina平臺測序（天根生化科技（北京）有限公司），所得序列使用Uclust v1.2.22軟件進行聚類得到操作分類單元（operational taxonomic units，OTU）[11]。在菌群OTU水平上計算Shannon指數和Simpson指數評估菌群多樣性，同時對物種豐度進行偏最小二乘法判別分析（partial least squares discriminant analysis，PLS-DA）及分類注釋。

1.4 數據處理與分析

采用SPSS 22統計軟件對數據進行分析處理，結果以平均值±標準差表示；采用方差分析和最小顯著性差異法檢驗進行差異顯著性分析，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結果與分析

2.1 ‘平陽黃湯’感官評價和理化成分分析結果

本實驗所選用‘平陽黃湯’樣品色澤黃褐較潤，有清香，湯色淺黃、明亮，滋味醇爽，葉底黃亮；其水浸出物、茶多酚、游離氨基酸和可溶性糖質量分數分別為42.29%、19.40%、5.27%和9.44%，基本符合黃茶的主要品質化學特征[12]。

2.2 ‘平陽黃湯’對高脂飲食大鼠體質量、進食量和脂肪質量的影響

由圖1A、B可知，大鼠經過8 周飼養后，HFD組大鼠體質量及其增長量極顯著高于ND組大鼠（P＜0.01），表明長期高脂飲食易使體質量增加；與HFD組相比，‘平陽黃湯’干預后，HFD-L、HFD-M和HFD-H組大鼠體質量增長量均極顯著降低（P＜0.01），其中HFD-M組與ND組接近，HFD-H組甚至低于ND組。

由圖1C、D可知，‘平陽黃湯’水提物對高脂飲食大鼠的日常食物攝入量和能量轉化率均有不同程度的抑制作用，隨著劑量的增加，其抑制作用增強。HFD-M和HFD-H組的日攝食量極顯著低于HFD組（P＜0.01）。

高脂飲食引起的肥胖往往伴隨脂肪組織的堆積，為此研究‘平陽黃湯’對高脂飲食大鼠脂肪組織的影響。由圖1E～H可知，與ND組相比，HFD組大鼠附睪、腎周脂肪的質量及脂肪指數均極顯著升高（P＜0.01）；與HFD組相比，‘平陽黃湯’水提物干預后，高脂飲食大鼠脂肪質量和脂肪系數均出現不同程度的下降，其中HFD-L、HFD-M和HFD-H組附睪和腎周脂肪質量以及HFD-H組附睪和腎周脂肪指數均極顯著降低（P＜0.01）。

圖1 ‘平陽黃湯’對高脂飲食大鼠體質量、攝食量和脂肪組織的影響Fig. 1 Effect of Pingyang yellow tea on body weights, food intake and adipose tissues in rats

2.3 ‘平陽黃湯’對高脂飲食大鼠血脂和肝臟脂質的影響

由圖2可知，與ND組相比，HFD組大鼠血清和肝臟TG、TC水平均極顯著升高（P＜0.01）；與HFD組相比，‘平陽黃湯’干預后，大鼠血清和肝臟TG、TC水平出現不同程度下降，其中HFD-H組大鼠血脂和肝臟脂質指標均極顯著下降（P＜0.01）。說明‘平陽黃湯’能有效調控高脂飲食引起的血脂水平紊亂和肝臟脂肪積累。

圖2 ‘平陽黃湯’對高脂飲食大鼠血脂和肝臟脂質的影響Fig. 2 Effect of Pingyang yellow tea on serum and liver lipids in HFD-fed rats

2.4 ‘平陽黃湯’對高脂飲食大鼠肝臟組織形態結構的影響

如圖3所示，與ND組相比，HFD組大鼠肝臟細胞排列紊亂，胞質空泡化，炎性細胞浸潤；肝臟內有大量脂質聚集。與HFD組相比，‘平陽黃湯’干預后，大鼠肝臟脂滴明顯減少，肝細胞脂肪變性程度和炎癥減弱，細胞排列較整齊，其中HFD-H組肝細胞排列整齊，沒有炎癥細胞浸潤，胞漿均勻。說明‘平陽黃湯’能有效調控高脂飲食引起的肝臟病變和脂質代謝紊亂。

圖3 各組大鼠肝臟HE和油紅O染色切片（×100）Fig. 3 HE-stained and oil red-stained sections of rat liver tissues from each treatment group (× 100)

2.5 ‘平陽黃湯’對高脂飲食大鼠血清脂肪因子、炎癥因子和氧化應激水平的影響

由圖4A、B可知，與ND組相比，HFD組大鼠血清LEP和ADP質量濃度均極顯著升高（P＜0.01）；與HFD組相比，‘平陽黃湯’干預后大鼠血清LEP質量濃度有不同程度的下降，其中HFD-L和HFD-M組LEP質量濃度有下降趨勢，但無顯著性變化（P＞0.05），HFD-H組LEP質量濃度極顯著下降（P＜0.01）；與HFD組相比，‘平陽黃湯’各干預組ADP質量濃度均極顯著下降（P＜0.01），且與ND組接近。這表明‘平陽黃湯’能有效緩解高脂飲食引起的血清脂肪因子水平升高。

由圖4C～H可知，與ND組相比，HFD組大鼠血清TNF-α、IL-6和LPS水平均極顯著升高（P＜0.01），血清SOD、CAT和GSH水平極顯著降低（P＜0.01），這表明高脂飲食易誘發大鼠全身性炎癥和氧化應激。與HFD組相比，‘平陽黃湯’干預后，大鼠血清TNF-α、IL-6和LPS水平呈不同程度的下降，其中HFD-M和HFD-H組的血清TNF-α、IL-6和LPS水平極顯著下降（P＜0.01）。與HFD組相比，‘平陽黃湯’干預后，大鼠血清SOD、CAT和GSH水平呈不同程度的升高，其中HFD-H組極顯著升高（P＜0.01）。這表明‘平陽黃湯’水提物能有效緩解高脂飲食誘發的全身性炎癥和氧化應激。

圖4 ‘平陽黃湯’對高脂飲食大鼠血清脂肪因子、炎癥因子和氧化應激水平的影響Fig. 4 Effect of Pingyang yellow tea on serum adipocytokines,inflammatory cytokines and oxidative stress levels in rats

2.6 ‘平陽黃湯’對高脂飲食大鼠結腸形態結構的影響

如圖5所示，與ND組相比，HFD組大鼠腸道細胞排列紊亂，絨毛破裂且存在大量炎性細胞浸潤；與HFD組相比，‘平陽黃湯’干預組大鼠結腸形態得到不同程度的改善，其中HFD-L組細胞排列較整齊，絨毛脫落減少，絨毛完整性高，基本沒有炎癥細胞浸潤。大鼠腸道PAS染色切片顯示，與ND組相比，HFD組腸道杯狀細胞明顯減少且分布不均；與HFD組相比，‘平陽黃湯’干預組結腸杯狀細胞數量均有不同程度的恢復，其中HFD-H組恢復效果明顯。這表明‘平陽黃湯’能有效改善高脂飲食大鼠的腸道形態結構。

圖5 大鼠結腸組織HE和PAS染色切片（×100）Fig. 5 HE-stained and PAS-stained sections of colon tissues from rats (× 100)

2.7 ‘平陽黃湯’對高脂飲食大鼠結腸組織腸道屏障的影響

腸道緊密連接蛋白主要位于腸道上皮細胞，是維持腸道完整性的重要部分。由圖6可知，與ND組相比，HFD組大鼠ZO-1和閉鎖蛋白的表達均極顯著下降（P＜0.01）；與HFD組相比，‘平陽黃湯’干預后，3 組高脂飲食大鼠ZO-1蛋白表達水平均極顯著增加（P＜0.01），HFD-M和HFD-H組大鼠閉鎖蛋白表達極顯著增加（P＜0.01）。這表明‘平陽黃湯’能有效修復高脂飲食引起的腸道屏障損傷。

圖6 ‘平陽黃湯’對大鼠緊密連接蛋白表達的影響Fig. 6 Effect of Pingyang yellow tea on the expression of tight junction proteins

2.8 ‘平陽黃湯’對高脂飲食大鼠腸道菌群的影響

2.8.1 ‘平陽黃湯’對高脂飲食大鼠腸道微生物菌群結構的影響

大鼠糞便微生物基因組16S rDNA的V3～V4區進行PCR擴增后測序。如圖7A、B所示，與ND組相比，HFD組大鼠Shannon指數顯著下降（P＜0.05），Simpson指數下降但無顯著性變化（P＞0.05）；與HFD組相比，‘平陽黃湯’干預組Shannon指數和Simpson指數都有不同程度改善，但改善效果不顯著（P＞0.05）。

對大鼠腸道微生物門水平的物種豐度進行PLS-DA分析，結果圖7C所示，ND組與HFD組離散程度較大但顯著分離，‘平陽黃湯’各干預組與HFD組分離趨勢較明顯。門水平的分類學結果（圖7D、E）表明，大鼠腸道菌群的優勢菌門為厚壁菌門（Firmicutes）、擬桿菌門（Bacteroidetes）和疣微菌門（Verrucomicrobia）。與ND組相比，HFD組的厚壁菌門相對豐度降低；與HFD組相比，‘平陽黃湯’干預后，HFD-L、HFD-M和HFD-H組厚壁菌門相對豐度降低，擬桿菌門相對豐度升高。此外，與ND組相比，HFD組F/B比值（厚壁菌門/擬桿菌門相對豐度比值）增加（P＞0.05）；與HFD組相比，HFD-M和HFD-H組F/B比值下降（P＞0.05）。如圖7F所示，阿克曼菌屬（Akkermansia）、Blautia、顫螺菌屬（Oscillospira）、擬桿菌屬（Bacteroides）、梭菌屬（Clostridium）、瘤胃球菌屬（Ruminococcus）、多爾氏菌屬（Dorea）為大鼠腸道微生物屬水平的優勢菌屬。以上結果表明‘平陽黃湯’可以改善肥胖導致的腸道菌群變化，有效調節組間腸道菌群的變化，這與線性判別分析（linear discriminant analysis，LDA）所示的腸道菌群優勢菌得分結果趨勢（圖7G）一致。

圖7 ‘平陽黃湯’對高脂飲食大鼠腸道微生物的影響Fig. 7 Effect of Pingyang yellow tea on intestinal microbiome in rats

2.8.2 大鼠腸道中特定微生物變化與機體指標的相關性

為進一步分析高脂飲食和‘平陽黃湯’對大鼠腸道菌群的影響，選取相對豐度排名前85的OTU，分析‘平陽黃湯’干預后高脂飲食大鼠腸道菌群OTU的變化。結合圖8A和表1可知，OTU0009、OTU0004、OTU0003和OTU0005的相對豐度變化表明，‘平陽黃湯’能有效逆轉高脂飲食引起的腸道菌群變化。與腸道屏障功能相關的部分腸道微生物與機體指標的Spearman相關性分析結果（圖8B）表明，梭菌屬相對豐度與體質量、附睪脂肪質量、血清TG濃度、血清TC濃度和血清IL-6濃度呈顯著負相關（P＜0.05）；F/B比值與體質量、附睪脂肪質量、腎周脂肪質量、血清TG和TNF-α水平呈正相關（P＞0.05）；阿克曼菌屬相對豐度與體質量、血清TG濃度、TC濃度、血清TNF-α和IL-6質量濃度呈負相關；毛螺旋菌科（Lachnospiraceae）相對豐度與體質量、附睪脂肪質量、血清TC濃度、血清LPS水平和IL-6質量濃度呈負相關（P＞0.05）。

表1 各組大鼠腸道微生物中相對豐度排名前85的OTU對應的細菌分類學信息Table 1 Taxonomic information of top 85 most abundant bacterial OTUs in rat gut microbiota

續表1

圖8 大鼠腸道微生物相對豐度及與機體指標的相關性Fig. 8 Changes of intestinal microorganisms in rats and correlation with body indexes

3 討 論

世界范圍內肥胖發病率越來越高，肥胖已成為全球性的健康問題[13]。肥胖一旦形成就很難控制，然而目前市場上常用的減肥藥物和節食措施副作用較大，因此尋求健康有效的植物資源用于防治肥胖是當前的研究熱點[14]。大量動物實驗及研究表明，多種黃茶能顯著抑制高脂飲食誘導的脂肪沉積和體質量增加，有效調控高脂飲食誘導的肥胖。然而，目前鮮有研究證實‘平陽黃湯’對高脂飲食大鼠的預防肥胖作用。

高脂飲食誘導肥胖形成的過程中往往伴隨著體內能量代謝失衡和脂質代謝紊亂[15]。本研究發現，‘平陽黃湯’能顯著抑制高脂飲食大鼠的體質量增長和白色脂肪（附睪脂肪和腎周脂肪）增加，降低脂肪指數和能量轉化率，改善血脂和血清脂肪因子水平，降低血清炎癥和氧化應激因子水平，減少肝臟的脂質堆積和損傷。這些結果表明‘平陽黃湯’能有效改善高脂飲食誘導的肥胖形成和代謝紊亂。

腸道屏障是指腸道上皮能夠防止腸腔內的有害物質穿過腸黏膜進入人體其他部位的結構和功能的總和[16]。腸道屏障完整性的破壞與代謝紊亂密切相關，其中由于腸道屏障完整性受損而引起的代謝性內毒素血癥被認為是導致胰島素抵抗和肥胖的主要原因。腸道上皮層受損會降低腸道的緊密連接性，增加腸道通透性，致使腸道內革蘭陰性桿菌產生的LPS通過腸道上皮進入血液進行全身循環，LPS與Toll樣受體結合后導致促炎細胞因子的表達增加，引發機體全身炎癥，最終導致肥胖的發生[17-18]。因此，維持腸道屏障的完整性和緊密性是預防肥胖的重要方向。腸道組織病理切片顯示，‘平陽黃湯’可有效調節高脂飲食大鼠腸道黏膜形態，改善腸道炎癥和黏膜完整性。腸道緊密連接主要由跨膜蛋白、連接復合蛋白和肌動蛋白構成，其中ZO-1和閉鎖蛋白是緊密連接蛋白中的重要蛋白，可作為腸道物理屏障的標志物[19-20]。免疫熒光分析結果表明，‘平陽黃湯’可顯著恢復高脂飲食大鼠的ZO-1和閉鎖蛋白表達，增強腸道的緊密連接和物理屏障功能。同時，‘平陽黃湯’可有效緩解高脂飲食誘導的腸道杯狀細胞數量減少。杯狀細胞分泌的黏蛋白可以在腸黏膜上形成一層致密和滲透性強的黏液，構成腸道化學屏障，防止微生物和有毒物質的侵入[21]。此外，‘平陽黃湯’干預后，大鼠血清中LPS、TNF-α和IL-6水平顯著降低，表明‘平陽黃湯’能有效減少腸道內LPS溢出，抑制代謝性內毒性和系統性炎癥，這可能是由于黃茶中的兒茶素物質有效改善了腸道炎癥和腸道屏障，抑制全身系統性炎癥的進一步發展[3]。以上結果表明，‘平陽黃湯’可以通過增加杯狀細胞的數量，提高緊密連接蛋白的表達，維護腸道屏障的完整性，有效預防高脂飲食引起的代謝性內毒素和系統性炎癥。

腸道菌群一直被認為與肥胖密切相關[22-23]。無菌動物和微生物移植實驗表明腸道菌群是肥胖和肥胖相關代謝紊亂形成和發展的重要起因[24]。本實驗探究了‘平陽黃湯’在預防高脂飲食大鼠肥胖過程中對腸道菌群的影響。通常肥胖的形成往往伴隨著腸道菌群多樣性的改變[25]。基于多樣性指數和PLS-DA分析表明，高脂飲食大鼠腸道微生物的多樣性與ND組相比顯著下降，‘平陽黃湯’干預后其腸道微生物群落多樣性得到有效改善，群落組成改變，說明腸道菌群的組成與肥胖的形成密切相關。在門水平上，高脂飲食誘導微生物厚壁菌門相對豐度增加，擬桿菌門相對豐度下降，導致F/B比值升高，中、高劑量的‘平陽黃湯’可以有效降低F/B比值，從而緩解F/B比例升高導致的能量吸收增加[26]。

LDA得分和屬水平分類學的分析結果表明，‘平陽黃湯’能促進與肥胖預防相關有益菌的增殖，抑制有害菌的生長。阿克曼菌屬作為一種降解黏蛋白的細菌，可有效增強脂肪組織代謝和腸黏膜屏障作用，緩解代謝性內毒素血癥，改善高脂飲食引起的肥胖[27]。本實驗中，‘平陽黃湯’能明顯提高高脂飲食大鼠腸道阿克曼菌屬相對豐度，相關性分析結果顯示阿克曼菌屬相對豐度與體質量、血清TC濃度、血清TNF-α和IL-6質量濃度呈負相關。擬桿菌屬相對豐度在‘平陽黃湯’干預后明顯上升，其可以將腸道內未消化的碳水化合物發酵產生短鏈脂肪酸，從而給腸上皮細胞提供能量，調節腸道菌群，這可能跟黃茶中茶多糖的調節作用有關[28-30]。梭菌屬作為厚壁菌門中非常重要的一類菌，是導致機體能量攝入過度的主要原因，而本研究結果表明‘平陽黃湯’干預后其相對豐度提高，相關性分析結果顯示其與血清中的炎癥因子水平呈負相關，這可能與梭菌屬能促進腸道中LPS的吸收有關[31]。這些結果表明‘平陽黃湯’能有效調節高脂飲食大鼠的腸道菌群紊亂。

綜上所述，研究表明‘平陽黃湯’可以顯著降低高脂飲食大鼠的脂肪累積和血脂水平，改善肝組織脂肪性損傷，有效緩解全身慢性炎癥和氧化應激水平，提高腸道緊密連接蛋白的表達，增強腸道屏障作用，調節腸道菌群紊亂，促進與肥胖預防相關有益菌的增殖，抑制有害菌的生長，從而有效預防肥胖。