皮膚鱗狀細胞癌血清PD-L1、Annexin A2表達及其臨床意義

吳海嚴，張帆

(南京醫科大學附屬淮安第一醫院，1.燒傷整形科；2.腫瘤內科，江蘇 淮安 223001)

皮膚鱗狀細胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma，CSCC)是臨床第二常見的非黑色素皮膚腫瘤，發病率僅次于基底細胞癌，轉移率及病死率均較高[1]。目前，CSCC治療的主要方法為顯微外科手術及標準手術切除，亦可選擇放化療及進一步淋巴結切除[2]。程序性死亡受體-1(programmed cell death protein 1，PD-1)是一種Ⅰ型跨膜糖蛋白，在活化的T細胞、B細胞、單核細胞等細胞中均有表達。程序性死亡配體-1(programmed cell death 1 ligand 1，PD-L1)可識別PD-1并與之結合，PD-1/PD-L1通路的激活可導致免疫抑制性腫瘤微環境形成，進而使腫瘤細胞逃避免疫殺傷[3]。膜聯蛋白A2(annexin A2)是一類廣泛存在于真核細胞的鈣磷脂結合蛋白。研究[4]認為，Annexin A2與腫瘤大小、病情嚴重程度、是否轉移等密切相關。本文探討CSCC患者血清PD-L1、Annexin A2表達及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年6月至2020年6月于南京醫科大學附屬淮安第一醫院收治的81例CSCC患者為研究組，40例皮膚良性病變患者為對照組。研究組中，男性49例，女性32例；平均年齡(49.59±9.46)歲。對照組中，男性26例，女性14例；平均年齡(47.05±9.12)歲；銀屑病18例，帶狀皰疹9例，濕疹8例，紅皮病5例。本研究嚴格遵循赫爾辛基宣言。兩組患者性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。納入標準：(1)經組織活檢、全身皮膚檢查、MRI檢查，符合CSCC診斷標準者[5]；(2)年齡>18歲者；(3)患者及家屬充分知情同意，簽署知情同意書。排除標準：(1)臨床資料如一般資料、病歷資料缺失者；(2)入院前進行抗腫瘤治療者；(3)合并全身其他惡性腫瘤者。

1.2 方法

1.2.1 臨床病歷收集 包括患者性別、年齡、是否存在淋巴結轉移、腫瘤部位、大小及分化程度、預后等。

1.2.2 CSCC預后評估 參照Dougherty療效評估標準[6]進行。完全反應(CR)：患者病變消失，僅殘留色素沉著或色素減退，組織學檢查無異常發現；部分反應(PR)：>50%腫瘤組織被殺死；無效(NR)：腫瘤組織縮小<50%或無改變。CR+PR視為預后有效。

1.2.3 酶聯免疫吸附試驗 采集患者治療前清晨空腹外周靜脈血，離心處理后進行檢測檢測患者血清PD-L1(貨號：FNab06281，武漢菲恩生物科技有限公司)和Annexin A2(貨號：FNab00431，武漢菲恩生物科技有限公司)水平。PD-L1和Annexin A2標準品稀釋分別制作標準曲線，100μL血清樣本添加到96孔板中，室溫孵育2 h，清洗液洗兩次，加入A試劑100 μL，37 ℃孵育60 min，再加入B試劑100 μL，37 ℃孵育30 min，然后加入底物溶液90 μL，37 ℃孵育25 min，最后每孔添加終止液50 μL，酶標儀讀取450 nm處吸光度值，根據標準曲線分別計算血清PD-L1和Annexin A2的濃度。

1.3 觀察指標

(1)血清PD-L1及 Annexin A2表達水平；(2)PD-L1及 Annexin A2在CSCC與皮膚良性病變鑒別診斷中的價值；(3)PD-L1及 Annexin A2表達水平與CSCC患者臨床病理特征及預后的相關性。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 兩組患者血清PD-L1及Annexin A2表達水平比較

研究組患者血清PD-L1、Annexin A2表達水平高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者血清PD-L1及Annexin A2表達比較

2.2 血清PD-L1及Annexin A2在CSCC中的診斷效能

ROC曲線分析顯示，血清PD-L1、Annexin A2診斷CSCC的敏感性分別為85.00%、92.50%，特異性分別為87.65%、58.02%。見表2及圖1。

表2 血清PD-L1、Annexin A2在CSCC中的診斷效能

2.3 不同臨床病理特征及預后CSCC患者血清PD-L1及Annexin A2水平比較

血清PD-L1、Annexin A2水平與CSCC患者性別、年齡、腫瘤部位差異無統計學意義(P>0.05)，與CSCC患者淋巴結轉移、分化程度、腫瘤大小、預后差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 不同臨床病理特征及預后CSCC患者血清PD-L1及Annexin A2水平比較

2.4 血清PD-L1及Annexin A2水平與CSCC患者臨床病理特征及預后的相關性

相關分析顯示，CSCC患者血清PD-L1、Annexin A2水平與淋巴結轉移情況、分化程度、腫瘤大小、預后呈正相關(P<0.05)。見表4。

表4 血清PD-L1及Annexin A2水平與CSCC患者臨床病理特征及預后情況的相關性

3 討論

CSCC是一種起源于表皮或附屬角質形成細胞的惡性腫瘤，是我國發病率最高的非黑色素皮膚腫瘤，患者表現為局部皮膚呈菜花狀，甚至出現潰瘍及惡臭[7]。CSCC發病機制復雜，與之相關的基因通路尚在不斷研究中。目前。治療CSCC的主要方法是手術，在徹底切除患者病灶的同時兼顧患者術后創面的修復，以期最大程度保證患者局部外觀及功能的保留和恢復，對于皮損數量較多、面積較大且發生于特殊部位如外陰而無法實施手術治療的患者，則予以藥物治療。

PD-L1屬于B7家族，與其他B7家族分子的不同之處在于PD-L1具備負向調節免疫應答的作用[8]。已有研究[9]證實，PD-1與PD-L1結合后，不僅可調控淋巴細胞功能，還可影響T細胞分化，抑制炎性介質釋放，進而促進調節性T細胞生成，借此發揮調控免疫應答、建立免疫耐受等作用。Annexin A2廣泛表達于人體的內皮細胞、單核/巨噬細胞、成骨細胞、神經細胞中，參與纖維蛋白溶解、信號轉導、細胞遷移等各種生理過程，且在腫瘤細胞呈高表達狀態[10]。邱禹杉等[11]研究認為，Annexin A2可通過多種途徑影響腫瘤細胞的增殖、凋亡、轉移、侵襲、新血管生成等過程。本研究結果顯示，研究組患者血清PD-L1、Annexin A2表達水平高于對照組(P<0.05)，原因可能是血清PD-L1存在與細胞膜表面分子相似的生物學功能，可參與CSCC患者疾病的發生及發展，而皮膚良性病變患者的免疫反應不如CSCC患者強烈；Annexin A2水平的上升則可能與相關指標的異常表達，通過影響血管內皮細胞而促使外周血中的Annexin A2水平上升有關。ROC曲線分析顯示，血清PD-L1、Annexin A2對CSCC的診斷敏感性分別為85.00%、92.50%，特異性分別為87.65%、58.02%，說明早期進行血清PD-L1、Annexin A2水平檢測對區分CSCC患者與皮膚良性病變患者有一定臨床價值。

相關分析顯示，CSCC患者血清PD-L1、Annexin A2與淋巴結轉移情況、分化程度、腫瘤大小、預后情況水平呈正相關(P<0.05)，說明血清PD-L1、Annexin A2對預測CSCC患者淋巴結轉移、分化程度、腫瘤大小及預后情況均有一定價值。現代醫學研究[12]認為，在腫瘤的發生、發展過程中常伴隨上皮細胞間質化發生，而上皮細胞間質化的加速對腫瘤的免疫逃避形成及惡性轉變有促進作用。在本研究中，血清PD-L1與腫瘤大小存在正相關性的原因可能與PD-L1的過表達可促進上皮細胞間質化發生，進而促進腫瘤生成有關。PD-L1可用于預測淋巴結轉移情況，原因可能是PD-L1可通過抑制T淋巴細胞的增殖及存貨，誘導抗原特異性T細胞凋亡，進而促使腫瘤細胞發生免疫逃逸，使腫瘤發生浸潤轉移。此外，血清Annexin A2水平與CSCC患者腫瘤大小正相關的原因可能是Annexin A2與CSCC患者機體內細胞因子產生相互作用，可調節纖溶亢進、組織重塑，對腫瘤細胞粘附有促進作用，且高Annexin A2水平可促進腫瘤新血管生成[13]。楊世權等[14]研究認為，Annexin A2表達水平與組織病理分級存在相關性，中低分化的頭頸部鱗狀細胞癌患者的Annexin A2表達呈現抑制，借此推測Annexin A2可通過影響患者上皮組織的生長重塑進而影響腫瘤的發生、生長及轉移。因此，高Annexin A2水平患者的預后受Annexin A2影響而不佳。

綜上所述，檢測CSCC患者的血清PD-L1、Annexin A2對患者疾病診斷有一定作用，且二者與CSCC的部分臨床病理特征及預后均存在相關性，可能對臨床預測患者預后結局有一定幫助。