膠體金快速法與酶聯免疫吸附試驗在人類免疫缺陷病毒抗體檢測中的應用

江民海

江西省都昌縣疾病預防控制中心 （江西九江 332600）

艾滋病是對人體危害較大的免疫缺陷型疾病，是因感染人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）所致，可經性接觸、血液及母嬰傳播。隨著病情發展，患者的免疫系統遭到破壞，可出現反復感染，甚至危及患者生命安全[1]。艾滋病防治為目前全世界關注的重要課題，我國艾滋病防治工作也面臨嚴峻考驗，早發現、早治療是艾滋病防治工作的基本原則和有效手段[2]。在日常艾滋病防治工作中，血清學HIV抗體檢測的應用廣泛，其中較為常見的檢測方法為膠體金快速法與酶聯免疫吸附試驗。本研究比較膠體金快速法與酶聯免疫吸附試驗在HIV 抗體檢測中的應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1—12月于都昌縣疾病預防控制中心進行艾滋病咨詢檢測的58例疑似HIV 感染患者，其中男43例，女15例；年齡27～44歲，平均（35.56±0.66）歲；體質量45～82 kg，平均（58.42±2.50）kg。所有患者均簽署HIV檢測知情同意書。

納入標準：有高危行為史并出現HIV 感染的某些癥狀，如長期發熱、腹瀉、淋巴結增大、體質量持續性減輕等，但并未確診HIV 感染；意識清晰、能正常交流。排除標準：近期服用過退燒藥、抗病毒治療藥物；肝腎功能異常；已確認為HIV 陽性或陰性；精神疾病患者；處于妊娠或哺乳期的婦女。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集及處理

用不含抗凝劑的真空采血管抽取被檢測者10 ml 靜脈血，分離血清2～3 ml，平均分為兩份，分別置于兩支血清管中，一份用于本研究檢測，一份送至九江市疾病預防控制中心HIV 確證實驗室進行免疫印跡法確證試驗。

1.2.2 膠體金快速法

膠體金快速法試劑為廣州市萬孚生物技術股份有限公司生產，在有效期內；取待檢血清3～4滴（80 μl ）置于膠體金快速反應板加樣孔內，滴加1滴樣本稀釋液，于室溫（25 ℃）下靜置，10～15 min內判定結果。判定標準：檢測區及質控區各出現一條紅色反應線為陽性，僅在質控區出現一條紅色反應區為陰性，質控區無紅色反應線出現為結果無效。

1.2.3 酶聯免疫吸附試驗

酶聯免疫吸附試驗試劑為珠海麗珠試劑股份有限公司生產，在有效期內。（1）加樣：將預包被板條固定于板架，在孔內加入50 μl 待檢血清，同時設陽性及陰性對照各3孔，分別加入50 μl 對照品。（2）溫育：蓋上封板膜，置于溫度（37±1）℃環境下溫育60 min。（3）洗滌：棄去孔內液體，將洗滌液注滿各孔，靜置時間不超過60 s，再棄去孔內洗滌液，重復此步驟5次后拍干。（4）加酶：各孔內加入酶標記物50 μl 。（5）再次溫育：蓋上封板膜，置于溫度（37±1）℃環境下溫育30 min。（6）再次洗滌：棄去孔內液體，將洗滌液注滿各孔，靜置時間不超過60 s，再棄去孔內洗滌液，重復此步驟5次后拍干。（7）顯色：每個孔內都加入底物緩沖液50 μl ，再加入底物液50 μl ，振蕩混勻，蓋上封板膜，置于溫度（37±1）℃環境下溫育30 min。（8）終止：每個孔內加入終止液50 μl ，混勻。（9）讀值：用酶標儀（北京普朗DNM9602）在單波長450 nm 下讀取各孔A 值。（10）結果判斷：樣本A 值≥臨界值為陽性，<臨界值為陰性，臨界值=陰性對照平均A 值+0.150。

1.3 觀察指標

以免疫印跡法的檢測結果為金標準，比較兩種方法的診斷效能。

1.4 統計學處理

采用SPSS 22.0統計軟件進行數據分析，計數資料以率表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

九江市疾病預防控制中心HIV 確證實驗室采用免疫印跡法檢測結果顯示，58例疑似感染患者中，陽性45例，陰性13例。以免疫印跡法檢測結果為金標準，酶聯免疫吸附試驗的診斷靈敏度、特異度、準確度均高于膠體金快速法，差異有統計學意義（P<0.05），見表1～2。

表1 兩種方法的檢測結果（例）

3 討論

人體感染HIV 后，自身免疫系統遭受嚴重破壞，發生各種感染的風險極大，嚴重威脅患者的生命安全，目前尚無根除患者體內病毒的有效方法[3-4]；但因HIV潛伏期較長，甚至可10年之久無明顯癥狀，在一定程度上增大了診斷難度。因此，如何快速、準確地檢出HIV 感染患者，及時切斷傳播途徑，減少感染，為目前艾滋病防治工作的關鍵[5]。

表2 兩種方法的診斷效能比較（%）

目前，免疫印記法是臨床上檢測HIV 感染的金標準，其兼具信噪比高、無潛在假陽性干擾的特點；但該方法對實驗室軟硬件設施及檢驗人員技術要求較高，短時間內較難普及，因此日常篩查及臨床上急需環境適應性更強的檢測方法。

近年來，膠體金快速法在HIV 抗體檢測中被廣泛應用。該方法是將膠體作為標記物，檢測時不需使用儀器設備，可直接通過肉眼觀察結果，成本較低，且檢測時間較短，能快速獲取檢測結果；但該方法對溫度有一定的要求，溫度過高或過低均會影響檢測結果，而且受檢驗人員的主觀判斷影響，易出現假陽性與假陰性。酶聯免疫吸附試驗是目前臨床實驗室常用的免疫學檢測方法之一，具有操作簡單、設備普及的優勢，在各級醫療機構均有應用。其檢測原理為將待測抗原或抗體先固定于固相載體表面，再用酶標記的抗原或抗體與已被固定的相應抗體或抗原發生特異性反應，最后加底物顯色，用酶標儀測定結果。有研究顯示，酶聯免疫吸附試驗能直接檢測出血液樣本中的HIV 抗體，靈敏度與特異度均較高[6-7]。本研究結果顯示，以免疫印跡法檢測結果為金標準，酶聯免疫吸附試驗的診斷靈敏度、特異度、準確度均高于膠體金快速法，差異有統計學意義（P<0.05），與以上研究結果相似。本研究使用的酶聯免疫吸附為兩步法試驗，一步法試驗能夠利用親和力較高的抗原，但仍無法避免鉤狀效應（即HOOK 效應，是指由于抗原抗體比例不合適而導致的假陰性現象，其中抗體過量為前帶效應，抗原過量為后帶效應）帶來的漏檢問題；在此基礎上實施二步檢驗，加入標本與包被固相抗原反應后洗滌，未被結合的待測抗體被洗掉后再加入酶標記抗原，進而可有效提升檢測準確度。

綜上所述，酶聯免疫吸附試驗檢測HIV 抗體的靈敏度、特異度、準確度均高于膠體金快速法，有利于提高艾滋病的早期診斷率。