不同前處理方法對青椒農殘測定精密度及回收率的影響分析研究

陳瑋琳， 吳桂君，郭 超

（1.永寧縣質量計量檢測中心，寧夏 銀川 750000；2.銀川能源學院化學與生物工程學院，寧夏 銀川 750000）

近年來，農產品雖然沒有出現因農藥殘留超標而引起的中毒事件，但也常出現農藥殘留超標及禁限類農藥殘留超標的情況[1-3]。青椒由于其獨特的食用價值和較高的投資回報率得到了快速發展，但青椒極容易發生病蟲害，據統計其常見的病蟲害有20余種[4-5]。為了保障青椒的產量及質量，其病蟲害防治工作貫穿整個產業鏈，在防治過程中存在不規范使用農藥的行為[6-8]，嚴重影響了消費者健康，同時也對當地的青椒出口貿易產生不利影響[9]。而在青椒農殘檢測方法中，前處理技術是農殘分析檢測的關鍵步驟[10]，一種恰當的樣品前處理方法可直接影響最終的農殘檢測結果。對青椒農殘檢測前處理方法的分析研究可以完善農殘檢測制度和標準，對于農殘實際檢測具有一定的指導意義，同時也能促進青椒的對外出口，加強農產品質量管理和控制，降低農殘對人們身體健康的威脅。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

青椒、乙腈（色譜純）、丙酮（色譜純）、氯化鈉（分析純）、濾膜、二氯甲烷（分析純）、石油醚（分析純）、己烷（分析純）、正己烷（色譜純）、乙酸乙酯（分析純）、無水硫酸鈉（分析純）、凝結液、弗羅里矽柱(Florisil)、弗羅里硅土、乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（PSA）、十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）、石墨化炭黑（GCB）、陶瓷均質子。

1.2 儀器與設備

GC-2010Plus型氣相色譜儀，日本島津公司產品；MX-S型旋渦混合器，大龍興創實驗儀器有限公司產品；AM-3型勻漿機，HOMOGFNICER產品；SPT-24型氮吹儀，北京斯珀特有限公司產品；HC-3018型離心機，安徽中科中佳科學儀器有限公司產品；KQ-500DV型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司產品；R-3型旋轉蒸發儀，美國Waters產品；LC-2010HT型氣相色譜三重四極桿質譜聯用儀，日本島津公司產品；XY600-1B型分析天平，常州市幸運電子設備有限公司產品。

1.3 試驗方法

1.3.1 試驗內容

根據相關標準和農殘檢測試驗方法的要求，檢測方法的最低檢出限（LOD值）要能夠達到該物質的最高殘留限量值（MRL值）。采用NY/T 761—2008、GB/T 5009.145—2003、GB/T 5009.146—2008、GB 23200.113—2018（QuEchERS）不同標準中的前處理方法，測定青椒內有機磷類農藥（乙酰甲胺磷、甲基對硫磷）、有機氯和擬除蟲菊酯類農藥（速克靈、三氟氯氰菊脂）的農藥殘留量，并記錄數據，對數據進行整理分析，計算其的精密度及回收率，比較3種方法所測的數據，并得出結論。

1.3.2 有機磷類農藥（乙酰甲胺磷、甲基對硫磷）的測定

（1）NY/T 761—2008標準中前處理方法。①試樣制備：將青椒取可食用的部分，打成漿狀，于-20~16℃下保存。②提取：取25.0 g青椒樣品于勻漿機中并加人50.0 mL乙腈，勻漿2 min并過濾。稱取5~7 g氯化鈉放入量筒中，取40~50 mL濾液倒入量筒。振蕩1 min并在室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相分層。③凈化：取10.00 mL乙腈溶液并置于燒杯中，放在80℃水浴鍋上。蒸發至接近干燥，加2.0 mL丙酮。轉移至離心管，用約3 mL丙酮沖洗燒杯3次，定容至5.0 mL。混勻后移人2個2 mL自動進樣器樣品瓶中，供測定。④測定：通過自動進樣器將1.0μL標準混合溶液和凈化后的樣品溶液分別注入氣相色譜儀中，雙柱保留時間定性，并將A柱的樣品溶液峰面積與標準溶液峰面積比較定量。⑤色譜條件：預柱為脫活石英毛細管柱，1.0 m，0.53 mm內徑。兩根色譜柱的具體條件分別為：A柱：50%聚苯基甲基硅氧烷（DB-17或HP-50+）1柱，30 m×0.53 mm×1.0μm。B柱：100%聚甲基硅氧烷（DB-1或HP-1）1柱，30 m×0.53 mm×1.50μm。

（2）GB/T 5009.145—2003標準中前處理方法。①試樣的制備：同（1）中有機磷（乙酰甲胺磷、甲基對硫磷）的測定中試樣制備方法。②提取：稱取10 g青椒試樣放入燒杯中，加入水（要求與試樣含水量和為10 g）和20 mL丙酮。振蕩30 min后，抽濾，取20 mL濾液倒入分液漏斗中。③凈化：首先將4 mL凝結劑和1 g助濾劑放入分液漏斗中，輕晃后放置5 min。用布氏漏斗進行抽濾，并用少量的凝結液淋洗分液漏斗和布氏漏斗。將濾液轉移到分液漏斗中，并將3 g氯化鈉加入分液漏斗中。用50，50，30 mL二氯甲烷分3次進行提取，合并提取液。將其經無水硫酸鈉過濾到濃縮瓶，在35℃旋轉蒸發儀上濃縮，氮氣吹干。向濃縮瓶加少量正己烷。用棉花塞住醫用注射器出口，將1 g硅膠以正己烷濕法裝入。壓實后，把過濾后的液體倒進醫用注射器。濃縮瓶用正已烷+二氧甲烷（9+1）溶液淋洗并倒進醫用注射器中。依次用4 mL正己烷+丙酮（7+3），4 mL乙酸乙酯，8 mL丙酮+乙酸乙酯（1+1），4 mL丙酮+甲醇（1+1）洗柱。收集全部濾液經旋轉蒸發儀上在45℃水浴濃縮至近干，定容至1 mL。④測定：將1μL混合標準溶液和凈化后的溶液分別注入氣相色譜儀中。保留時間定性，以試樣峰高或峰面積與標準比較定量。⑤色譜條件：色譜柱為石英彈性毛細管柱，OV-101 25 m×0.32 mm（內徑）。

（3）GB 23200.113—2018（QuEchERS）標準中前處理方法。①試樣制備：同（1）中有機磷（乙酰甲胺磷、甲基對硫磷）的測定中試樣制備方法。②提取、凈化：稱取10 g青椒試樣到塑料離心管中。向離心管中加10 mL乙腈、4 g硫酸鎂、1 g氯化鈉、1 g擰檬酸鈉、0.5 g檸酸氫二鈉和一顆陶瓷均質子。振蕩1 min后離心5 min。準確吸取6 mL的上清液到含900 mg硫酸鎂和150 mg PSA的塑料離心管中。渦旋混勻1 min再離心5 min。吸取2 mL的上清液到試管中。在40℃水浴條件下氮吹至近干。加入20μL的內標溶液和1 mL乙酸乙酯復溶，用微孔濾膜過濾，待檢測。③測定：將標準工作溶液和試樣溶液依次注入氣相色譜-質譜聯用儀中，保留時間和定性離子定性，測得定量離子峰面積。④色譜條件：色譜柱為30 m×0.25 mm×0.25μm，14%腈丙基苯基-86%二甲基聚硅氧烷石英毛細管柱或相當者。

1.3.3 有機氯類農藥（速克靈、三氟氯氰菊酯）的測定

（1）NY/T 761—2008標準中前處理方法。①試樣制備：同2.3.1 NY/T 761—2008中有機磷（乙酰甲胺磷、甲基對硫磷）試樣制備方法。②提取：同（1）中有機磷（乙酰甲胺磷、甲基對硫磷）的測定中試樣提取方法。③凈化：吸取10.00 mL乙腈溶液并置于燒杯中后，將燒杯放在80℃水浴鍋上加熱至近干。加入20 mL正己烷。Florisil柱需要第一次用5.0 mL丙酮+正己烷（10+90）溶液，第二次用5.0 mL正已烷預淋洗。當看到溶劑液面到達柱吸附層表面時倒入待凈化溶液。用5.0 mL丙酮+正己烷（10+90）溶液沖洗燒杯然后淋洗Florisil柱并重復淋洗一次。最后把盛有淋洗液的離心管放到氮吹儀上，保持水浴溫度50℃，氮吹蒸發至小于5 mL。然后再使用正己烷定容至5.0 mL。混勻后將其放入2個2 mL的自動進樣器樣品瓶中，供上機檢測。④測定：同2.3.1中有機磷（乙酰甲胺磷、甲基對硫磷）的測定。⑤色譜條件：預柱為脫活石英毛細管柱，1.0 m，0.25 mm內徑。2根色譜柱的具體條件分別為：A柱：100%聚甲基硅氧烷（DB-1或HP-1）1柱，30 m×0.25 mm×0.25μm。B柱：50%聚苯基甲基硅氧烷（DB-17或HP-50+）1柱，30 m×0.25 mm×0.25μm。

（2）GB/T 5009.146—2008標準中前處理方法。①試樣制備：同2.3.1 NY/T 761—2008中有機磷（乙酰甲胺磷、甲基對硫磷）試樣制備方法。②提取：稱量20 g青椒試樣，放進組織搗碎杯中，并加入30 mL丙酮和30 mL石油醚并搗碎2 min。經抽濾后倒入分液漏斗中，搖勻后靜置分層。將下層溶液移到另一個分液漏斗中，用2×20 mL石油醚萃取3次。最后合并3次的石油醚分層并經旋轉蒸發儀濃縮至10 mL。③凈化：用20 mL石油醚淋洗柱體，倒掉淋洗液。吸取2 mL提取液，放入已經淋洗過的凈化柱。量取100 mL石油醚+乙酸乙酯（95+5）溶液洗脫，洗脫液倒入蒸餾瓶中。經旋轉蒸發儀濃縮近干，用石油醚進行溶解殘渣于離心管中，定容至1.0 mL。待檢測。④測定：先吸取1μL試樣注入氣相色譜儀，再吸取1μL混標使用液進樣，記錄2種樣液色譜峰的保留時間和峰高。根據組分在色譜上的出峰時間與標準組分比較定性。⑤色譜條件：色譜柱為石英彈性毛細管柱，0.25 mm（內徑）×15 m，內部涂有OV-101固定液。

（3）GB 23200.113—2018（QuEchERS）標準中前處理方法。同1.3.2中（3）GB 23200.113—2018（QuEchERS）標準中前處理方法。

2 結果與分析

2.1 乙酰甲胺磷精密度及回收率的比較

通過用不同前處理方法對其進行處理，上機檢測。

乙酰甲胺磷在不同前處理方法下精密度及回收率的比較見表1。

由表1可知，乙酰甲胺磷在上述3種方法中，其中依據GB 23200.113—2018（QuEchERS）的回收率最好，較為穩定，接近100%；RSD值為0.686%，精密度最高，相比于其他2種方法最優。

表1 乙酰甲胺磷在不同前處理方法下精密度及回收率的比較

2.2 甲基對硫磷精密度及回收率的比較

通過用不同前處理方法對其進行處理，上機檢測。

甲基對硫磷在不同前處理方法下精密度及回收率的比較見表2。

由表2可知，甲基對硫磷在上述3種方法中，比較可得GB 232 00.113—2018（QuEchERS）測得回收率較為穩定，接近100%；RSD值0.797%，精密度最高，相比于其他2種方法最優。

表2 甲基對硫磷在不同前處理方法下精密度及回收率的比較

2.3 速克靈精密度及回收率的比較

通過用不同前處理方法對其進行處理，上機檢測。

速克靈在不同前處理方法下精密度及回收率的比較見表3。

由表3可知，速克靈在上述3種方法中，其中依據GB 23200.113—2018（QuEchERS）的回收率最好，較為穩定，接近100%；RSD值為1.536%，精密度最高，相比于其他2種方法較為穩定。

表3 速克靈在不同前處理方法下精密度及回收率的比較

2.4 三氟氯氰菊酯精密度及回收率的比較

通過用不同前處理方法對其進行處理并上次檢測。

三氟氯氰菊酯在不同前處理方法下精密度及回收率的比較見表4。

由表4可知，三氟氯氰菊酯在上述3種方法中，依據GB 23200.113—2018（QuEchERS）的回收率最好，較為穩定，接近100%；RSD值為2.313%，精密度最高，相比于其他2種方法較為穩定。

表4 三氟氯氰菊酯在不同前處理方法下精密度及回收率的比較

3 結論

利用NY/T 761—2008、GB/T 5009.145—2003和GB/T 5009.146—2008、GB 23200.113—2018（QuEch-ERS）3種國標方法中的前處理技術，測定長治市某蔬菜生產基地青椒有機磷（乙酰甲胺磷、甲基對硫磷）、有機氯和擬除蟲菊酯類農藥（速克靈、三氟氯氰菊脂）4種農藥，通過加標回收來進行精密度及回收率的比較。這3種前處理方法測定的回收率都在要求的范圍內，由試驗可以看出GB 23200.113—2018（QuEchERS）測定的回收率最好，更接近于100%；RSD值最小，離散度最低，精密度最好。對于操作性而言，GB 23200.113—2018（QuEchERS）更為簡便、易操作，無需專門培訓和較高的操作技能便可以很好地完成檢測，且溶劑使用量少，污染小，有機磷類、有機氯和擬除蟲菊酯類農藥都適用，還可用于谷物類、油料類作為基質進行農殘檢測。