女性首發精神分裂癥患者血清miR-15a、miR-206水平與認知功能的相關性分析*

黃 瑛，李瑤婧，龔恒芬，金 瑩，師典紅，朱 娜，朱明環，胡承平△

1.同濟大學精神疾病臨床研究中心/上海市浦東新區精神衛生中心暨同濟大學附屬精神衛生中心二病區，上海 200122；2.解放軍陸軍第九五八醫院精神科，重慶 400020

精神分裂癥是一種臨床常見的慢性精神障礙疾病，患者臨床表現有陽性癥狀、陰性癥狀、認知功能損傷、情緒異常等[1]。許多精神分裂癥患者存在認知、情感等缺陷，影響患者生活質量及預后，同時給家庭和社會帶來沉重的負擔[2]。女性易于表達自我情感，其神經系統有較大興奮性，對任何刺激均易于發生反應，因而女性發生情感障礙及精神分裂患病概率一般大于男性，因此本研究主要針對女性精神分裂癥患者進行研究。陽性與陰性癥狀量表(PANSS)評分是一種評定各種類型精神分裂癥疾病嚴重程度的標準化量表評分，主要適用于成年人[3]。威斯康星卡片分類測驗(WCST)是一個神經心理學測驗，主要測定患者額葉執行能力，可反映患者認知功能[4]。微小RNA-15a(miR-15a)作為一種高度保守的miRNA，其在多種惡性腫瘤中呈低表達[5]。有研究報道輕度認知障礙患者血清miR-206水平升高[6]。還有研究表明，miR-15a、miR-206與腦缺血、缺氧及腦卒中嚴重程度有關[7-8]。故筆者推測miR-206、miR-15a可能與神經系統障礙性疾病有關，但目前關于miR-15a、miR-206與精神分裂癥的關系研究較少，因此，本研究通過探討女性精神分裂癥患者血清miR-15a、miR-206水平與PANSS評分、WCST的相關性，以期為疾病預測和治療提供一定的參考依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月至2020年6月在上海市浦東新區精神衛生中心就診的92例女性首發精神分裂癥患者作為精神分裂組。納入標準：(1)符合精神分裂癥診斷標準[9]；(2)首次發病，入組前未服用過抗精神病藥物者；(3)無攻擊行為及自殺傾向；(4)發病前智力正常者。排除標準：(1)妊娠期或哺乳期婦女；(2)有精神活性藥物治療史者；(3)有癡呆、抑郁癥、癲癇等其他精神障礙性疾病者；(4)有急慢性感染疾病、各種免疫疾病者；(5)有嚴重的心、腦血管疾病者。另選取本中心同期89例體檢健康女性作為對照組。收集并整理所有受試者一般資料，精神分裂組中患者年齡20～42歲，對照組年齡21～44歲。2組受試者年齡、體質量指數(BMI)、吸煙史、飲酒史及受教育年限比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。 本研究經醫院臨床研究倫理委員會批準，符合倫理學標準；受試者或家屬均自愿參加，并簽署知情同意書。

表1 對照組與精神分裂組一般資料比較

1.2儀器與試劑 實時熒光定量PCR(q-PCR)儀(型號ABI 7700)購自美國Applied Biosystems公司。miRNA提取試劑盒(貨號AM1556)購自美國Life公司，TaqMan miRNA反轉錄試劑盒(貨號D1802)購自?；锟萍加邢薰?，miScript SYBR?Green qPCR Kit(貨號218073)購自德國QIAGEN公司，Rox Reference Dye(貨號BYLP-31110)購自南京北魚生物科技有限公司。

1.3方法

1.3.1標本采集及保存 采集對照組體檢時及精神分裂組入院檢查時清晨空腹靜脈血標本5 mL，以3 000 r/min離心15 min后收集血清，置于-80 ℃保存待測。

1.3.2血清miR-15a、miR-206水平測定 采用RNA提取試劑盒提取兩組受試者血清總RNA，反轉錄試劑盒將RNA反轉錄得cDNA。采用q-PCR儀對目的基因miR-15a、miR-206和內參U6進行擴增。反應體系共10 μL：cDNA模板(50 ng/μL)1 μL，正反向引物(10 μmol/L )各0.4 μL，SYBR Premix Ex Taq Ⅱ(2×)5 μL，Rox Reference Dye(50×)0.2 μL，ddH2O 3.0 μL，引物由上海生工生物公司設計并合成，引物序列見表2。反應條件：95 ℃ 15 min；94 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 20 s，共40個循環。每份標本重復3次。采用2-ΔΔCt法計算血清中miR-15a、miR-206相對表達量。

表2 q-PCR引物序列

1.3.3PANSS評分及WCST標準[10-11]PANSS評分由7項陽性癥狀、7項陰性癥狀及16項一般病理癥狀組成，每個項目分為7級評分：7分極重度，6分重度，5分偏重，4分中度，3分輕度，2分很輕，1分無癥狀，評分越高表明癥狀越重。WCST：患者通過改良版WCST對48張卡片和4張刺激卡片進行分類，記錄患者分類的正確數、錯誤數、持續性錯誤數和完成分類數，評估患者的執行能力和靈活性。

2 結 果

2.12組血清miR-15a、miR-206水平比較 精神分裂組血清miR-206水平高于對照組，miR-15a水平低于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 2組血清miR-15a、miR-206水平比較

2.2血清miR-15a、miR-206對首發精神分裂癥的診斷價值 繪制miR-15a、miR-206單獨和聯合檢測診斷首發精神分裂癥的ROC曲線，結果顯示，血清miR-15a、miR-206單獨檢測診斷首發精神分裂癥的曲線下面積(AUC)分別為0.881(95%CI：0.832～0.930)、0.913(95%CI：0.870～0.956)，最佳臨界值分別為0.776、1.194，特異度分別為85.4%、88.8%，靈敏度分別為76.1%、83.7%；miR-15a、miR-206聯合檢測診斷首發精神分裂癥的AUC為0.935(95%CI：0.900～0.970)，特異度為86.5%，靈敏度為87.0%，見圖1。

圖1 血清miR-15a、miR-206單獨和聯合檢測診斷首發精神分裂癥的ROC曲線

2.3不同血清miR-15a、miR-206水平首發精神分裂癥患者PANSS評分、WCST結果比較 以血清miR-15a、miR-206水平均值0.65、1.41為界，將首發精神分裂癥患者分為miR-15a高表達組(45例)、miR-15a低表達組(47例)及miR-206高表達組(48例)和miR-206低表達組(44例)。miR-15a高表達組PANSS陽性癥狀、陰性癥狀、病理癥狀評分、總評分及WCST錯誤應答數、持續錯誤數低于miR-15a低表達組，而WCST正確應答數、完成分類數高于miR-15a低表達組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表4。miR-206高表達組PANSS陽性癥狀、陰性癥狀、病理癥狀評分、總評分及WCST的錯誤應答數、持續錯誤數高于miR-206低表達組，而WCST正確應答數、完成分類數低于miR-206低表達組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表5。

表4 不同血清miR-15a水平首發精神分裂癥患者PANSS評分及WCST結果比較

組別nWCST正確應答數(個)WCST錯誤應答數(個)WCST持續錯誤數(個)WCST完成分類數(個) miR-15a低表達組473.11±0.945.39±1.258.31±2.081.41±0.63miR-15a高表達組454.50±0.973.36±0.944.79±1.241.96±0.52t 6.980 8.774 9.805 4.556P<0.001<0.001<0.001<0.001

表5 不同血清miR-206水平首發精神分裂癥患者PANSS評分及WCST結果比較

組別nWCST正確應答數(個)WCST錯誤應答數(個)WCST持續錯誤數(個)WCST完成分類數(個)miR-206低表達組444.41±1.023.24±0.894.83±1.191.92±0.63miR-206高表達組483.16±0.915.43±1.168.26±1.951.34±0.51t 6.212 10.091 10.0724.871P<0.001<0.001<0.001<0.001

2.4精神分裂組血清miR-15a、miR-206水平與PANSS評分、WCST結果的相關性 Pearson相關分析結果顯示，精神分裂組血清miR-15a水平與miR-206呈負相關(r=-0.643，P<0.05)，見圖2。miR-15a水平與WCST正確應答數、完成分類數呈正相關(P<0.05)，與PANSS陽性癥狀、陰性癥狀、病理癥狀評分、總評分及WCST錯誤應答數、持續錯誤數呈負相關(P<0.05)；miR-206水平與WCST正確應答數、完成分類數呈負相關(P<0.05)，與PANSS陽性癥狀、陰性癥狀、病理癥狀評分、總評分及WCST錯誤應答數、WCST持續錯誤數呈正相關(P<0.05)，見表6。

圖2 精神分裂組血清miR-15a水平與miR-206相關性

表6 精神分裂組血清miR-15a、miR-206水平與PANSS評分及WCST結果的相關性

3 討 論

精神分裂癥是一組癥狀群組成的臨床綜合征，其病因目前尚未明確，患者認知能力會出現一定程度的缺陷，甚至可能會出現自殘或威脅他人安全的行為，嚴重威脅著人類的身心健康[12]。有研究表明，神經內分泌疾病存在一定的性別差異，免疫系統學說認為女性產后或性成熟后其特有的生物遺傳特征會增加其患病風險[13]。因此，本研究以女性首發精神分裂癥患者為研究對象，尋找特異性較高的生物學指標，以便客觀、快速地實現精神分裂癥嚴重程度及認知功能的判定。

miRNA在中樞神經系統中含量豐富，可參與神經系統發育的多個階段，目前已證實精神分裂癥患者體內多種miRNA均存在異常表達[14]。miRNA與靶基因mRNA 3′端非編碼區結合后可影響神經網絡模式，進而干擾神經生物，影響精神分裂癥發病[15]。易全民等[16]研究結果顯示，女性阿爾茲海默病患者血清miR-206水平升高，且與認知及運動能力下降有關。LU等[17]研究表明，miR-15a與急性腦缺血有關，并能作為腦卒中的潛在診斷和治療靶點。本研究結果顯示，精神分裂癥患者血清miR-206水平高于健康人群，與HAUBERG等[18]研究結果相似；miR-15a水平低于健康人群，與LI等[19]研究中miR-15a在阿爾茲海默病患者中的表達趨勢一致。提示miR-206高表達、miR-15a低表達可能參與疾病的發生、發展，推測病理狀態下患者周圍腦組織出現一定程度的損傷，使腦組織中miR-206表達水平升高，而又因此時血腦屏障受損，通透性增強，使血清miR-206水平明顯升高，而miR-206又可能造成miR-15a表達水平降低，但其具體作用機制還需進一步證實。miR-15a與miR-206對女性首發精神分裂癥均有一定的診斷價值，且miR-206的診斷價值相對更高，其AUC為0.913，二者聯合檢測的診斷靈敏度有一定提高，臨床中可考慮將二者聯合作為參考指標，且當miR-15a低于其最佳臨界值0.776、miR-206高于其最佳臨界值1.194時，精神分裂癥的發生概率更大。此外，本研究中血清miR-15a水平與WCST正確應答數、完成分類數呈正相關(P<0.05)，與PANSS陽性癥狀、陰性癥狀、病理癥狀評分、總評分及WCST錯誤應答數、持續錯誤數呈負相關(P<0.05)；miR-206水平與WCST正確應答數、完成分類數呈負相關(P<0.05)，與PANSS陽性癥狀、陰性癥狀、病理癥狀評分、總評分及WCST錯誤應答數、WCST持續錯誤數呈正相關(P<0.05)。提示血清miR-15a水平降低、miR-206水平升高可能對精神分裂癥疾病的發展及認知功能的損害有影響，推測miR-15a降低、miR-206升高可能導致中樞神經元的保護作用受到抑制，神經遞質的釋放出現紊亂，同時損傷患者認知功能，但miR-15a、miR-206在認知功能損傷中的具體作用機制有待深入研究。

綜上所述，女性首發精神分裂癥患者血清miR-206水平升高、miR-15a降低，二者可能與精神分裂癥疾病的發生、發展密切相關。血清miR-15a、miR-206對精神分裂癥的診斷具有一定的參考價值，且對患者疾病嚴重程度及認知功能損傷的評估有重要意義，有望成為女性首發精神分裂癥早期預測及治療的潛在指標。