均化在淫羊藿飲片質量均一性控制中的應用

薛 原 吳 梅 王優杰 馮 怡 劉敏臣 張繼全

上海中醫藥大學中藥現代制劑技術教育部工程研究中心，上海 201203

中藥飲片的質量均一是保證制劑批間質量穩定的前提[1]。由于飲片質量受產地、基原、采收期等多種因素影響，批次間常存在較大質量差異，若以此為原料進行生產，質量波動勢必傳導至產品中，導致制劑批間質量均一性難以得到保證[2-3]。均化技術作為提高物料均一性的方法，已被運用于白酒勾調[4]、煙草加工[5]、水泥生產[6-7]等方面。為解決原料質量波動導致的制劑批間質量差異問題，國家藥品審評中心于2020 年11 月發布了《中藥均化研究技術指導原則（征求意見稿）》，旨在使用均化操作提高中藥制劑批間質量均一性[8]。

淫羊藿是多基原藥材，種屬復雜多樣[9-10]。研究表明，淫羊藿飲片的批間質量差異明顯[9-10]，這給制劑生產原料的選擇及成品的質量穩定性控制帶來了巨大挑戰[11-12]。本研究以淫羊藿飲片為均化對象，以指標成分朝藿定C、淫羊藿苷的含量為基礎設定均化目標，使用均化軟件確定均化比例，對不同批次飲片進行均化，從指標成分含量及指紋圖譜相似度的角度對均化結果進行評價，以期探索一種簡單穩定的方法來提高中藥飲片的質量均一性。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260 型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；XP-205 型十萬分之一電子分析天平、FA-2104 N 型萬分之一電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；SKT-210 HP 型超聲波清洗器（上海科導超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

朝藿定C 對照品（批號：PS 000213，中國食品藥品檢定研究院）；淫羊藿苷對照品（批號：110737-201516，中國食品藥品檢定研究院）；水為超純水；乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純。

7 批淫羊藿飲片經上海中醫藥大學中藥學院倪梁紅老師鑒定，均為小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornu Maxim.的干燥葉，飲片相關信息見表1。

表1 飲片相關信息

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備

分別精密稱取朝藿定C、淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成濃度分別為1.16、0.98 mg/ml 的單一對照品母液。取1 ml 母液定容至25 ml 量瓶中，稀釋得46.39、39.04 μg/ml 的單一對照品溶液，備用。

精密稱取朝藿定C、淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成濃度分別為2.02、1.86 mg/ml 的混合對照品母液。取1 ml 母液定容至50 ml 量瓶中，稀釋得40.38、37.23 μg/ml 的混合對照品溶液，備用。

2.2 供試品溶液的制備

取淫羊藿粉末（過三號篩）約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇20 ml，稱重，超聲處理（功率400 W，頻率50 kHz）1 h，放冷，再次稱重，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3 測定條件

2.3.1 指標成分含量測定色譜條件 色譜柱：Grace Apollo C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.2%甲酸水溶液（26∶74）；流速：1 ml/min；柱溫：30℃；進樣量：10 μl；檢測波長：270 nm。

2.3.2 指紋圖譜色譜條件 色譜柱：Pntulips QS C18Plus 柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脫為0～35 min，26%A；35～55 min，26%～40%A；55～75 min，40%～55%A；流速：1 ml/min；柱溫：30℃；進樣量：10 μl；檢測波長：270 nm。

2.4 確定均化比例

將均化前飲片的含量測定結果采用均化軟件進行計算[13-14]，以7 批淫羊藿飲片中朝藿定C、淫羊藿苷平均含量的120%為均化目標，設定目標值朝藿定C為0.85%、淫羊藿苷為0.84%，計算最優均化比例，得到6 批均化后飲片。均化比例見表2。

表2 飲片均化比例

2.5 方法學考察結果

2.5.1 系統適用性試驗 精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μl，按“2.3.1”項下條件測定，朝藿定C、淫羊藿苷色譜峰與相鄰色譜峰分離度均＞1.5，拖尾因子均為0.95～1.05，淫羊藿苷理論塔板數＞8000。高效液相色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.5.2 線性關系 取“2.1”項下對照品溶液，加適量甲醇稀釋得濃度為0.04、0.08、0.20、0.40、1.01、2.02 mg/ml的朝藿定C 對照品溶液；加適量甲醇稀釋得濃度為0.04、0.07、0.19、0.37、0.93、1.86 mg/ml 的淫羊藿苷對照品溶液，按“2.3.1”項下測定。以朝藿定C、淫羊藿苷進樣質量（mg）為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程及相關系數，見表3。結果顯示，指標成分在一定質量范圍內與峰面積線性關系良好。

表3 淫羊藿中指標成分的線性關系考察

2.5.3 精密度試驗 精密吸取混合對照品溶液10 μl，按“2.3.1”項下連續進樣6 次，計算峰面積相對標準偏差（RSD），結果朝藿定C 為0.32%、淫羊藿苷為0.34%，提示儀器的精密度良好。

2.5.4 穩定性試驗 取S7 批供試品，按“2.2”項下制備供試品溶液，室溫下放置，分別在0、2、4、8、12、24 h進樣，按“2.3.1”項下測定。計算峰面積RSD，結果樣品中朝藿定C 為0.85%、淫羊藿苷為0.26%，提示供試品溶液在24 h 內穩定。

2.5.5 重復性試驗 取S7 批供試品，按“2.2”項下制備6 份供試品溶液，分別吸取10 μl，按“2.3.1”項下測定。計算峰面積RSD，結果測得朝藿定C 為1.73%、淫羊藿苷為1.27%，提示該方法重現性良好。

2.5.6 加樣回收率 精密稱定已知含量的S7 批供試品6 份，每份約0.1 g，分別加入一定量的對照品，按“2.2”項下制備供試品溶液，按“2.3.1”項下測定，計算朝藿定C、淫羊藿苷的平均回收率分別為99.75%、97.66%，RSD 分別為3.37%、4.33%，結果見表4～5。提示本方法回收率良好。

表4 朝藿定C 加樣回收率結果（n=6）

表5 淫羊藿苷加樣回收率結果（n=6）

2.6 均化前后含量測定結果

以“1.2”項下7 批淫羊藿飲片作為均化前原料，以“2.4”項下得到的6 批為均化后原料，供試品溶液按“2.3.1”項下測定。計算得均化前后各成分含量及RSD，結果見表6～7。通過均化能使不同批次的淫羊藿飲片中朝藿定C、淫羊藿苷含量的RSD 明顯降低，提示批間質量差異減小，均一性提高。

表6 均化前后朝藿定C 含量及RSD（%）

表7 均化前后淫羊藿苷含量及RSD（%）

2.7 指紋圖譜研究結果

供試品溶液按“2.3.2”項下測定，采用《中藥指紋圖譜相似度評價系統2004A 版》進行數據處理[15-16]。設定S1 批為參照圖譜，多點校正后自動匹配，得到對照指紋圖譜及10 個共有特征峰。均化前后淫羊藿飲片的指紋圖譜及對照圖譜見圖2～4，進一步計算得均化前后相似度結果見表8。均化前后淫羊藿飲片的相似度得以明顯提高，提示不同批次質量基本達到均一穩定。

表8 均化前后飲片指紋圖譜相似度及RSD

圖2 淫羊藿飲片對照指紋圖譜

3 討論

本課題組前期研究發現同一產地不同批次的淫羊藿飲片質量差異較大，分析可能是受到土壤條件[17]、生長年限[18]、采收期[19]、產地加工方式[20]、炮制方法[21]等多種因素影響。不同產地的淫羊藿原料中，甘肅產地的飲片質量相對較為優良，合格率高[22-23]。

圖3 均化前飲片指紋圖譜

圖4 均化后飲片指紋圖譜

此外，淫羊藿中多糖類也為主要成分，若將其納入考慮指標將更全面地反映淫羊藿飲片質量，但目前尚缺乏簡單精確、誤差小的測定方法，故本研究未將其作為均化評價指標[24]。同時，僅用相似度評價或許不能完全反映飲片質量及批次間的相似程度，在未來研究中還可以考慮納入更多的指標，如峰面積、共有峰個數、峰面積和等[25]。

本研究方法中均化比例的確定借助軟件，操作簡單且精確度高，適合用于工業生產，值得推廣。