T淋巴細(xì)胞與輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平在小兒支氣管哮喘中的變化和臨床意義

沈 琳，劉 俊

（1.南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院檢驗科；2.南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院兒科，江蘇 蘇州 215000）

支氣管哮喘是一種由T淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等多種炎癥細(xì)胞共同參與的慢性氣道炎癥性疾病，其中T細(xì)胞的活化起著關(guān)鍵的作用，根據(jù)T細(xì)胞表面的標(biāo)志物不同，將成熟T細(xì)胞分為CD4+T和CD8+T細(xì)胞，而CD4+T細(xì)胞根據(jù)其分泌的細(xì)胞因子的不同又可分為1型輔助性T細(xì)胞（Th1細(xì)胞）[分泌白細(xì)胞介素 -2（IL-2）、干擾素 -γ（INF-γ）]、2 型輔助性 T 細(xì)胞（Th2細(xì)胞）[分泌白細(xì)胞介素 -4（IL-4）、白細(xì)胞介素 -10（IL-10）]。相關(guān)研究報道指出，T淋巴細(xì)胞是調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫應(yīng)答的重要細(xì)胞群，輔助性T淋巴細(xì)胞表達(dá)和功能紊亂是支氣管哮喘患兒的重要特征，在氣道炎癥中發(fā)揮重要作用，故推測支氣管哮喘患兒的病情嚴(yán)重程度與T淋巴細(xì)胞、輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平有一定的相關(guān)性[1-2]。基于此，本研究主要探討支氣管哮喘患兒T淋巴細(xì)胞水平與輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平的變化與臨床意義，分析其與支氣管哮喘患兒治療時間、疾病程度的關(guān)系，從而為臨床防治工作提供可靠的參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院2020年1月至2021年5月收治的60例小兒支氣管哮喘的臨床資料，將其作為觀察組，其中男、女患兒分別為34、26例；年齡2～8歲，平均（5.12±1.24）歲；病程1～3 d，平均（1.65±0.47） d，同時選取60例行健康體檢的正常兒童的體檢資料，將其作為對照組，其中男童、女童分別為36、24例；年齡3～10歲，平均（5.23±1.18）歲，開展前瞻性研究。兩組研究對象一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），組間具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：觀察組患兒符合《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南（2016年版）》[3]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；年齡2～12歲者；屬于間歇性發(fā)作者；近期無呼吸道感染及其他過敏性疾病者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：進(jìn)入研究前4周內(nèi)使用過全身或吸入性糖皮質(zhì)激素治療者；合并其他良惡性腫瘤疾病者；合并其他免疫性疾病如結(jié)核病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、幼年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎者等。本研究經(jīng)南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患兒法定監(jiān)護(hù)人簽署知情同意書。

1.2 治療與檢測方法

1.2.1 治療方法 觀察組患兒均給予常規(guī)吸痰、止咳、吸氧等方法治療，并有效維持水、鹽、電解質(zhì)平衡，同時給予吸入用布地奈德混懸液（AstraZeneca Pty Ltd，注冊證號H20140475，規(guī)格：2 mL∶1 mg）霧化吸入治療，1 mg/次，2次/d，每次霧化吸入治療時間為15 min；同時給予口服鹽酸西替利嗪口服溶液（北京韓美藥品有限公司，國藥準(zhǔn)字H20093320，規(guī)格：10 mL∶10 mg）治療，5 mg/次，1～2歲患兒1次/d，2歲以上患兒2次/d，連續(xù)治療2周。

1.2.2 分組方法 入院后即刻，采用肺功能檢測儀對患兒肺功能障礙嚴(yán)重程度進(jìn)行評價，具體評價標(biāo)準(zhǔn)：據(jù)最大自主通氣量（MVV）實測值占預(yù)計值的百分比將病情嚴(yán)重程度分為4級，＞80%評為正常；60%～80%評為輕度損害；將40%～61%評為中度損害；＜40%評為重度損害[4]。將觀察組患兒分為輕度組（15例）、中度組（25例）、重度組（20例）。

1.2.3 檢測方法 分別抽取觀察組患兒治療前及治療1、2周后，對照組兒童入院體檢時的空腹靜脈血6 mL，分為2份，一份靜脈血加入乙二胺四乙酸二鉀抗凝，使用流式細(xì)胞儀檢測外周靜脈血CD4+、CD8+百分比，計算CD4+/CD8+比值；另一份靜脈血經(jīng)離心（以3 000 r/min的轉(zhuǎn)速，離心10 min）處理后取血清，使用酶聯(lián)免疫吸附實驗法檢測血清 Th1 細(xì)胞因子（IL-2、INF-γ）、Th2 細(xì)胞因子（IL-4、IL-10）水平。

1.3 觀察指標(biāo) ①比較對照組兒童入院體檢時及觀察組患兒治療前與治療1、2周后T淋巴細(xì)胞與輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平。②比較觀察組不同病情嚴(yán)重程度患兒T淋巴細(xì)胞與輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平。③分析T淋巴細(xì)胞、輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平分別與小兒支氣管哮喘治療時間、發(fā)作程度的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以[ 例(%)]表示，采用χ2檢驗；計量資料以(±s)表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間與多時間點間比較采用重復(fù)測量方差分析。采用Pearson相關(guān)系數(shù)分析法分析支氣管哮喘患兒治療時間、發(fā)作程度與T淋巴細(xì)胞、輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平的關(guān)系。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 T淋巴細(xì)胞水平與輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平 與治療前比，治療1、2周后觀察組患兒CD4+百分比、CD4+/CD8+比值及血清IL-4水平均呈降低趨勢，且觀察組各時間點均高于對照組；而CD8+百分比及血清IL-2、INF-γ、IL-10水平均呈升高趨勢，且觀察組各時間點均低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。

表1 所有研究對象T淋巴細(xì)胞相關(guān)因子與輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平比較(?±s)

表1 所有研究對象T淋巴細(xì)胞相關(guān)因子與輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平比較(?±s)

注：與對照組比，*P＜0.05；與治療前比，#P＜0.05；與治療1周后比，△P＜0.05。IL-2：白細(xì)胞介素 -2；INF-γ：干擾素 -γ；IL-4：白細(xì)胞介素 -4；IL-10：白細(xì)胞介素 -10。

治療前 52.69±5.23* 29.98±3.11* 1.76±0.18* 1.25±0.35* 90.31±6.24* 350.47±43.15* 82.98±6.04*治療1周后 50.36±4.10*# 31.83±1.56*# 1.57±0.15*# 2.18±0.42*# 96.45±7.25*# 302.74±49.78*# 88.98±7.12*#治療 2 周后 47.23±5.11*#△ 33.90±4.28*#△ 1.46±0.13*#△ 3.21±0.55*#△ 101.36±8.77*#△ 254.69±51.24*#△ 92.43±7.55*#△F值 75.619 43.448 166.200 572.490 102.802 136.704 51.927 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05組別 例數(shù) 時間 CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+ IL-2(μg/L) INF-γ(pg/mL) IL-4(ng/L) IL-10(ng/L)對照組 60 41.05±3.24 36.10±2.84 1.12±0.18 5.21±0.78 115.69±10.23 196.24±26.21 99.35±8.47觀察組 60

2.2 支氣管哮喘急性發(fā)作不同程度T淋巴細(xì)胞相關(guān)因子與輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平 重度組、中度組患兒CD4+百分比、CD4+/CD8+比值及血清IL-4水平均高于輕度組，且重度組高于中度組，而重度組、中度組患兒CD8+百分比及血清IL-2、INF-γ、IL-10水平均低于輕度組，且重度組低于中度組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表2。

表2 支氣管哮喘急性發(fā)作不同程度患兒T淋巴細(xì)胞與輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平比較(?±s)

表2 支氣管哮喘急性發(fā)作不同程度患兒T淋巴細(xì)胞與輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平比較(?±s)

注：與輕度組比，▲P＜0.05；與中度組比，□P＜0.05。

組別 例數(shù) CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+ IL-2(μg/L) INF-γ(pg/mL) IL-4(ng/L) IL-10(ng/L)輕度組 15 45.65±4.33 33.20±1.96 1.35±0.15 2.85±0.42 105.33±8.25 251.02±42.11 92.20±5.42中度組 25 49.87±3.66▲ 31.63±1.87▲ 1.57±0.11▲ 1.28±0.41▲ 92.25±6.31▲ 352.59±42.20▲ 83.60±6.17▲重度組 20 56.74±4.05▲□ 28.77±1.94▲□ 1.79±0.08▲□ 0.87±0.23▲□ 87.62±5.79▲□ 421.60±33.84▲□ 72.36±8.39▲□F值 35.626 24.947 65.618 138.184 31.531 79.655 37.287 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3 相關(guān)性 經(jīng)Pearson相關(guān)系數(shù)分析顯示，CD4+百分比、CD4+/CD8+比值及血清IL-4水平均與小兒支氣管哮喘治療時間呈負(fù)相關(guān)（r= -0.241、-1.641、-0.541、0.587），CD8+百分比及血清IL-2、INF-γ、IL-10水平與小兒支氣管哮喘治療時間呈正相關(guān)（r= 0.587、0.587、0.998、0.574），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）；而CD4+百分比、CD4+/CD8+比值及血清IL-4水平均與小兒支氣管哮喘發(fā)展程度呈正相關(guān)（r= 0.998、0.324、0.742），CD8+百分比及血清IL-2、INF-γ、IL-10水平均與小兒支氣管哮喘發(fā)展程度呈負(fù)相關(guān)（r= -0.415、-0.668、-0.574、-0.692），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表3。

表3 T淋巴細(xì)胞相關(guān)因子、輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平與小兒支氣管哮喘治療時間、發(fā)作程度的相關(guān)性

3 討論

小兒支氣管哮喘是兒童常見的一種慢性呼吸系統(tǒng)疾病，屬于過敏性疾病，目前針對該疾病的發(fā)病機制尚未獲得明確研究結(jié)論，該病的發(fā)生、發(fā)展不僅受到內(nèi)分泌因素、環(huán)境因素及遺傳因素所影響，并與氣道炎癥、變態(tài)反應(yīng)及機體免疫功能紊亂密切相關(guān)。有關(guān)報道指出，T淋巴細(xì)胞與機體免疫功能具有密切的相關(guān)性，其可對蛋白質(zhì)抗原引起的免疫應(yīng)答產(chǎn)生較強的調(diào)節(jié)作用，而其中最為常見的細(xì)胞分別是CD4+T和CD8+T細(xì)胞，一旦這兩種細(xì)胞比例失調(diào)或其原本功能出現(xiàn)異常，則會對機體整個免疫系統(tǒng)帶來不良影響[5]。CD4+、CD8+百分比被認(rèn)為是整個T細(xì)胞細(xì)胞相關(guān)因子中的重要參數(shù)，而CD4+、CD8+百分比表達(dá)水平的高低則代表了體內(nèi)細(xì)胞免疫功能的強度。相關(guān)研究表明，當(dāng)機體受到過敏原的刺激之后，若出現(xiàn)速發(fā)性的哮喘反應(yīng)，外周血CD8+百分比會開始降低；而表現(xiàn)為遲發(fā)性哮喘反應(yīng)者，CD4+T細(xì)胞數(shù)量開始升高，CD8+T細(xì)胞數(shù)量變化可能并不明顯。因此可以認(rèn)為，當(dāng)CD4+T細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞的水平發(fā)生異常時，會導(dǎo)致患兒T淋巴細(xì)胞調(diào)節(jié)失衡，誘發(fā)哮喘；同時，有關(guān)研究對健康兒童和支氣管哮喘患兒的外周血CD4+、CD8+百分比水平進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)無論是發(fā)作期還是緩解期，患兒CD4+T細(xì)胞水平均高于健康兒童，與CD8+T細(xì)胞的水平低于健康兒童，說明T淋巴細(xì)胞可對支氣管哮喘患兒的疾病情況與發(fā)展程度進(jìn)行判斷[6]。本研究中，觀察組患兒各時間點CD4+百分比、CD4+/CD8+比值均高于對照組，CD8+百分比均低于對照組；隨著病情程度加重，患兒CD8+百分比逐漸升高而CD4+百分比、CD4+/CD8+比值逐漸降低，提示在支氣管哮喘患兒體內(nèi)存在著嚴(yán)重的機體免疫功能失衡的情況，以外周CD4+百分比升高、CD8+百分比降低為主要表現(xiàn)，在接受治療后，支氣管哮喘的病理改變得到好轉(zhuǎn)的同時，免疫功能恢復(fù)至平衡，CD4+T細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞的水平也逐漸恢復(fù)到正常范圍內(nèi)。

支氣管哮喘屬于一種慢性炎癥性反應(yīng)，體內(nèi)Th1/Th2失衡，主要以Th1功能降低作為主要表現(xiàn)，隨著Th1細(xì)胞水平的降低，也會對T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞產(chǎn)生刺激激活作用，而釋放出更多的免疫抑制物質(zhì)，影響機體的免疫功能，在臨床表現(xiàn)上則是進(jìn)一步的加速了氣道狹窄的進(jìn)程，誘發(fā)出更加嚴(yán)重的哮喘癥狀和病理表現(xiàn)。同時Th1和Th2可通過分泌細(xì)胞因子，形成相互之間的作用，Th1細(xì)胞主要分泌IL-2、INF-γ等，可能對哮喘的進(jìn)展產(chǎn)生一定的抑制效果[7]。而Th2細(xì)胞主要可分泌IL-4、IL-10等因子，與機體體液免疫具有密切的相關(guān)性。正是由Th1、Th2細(xì)胞因子分泌不同，其在人體內(nèi)體現(xiàn)出的免疫作用也存在明顯差異，一旦Th1/Th2平衡被打破，機體則難以維持正常的免疫狀態(tài)，機體易受到感染，促進(jìn)支氣管哮喘患兒病情發(fā)展。本研究中，觀察組患兒各時間點血清IL-4水平均高于對照組，血清IL-2、INF-γ、IL-10水平均低于對照組；隨著病情程度加重，患兒血清IL-4水平逐漸升高，而血清IL-2、INF-γ、IL-10水平逐漸降低，提示在小兒支氣管哮喘體內(nèi)存在著嚴(yán)重的機體免疫功能失衡的情況，通過治療時間的延長，機體免疫功能指標(biāo)失衡的情況開始得以好轉(zhuǎn)，臨床癥狀與體征逐漸消失。

相關(guān)研究顯示，支氣管哮喘患兒經(jīng)治療后，CD4+百分比與Foxp3 mRNA表達(dá)均升高，可發(fā)揮其免疫抑制功能，抑制Th2細(xì)胞活化，糾正Thl/Th2失衡，促進(jìn)哮喘緩解[8]；IL-2主要由Thl細(xì)胞產(chǎn)生，對嗜酸性粒細(xì)胞具有趨化作用，相關(guān)研究報道，發(fā)作期哮喘患兒外周血可溶性IL-2受體明顯低于對照組，病情緩解后受體有所升高，提示血清IL-2與支氣管哮喘患兒病情呈負(fù)相關(guān)[9]；在正常機體中，IFN-γ和IL-4互相拮抗，維持Th1/Th2平衡，當(dāng)機體受變應(yīng)原刺激時，Th1/Th2失衡，Th2占優(yōu)勢，分泌大量血清IL-4，抑制IFN-γ活性，促進(jìn)炎癥介質(zhì)釋放，使杯狀細(xì)胞增生，氣道黏液分泌增多，氣管增厚，導(dǎo)致氣道狹窄而促使哮喘發(fā)作；IL-10作為淋巴細(xì)胞合成抑制因子，能抑制自然殺傷細(xì)胞或者T淋巴細(xì)胞的活化，減輕呼吸道平滑肌的痙攣，其水平降低會導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞應(yīng)答水平的上升，加快對呼吸道高氣道反應(yīng)性的改變，加重病情。本研究結(jié)果顯示，CD4+百分比、CD4+/CD8+比值及血清IL-4均與小兒支氣管哮喘治療時間呈負(fù)相關(guān)，CD8+百分比及血清IL-2、INF-γ、IL-10與小兒支氣管哮喘治療時間呈正相關(guān)；而CD4+百分比、CD4+/CD8+比值及血清IL-4水平均與小兒支氣管哮喘發(fā)展程度呈正相關(guān)，CD8+百分比及血清IL-2、INF-γ、IL-10水平均與小兒支氣管哮喘發(fā)展程度呈負(fù)相關(guān)，提示T淋巴細(xì)胞相關(guān)因子與輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平與支氣管哮喘治療時間與發(fā)作程度密切相關(guān)。

綜上，T淋巴細(xì)胞相關(guān)因子與輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平均可反映支氣管哮喘發(fā)作程度和治療效果，臨床上可通過觀察支氣管哮喘患兒T淋巴細(xì)胞相關(guān)因子、輔助性T細(xì)胞相關(guān)因子水平來判定其病情嚴(yán)重程度，并可采取相應(yīng)治療措施來緩解患兒的病情。