裂隙淋巴細胞聯合血細胞檢測對百日咳的診斷價值

黃廣麗 李軍勤 李杰 趙麗靜 張秀芳

20世紀50年代各國開展大規模的百日咳疫苗接種，百日咳發病率、病死率明顯降低，然而據WHO統計全球仍有上千萬患兒，百日咳仍是全球重要的公共衛生問題[1]。我國百日咳疫苗覆蓋率較高，然而近年來我國百日咳發病率仍有升高，且有報道顯示個別地區有暴發流行現象[2-3]。百日咳是由百日咳鮑特菌、副百日咳鮑特菌引起的高度傳染性急性呼吸道疾病[4]。0～4歲嬰幼兒是百日咳發病率、病死率最高的人群，其中1歲以內患兒病死率高達60%，嚴重威脅嬰幼兒生命健康[5]。百日咳早期診斷主要依賴患兒臨床癥狀，但易發生不典型病例的誤診、漏診，因此，實驗室檢測是該病診斷的重要依據。細菌培養法是診斷百日咳的金標準，雖然其特異度較高，但其靈敏度易受外界因素的影響，且不宜標準化。應用ELISA法定量檢測抗百日咳毒素IgG抗體（PT-IgG）靈敏度、特異度均較高，但人體在接種疫苗后或急性期的患兒則無法檢出且對其他鮑特菌、副百日咳鮑特菌缺乏診斷價值[6]。裂隙淋巴細胞存在于百日咳患兒外周靜脈血中，基于ELISA法的不足與裂隙細胞的特點，本研究將裂隙淋巴細胞與血細胞檢測進行聯合，探討本病合理的診斷方法。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2018年1月至2021年6月邯鄲市婦幼保健院收治的疑似百日咳患兒108例為研究對象，其中男55例，女53例；年齡1～3（2.03±0.04）歲。根據百日咳桿菌核酸檢測結果，分為觀察組（百日咳桿菌核酸檢測結果陽性）68例和對照組（百日咳桿菌核酸檢測結果陰性）40例。觀察組患兒男38例，女30例；年齡1～3（2.02±0.03）歲；對照組患兒男21例，女19例；年齡1～3（1.09±0.03）歲；兩組患兒性別、年齡比較差異均無統計學意義（均P＞0.05）。納入標準：（1）年齡＜5歲的住院患兒；（2）有上呼吸道癥狀需要鑒別診斷者；（3）陣發性、痙攣性咳嗽、咳嗽后伴發嘔吐，存在呼吸暫停癥狀，雞鳴樣吸氣性回聲，結膜下出血，舌系帶潰瘍。排除標準：（1）近3個月有咳嗽、哮喘等癥狀；（2）存在自身免疫功能缺陷者；（3）氣道畸形、先天性心血管畸形等引起的咳嗽癥狀者；（4）過敏性氣道非特異性炎癥，或存在明確病原菌所致的毛細支氣管炎、氣管炎等；（5）腫瘤、異物、淋巴結腫大等所致氣道受壓而引起的咳嗽者；（6）咽喉壁膿腫、會咽炎、腺樣體肥大等胸腔外氣道疾病者；（7）心、肝、腎等重要器官嚴重功能障礙者。本研究經本院醫學倫理委員會批準，所有患兒家屬均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 百日咳桿菌核酸檢測 采用熒光PCR法。于患兒入院當天收集深部痰液，使用百日咳桿菌核酸測定試劑盒（上海之江生物科技股份有限公司）測定百日咳桿菌核酸是否陽性。陽性判定：熒光PCR法檢測到核酸序列即為陽性。

1.2.2 裂隙淋巴細胞計數檢測 于患兒入院當天采集外周靜脈血2 ml，將患兒血液進行手工推片制備合格血涂片2～3張，進行瑞氏染色。由有經驗的檢驗醫師在光學顯微鏡下觀察計數100個有核細胞中裂隙淋巴細胞所占比例。裂隙淋巴細胞形態特點：細胞圓形、胞體較小，胞質量少、染色深，清透、無顆粒，細胞核型不規則、染色質濃縮且致密，細胞核可表現為對稱的雙核或分葉狀、核仁缺失，或見深淺不等的切跡、裂縫。陽性判定：外周靜脈血涂片中存在裂隙淋巴細胞即為陽性。

1.2.3 WBC及淋巴細胞百分比檢測 于患兒入院當天采集外周靜脈血2 ml，使用SysmexXE-5000全自動血細胞分析儀檢測WBC及淋巴細胞百分比。陽性判定：WBC＞12×109/L、淋巴細胞百分比＞50%即為陽性。

1.2.4 PT-IgG檢測 采用ELISA法。于患兒入院當天采集外周靜脈血2 ml，并進行血清分離，保存于-20℃環境下，待檢。嚴格按照試劑盒操作步驟進行抗體檢測，陽性判定：超過同年齡組健康兒童百日咳特異性抗體檢測結果均數＋2個標準差者即為陽性。

1.3 統計學處理 采用SPSS 17.0統計軟件。方差不齊的計量資料以表示，組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗；兩組性別的差異及不同指標間靈敏度與特異度比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患兒鏡下裂隙淋巴細胞形態 108例患兒中，42例患兒血涂片中可見數量不等的裂隙淋巴細胞。顯微鏡下可見細胞質呈淺藍色透亮狀或藍色，且數量較少，無核仁；細胞體積小，圓形，染色較深且胞質量少；細胞核染色質聚集為深紫色且可見明顯裂隙，該裂隙貫穿于整個細胞，表現為不對稱雙核樣或雙核樣。

2.2 兩組患兒裂隙淋巴細胞計數、WBC、淋巴細胞百分比、PT-IgG水平比較 觀察組患兒裂隙淋巴細胞計數、WBC、淋巴細胞百分比、PT-IgG水平均高于對照組，差異均有統計學意義（均P＜0.01），見表1。

表1 兩組患兒裂隙淋巴細胞計數、WBC、淋巴細胞百分比、PT-IgG比較

2.3 不同指標靈敏度與特異度比較 108例患兒中，裂隙淋巴細胞計數陽性42例、WBC陽性63例、淋巴細胞百分比陽性71例、PT-IgG陽性14例。裂隙淋巴細胞計數靈敏度為 0.588（40/68），特異度為 0.950（38/40）；WBC靈敏度為0.809（55/68），特異度為0.800（32/40）；淋巴細胞百分比靈敏度為0.838（57/68），特異度為0.650（26/40）；PT-IgG靈敏度為0.192（13/68），特異度為0.975（39/40），見表2。裂隙淋巴細胞計數特異度高于WBC、淋巴細胞百分比，差異均有統計學意義（χ2=22.31、30.04，均P＜0.05），而靈敏度均低于前兩者，差異均有統計學意義（χ2=18.72、22.41，均P＜0.05）。裂隙淋巴細胞計數與PT-IgG特異度比較差異無統計學意義（χ2=0.35，P＞0.05）。

表2 不同指標陽性情況（例）

3 討論

百日咳主要通過飛沫經呼吸道傳播，以人體為主要宿主，其高發人群為嬰幼兒[7]。近年來百日咳發病率呈明顯上升趨勢，有學者提出“百日咳再現”[8]，且隨著百日咳疫苗的應用，患兒臨床表現不典型，給該病的早期診斷帶來困難，易發生漏診、誤診，而延誤治療則會導致并發癥發生率、病死率的升高[9]。目前，關于百日咳的實驗室診斷主要有病原學、血清百日咳毒素檢測、鼻咽拭子[10-13]。細菌培養是百日咳診斷的金標準，但該方法檢測周期長，且百日咳存在1～2周潛伏期，導致其在基層醫院開展困難，因此，探討簡便、快捷、準確的實驗室檢測方法是控制傳染的關鍵。

本研究顯示，觀察組患兒WBC、淋巴細胞百分比、PT-IgG水平均明顯高于對照組。百日咳毒素能夠促進淋巴細胞增殖、提高白細胞水平的免疫效應，因此百日咳患兒的實驗室檢查結果可見WBC、淋巴細胞異常[14-16]。雖然，淋巴細胞增多是百日咳的重要檢測特征，但從本研究來看，淋巴細胞在百日咳患兒中的特異度較低。Qing等[17]研究顯示，裂隙淋巴細胞由百日咳毒素誘導產生，從本研究來看裂隙淋巴細胞特異度明顯高于WBC、淋巴細胞百分比，這與Qing等[17]研究結果一致。有學者指出，從外周靜脈血涂片中讀取裂隙淋巴細胞計數是快速、簡單的百日咳診斷方法[18]。本研究顯示，裂隙細胞在鏡下有明顯的形態特征，易辨識，且外周靜脈血取樣、觀察簡單易行，適合在基層醫院開展。史海燕[19]對100例疑似百日咳病患兒進行百日咳毒素IgG抗體檢測，結果顯示抗體陽性率為22%，說明抗體檢測的靈敏度不高，若單純依靠抗體檢測容易漏診。

綜上所述，結合百日咳臨床表現，當患兒外周靜脈血WBC、淋巴細胞百分比升高，且觀察到裂隙淋巴細胞時應高度懷疑百日咳。在未獲得細菌培養的金標準結果時，注重顯微鏡下細胞形態變化對百日咳早期篩查具有重要意義。鑒于有報道指出，裂隙淋巴細胞可見于白血病、淋巴瘤患者外周靜脈血中[20]，故不能將裂隙淋巴細胞作為百日咳的單一診斷依據。本研究顯示裂隙淋巴細胞陽性的40例患兒中有38例確診百日咳感染，特異度為0.950，再次證明裂隙淋巴細胞出現與百日咳感染有關，可作為百日咳的特異性指標，考慮到裂隙淋巴細胞靈敏度低于特異度的特點，在臨床實驗室診斷中可將裂隙淋巴細胞計數與WBC、淋巴細胞百分比相結合，采取3者聯合診斷策略，以提高百日咳診斷的準確性。外周靜脈血涂片觀察裂隙淋巴細胞聯合血細胞檢測對百日咳診斷具有縮短診療時間、節約醫療成本的積極意義。