全自動血液成分分離機制備不同容量冷沉淀的質量評價

王 惟 柴婷婷 張雪松 李云強 劉祥君

長春市中心血站成分制備科，吉林長春 130033

冷沉淀是來源于新鮮冰凍血漿的再加工產品，因其具有容量小、不穩定凝血因子含量高等優點，在臨床廣泛應用[1-3]，其主要功能是補充Ⅷ因子、ⅩⅢ因子、血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）、纖維蛋白原和纖維結合蛋白。適應癥主要為纖維蛋白原缺乏引起的出血，可用于無特異性濃縮制劑使用時的Ⅷ因子缺乏癥、ⅩⅢ因子缺乏癥、血管性血友病、纖維蛋白異常及纖維蛋白原缺乏癥，也可用于大量輸血、彌散性血管內凝血（disseminated intravascular coagulation，DIC）以及其他治療方法無效的尿毒癥出血[4-5]。其臨床需求量逐年上升，采用傳統手工虹吸法制備冷沉淀凝血因子在增加制備數量方面尤顯吃力。長春市中心血站于2015年采用自動化離心法，用全自動血液成分分離機制備冷沉淀凝血因子。2019年9月1日開始實施的《血站技術操作規程》中將離心法制備冷沉淀凝血因子的終產品容量由20～30 ml 改為40～50 ml[6]。2019年8月對全自動血液成分分離機制備冷沉淀凝血因子的運行參數進行調整，并制備冷沉淀凝血因子，將調整參數前后制備的冷沉淀凝血因子分組比較，通過比較兩組冷沉淀的容量、Ⅷ因子含量、纖維蛋白原含量，驗證全自動血液成分分離機更改后參數的準確性、制備方法的有效性，對冷沉淀凝血因子的質量沒有影響，其各項質控檢測結果均符合《全血及成分血質量要求》[7]。

1 材料與方法

1.1 血漿來源

抽取長春市中心血站2019年1月至2020年4月采集的400 ml 合格血液60 袋，按照新鮮冰凍血漿制備標準操作規程制備而成。

1.2 設備、耗材、試劑

設備：-50℃血漿速凍機（MBF21，盧森堡多美達公司）、-40℃醫用低溫保存冰箱（DW-40L508，青島海爾集團）、4℃血液保存冰箱[MBR-506D（H），日本松下電器產業株式會社]、低溫離心機（賀利氏6000i，賽默飛世爾科技公司）、微電腦配平儀（LPYⅢ，蘇州市醫用儀器廠）、全自動血液成分分離機[CompoMat G5，費森尤斯卡比（中國）投資有限公司]、全自動血凝分析儀（ACL TOP300，沃芬集團）；耗材：CPDA 抗凝劑一次性使用去白細胞塑料血袋（山東威高醫用高分子生物制品股份有限公司）；試劑：纖維蛋白原測定試劑、因子Ⅷ缺乏血漿試劑、APTT 試劑、因子稀釋液、正常值血凝試劑質控品、低值血凝試劑質控品、ClcanA、ClcanB、沖洗液（沃芬集團）。

1.3 參數設定

全自動血液成分分離機的參數設置見表1～2。

表1 A 組全自動血液成分分離機設置參數

表2 B 組全自動血液成分分離機設置參數

1.4 制備方法

1.4.1 A 組使用全自動血液成分分離機設置參數制備將合格新鮮冰凍血漿（冷沉淀半成品）從-40℃醫用低溫保存冰箱取出，在血液低溫操作臺上放置3～5 min使漿袋邊緣變軟，將其放置于2～6℃冰箱中融化16 h后，待新鮮冰凍血漿幾乎全部融化，取出配平、離心，離心轉速為4000 r/min，相對離心力為5170×g，離心半徑為28.9 cm，離心時間為20 min，離心溫度為2℃。將離心后的新鮮冰凍血漿（冷沉淀半成品）袋掛在擠壓板秤的兩個懸掛軸上，其上方導管分別卡入1 和2號感應閥門內，接近空袋根部的導管卡入3 號感應閥門內，空袋放在排氣夾板外，并保證各管路通暢，用掃碼槍先掃描主袋獻血條碼，再掃描空袋獻血條碼，最后掃描工作人員工號條碼，全自動血液成分分離機門關閉，開始運行分離，直至A8 探測器探測到冷沉淀剩余容量20～30 ml 時，各感應閥門卡夾會自動夾住管路，分離機分別對冷沉淀凝血因子和去冷沉淀凝血因子冰凍血漿進行稱重，熱合，工作人員確認熱合完好、斷離，速凍。

1.4.2 B 組使用全自動血液成分分離機設置參數制備操作方法同1.4.1，直至A8 探測器探測到冷沉淀剩余容量40～50 ml 時，各感應閥門卡夾會自動夾住管路，分離機分別對冷沉淀凝血因子和去冷沉淀凝血因子冰凍血漿進行稱重，熱合，工作人員確認熱合完好、斷離，速凍。

1.5 檢測方法

將待檢測的冷沉淀凝血因子置于37℃恒溫水浴箱，待其完全融化充分混勻后將袋內血漿擠入至塑料試管內3 ml，開始離心，離心轉速3000 r/min，離心時間20 min，離心后取上清約1 ml，上機檢測。

1.6 質量標準

容量：標示量（ml）±10%；來源于200 ml 全血的冷沉淀凝血因子（1 U）：Ⅷ因子含量≥40 U/袋，纖維蛋白原含量≥75 mg/袋；來源于300 ml 全血的冷沉淀凝血因子（1.5 U）：Ⅷ因子含量≥60 U/袋，纖維蛋白原含量≥113 mg/袋；來源于400 ml 全血制備的冷沉淀凝血因子（2 U）：Ⅷ因子含量≥80 U/袋；纖維蛋白原含量≥150 mg/袋[6]。

1.7 統計學方法

采用SPSS 22.0 統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

A 組的容量低于B 組，差異有統計學意義（P＜0.001）。A 組的Ⅷ因子含量、纖維蛋白原含量與B 組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）（表3）。

表3 全自動血液成分分離機制備不同容量冷沉淀凝血因子質控檢測結果的比較（±s）

表3 全自動血液成分分離機制備不同容量冷沉淀凝血因子質控檢測結果的比較（±s）

組別 例數 容量（ml/袋）Ⅷ因子含量（U/袋）纖維蛋白原含量（mg/袋）A 組（20～30 ml）B 組（40～50 ml）t 值P 值30 30 29.73±0.74 44.57±2.80 27.886＜0.001 103.78±15.06 104.68±24.42 0.860＞0.05 289.60±58.72 296.70±55.29 0.645＞0.05

3 討論

冷沉淀是用于輸血治療的常用成分血類型[8]，在其進入機體后可形成纖維蛋白膜并對潰瘍創面產生機械牽拉作用，從而使創口收縮，并補充大量Ⅷ、Ⅰ等凝血因子，提高患者凝血因子水平，改善凝血功能[9]。凝血因子治療急性大出血可很好地激活患者內源凝血系統[10]，盡早給予患者輸注冷沉淀對于凝血功能的糾正和搶救生命起到重要作用，同時還能夠降低其他血液制劑的輸注量，大大延長了患者的輸血壽命，最大程度降低患者的不良反應發生率[11]，且目前更多用于術后出血等治療[12]，根據長春市中心血站供血科的反饋，長春市臨床在進行器官移植手術中，冷沉淀的應用率達到較高的水平，臨床效果良好，冷沉淀一度呈現供不應求的局面。

隨著科技發展的日新月異，血液成分制備技術也在不斷完善，傳統手工操作逐步向自動化設備發展和轉變。全自動血液分離機是現代信息社會的產物之一[13]，是采用新一代電動驅動系統，對所有擠壓板推進的力度、時間、距離、速度進行精準控制[14]。本研究對全自動血液成分分離機的運行參數進行調整，設定適合的運行參數來制備冷沉淀凝血因子。本研究結果顯示，首先檢查血袋在指定的感應閥門安裝是否到位，將血漿袋稱重去皮。上下擠壓板同時移動到50 mm，移除大部分去冷沉淀冰凍血漿，下擠壓板移動到容量定量位置A 組為56.7 mm，容量為20～30 ml；B 組為55.2 mm，容量為40～50 ml；A 組和B 組下擠壓板相差1.5 mm。上擠壓板移動到58.1 mm 擠凈多余的去冷沉淀冰凍血漿。感應閥門關閉，上下擠壓板復位。熱合導管，并對去冷沉淀冰凍血漿容量進行稱重。表2顯示按照表1設定的參數，用全自動血液成分分離機制備不同容量的冷沉淀凝血因子，質控結果顯示A 組的容量低于B 組，差異有統計學意義 （P＜0.001）；兩組的Ⅷ因子含量和纖維蛋白原含量比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。質控檢測結果均達到《全血及成分血質量要求》[7][容量：標示量（ml）±10%；來源于400 ml 全血制備的冷沉淀凝血因子（2 U）：Ⅷ因子含量≥80 U/袋；纖維蛋白原含量≥150 mg/袋]。其中B 組容量更接近平均含量，保證冷沉淀凝血因子的質量，需控制好制冷沉淀的容量[15]，數據顯示容量穩定；且B 組的Ⅷ因子含量和纖維蛋白原含量均為高出國家標準1.5～2倍，與侯貽莉等[16]的研究結果一致，進一步證明全自動血液成分分離機在冷沉淀制備中的應用價值。但本研究樣本量較少，還需進一步擴大樣本量深入研究。

綜上所述，血液質量是保障臨床治療效果的前提[17-18]，冷沉淀凝血因子質量受制備方法影響[19-20]，采用全自動血液成分分離機制備不同容量冷沉淀的質量無差別，參數設定準確、制備方法穩定。并且此制備方法實現了自動化、標準化、信息化，值得推廣與應用。