肝癌組織中長鏈非編碼RNA SNHG3的表達及臨床意義

陳繼德

重慶市璧山區人民醫院檢驗科，重慶 402760

長鏈非編碼RNA(LncRNA)為不編碼蛋白質的RNA，其具有多種生物學功能，參與腫瘤細胞的遷移、增殖等[1]。既往研究顯示，LncRNA與肝癌[2]、肺癌[3]等多種惡性腫瘤相關。有研究報道，LncRNA SNHG3在骨肉瘤[4]、食管癌[5]等腫瘤組織中表達異常。SNHG3位于染色體1p35.3上，本課題組前期利用芯片技術篩選發現，LncRNA SNHG3在肝癌組織中表達上調。因此，為進一步探討LncRNA SNHG3與肝癌的關系，本研究對94例肝癌患者進行研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年1月至2021年1月于本院接受手術的原發性肝癌患者94例作為研究對象，均經病理檢查證實，且術前均未行放化療。所有患者對本研究知情，并簽署知情同意書。本研究經本院醫學倫理委員會批準。

1.2方法

1.2.1標本收集 收集術后肝癌組織及癌旁組織(經病理檢查證實為正常肝組織)標本，將新鮮組織標本經冷凍處理后置于-80 ℃冰箱待檢。

1.2.2引物設計 委托上海生工生物工程公司合成LncRNA SNHG3及內參GAPDH引物。LncRNA SNHG3上游引物序列為5′-CACGCCACACCUUUCCGGGAGUCACAAACUGGCACUGACUGCUG-3′，下游引物序列為5′-GCAUCAACAACAU GACUCCGGUC-3′；內參GAPDH上游引物序列為5′-TGCGCCGTCAGCCATCA-3′，下游引物序列為5′-AGCACTAATCTGCTGTAGTC-3′。

1.2.3總RNA提取 根據Trizol試劑盒(日本Takara公司)說明書操作，取組織標本50 mg，超聲勻漿后，經1‰ 焦碳酸二乙酯(DEPC)水處理后，提取組織標本中總RNA，測定純度及濃度，另取1 μL RNA樣品檢測其完整性。

1.2.4逆轉錄反應 根據逆轉錄試劑盒(日本Takara公司)說明書操作。總反應體系(20 μL)：1 μL引物，2 μL RNA樣品，1 μL逆轉錄酶，4 μL 5×RT 緩沖液，0.5 μL RNase抑制劑，用不含RNase的H2O補足至20 μL。反應條件：32 ℃ 10 min，42 ℃ 15 min，85 ℃ 1 min，4 ℃ 10 min。將產物置于-18 ℃保存。

1.2.5PCR擴增 采用TP950實時熒光定量PCR儀(日本Takara公司)，按照PCR試劑盒(日本Takara公司)說明書操作。總反應體系(25 μL)：2 μL稀釋的cDNA，2 μL上、下游引物，12.5 μL SYBR Premix EX TaqTMⅡ，8.5 μL ddH2O水。反應條件：85 ℃ 5 min，95 ℃ 1 min，60 ℃ 2 min，42 ℃ 30 s，40個循環。

1.2.6相對表達量計算 以GAPDH為內參，采用2-ΔΔCt法計算LncRNA SNHG3的相對表達量。

2 結 果

2.1組織中LncRNA SNHG3的相對表達量 肝癌組織LncRNA SNHG3的相對表達量為(2.23±0.94)，明顯高于癌旁組織(0.69±0.21)，差異有統計學意義(t=15.502，P<0.001)。

2.2不同臨床特征肝癌患者LncRNA SNHG3相對表達量比較 不同美國癌癥聯合會(AJCC)分期、淋巴結轉移情況肝癌患者肝癌組織LncRNA SNHG3相對表達量比較，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 不同臨床特征肝癌患者LncRNA SNHG3相對表達量比較

2.3LncRNA SNHG3診斷肝癌的ROC曲線 LncRNA SNHG3診斷肝癌的曲線下面積(AUC)為0.803(95%CI：0.711～0.936，P<0.05)，診斷特異度為82.61%，靈敏度為89.77%。

3 討 論

LncRNA為不編碼蛋白質的RNA，其可在多個層面上調控基因的表達[6-7]。最近研究顯示，LncRNA在腫瘤細胞遷移、侵襲等過程中發揮調控作用，LncRNA與腫瘤的關系已成為臨床研究的熱點[8]。既往研究顯示，LncRNA參與肝癌的發生、發展過程，且與腫瘤患者預后密切相關[9]。姚敬等[10]研究指出，肝癌細胞中LncRNAFEZF1-AS1的上調表達可促進肝癌細胞的增殖，增強肝癌細胞的侵襲、遷移能力。張楊等[11]研究顯示，LncRNA ST8SIA6-AS1在肝癌組織中表達上調，其可通過調節miR-142-3p促進肝癌細胞侵襲、增殖。李菠等[12]研究發現，LncRNAHOXA11-AS在肝癌組織中表達上調，其可能參與肝癌的發生、發展。本課題組前期利用芯片技術篩選發現LncRNA SNHG3在肝癌組織中表達上調。因此，推測LncRNA SNHG3可能與肝癌的發生、進展相關。

本研究結果發現，肝癌組織中LncRNA SNHG3的相對表達量明顯高于癌旁組織，提示肝癌組織中LncRNA SNHG3呈高表達。郭曉鋒等[13]研究顯示，食管鱗狀細胞癌組織中lncRNA SNHG3表達升高，且其表達水平與癌細胞分化程度、淋巴結轉移、臨床分期明顯相關。谷建斌等[14]研究顯示，LncRNA SNHG3在胃癌組織中的表達量較高，且其與胃癌的發生、進展有關。另有研究報道，LncRNA SNHG3 在前列腺癌細胞系中呈高表達，其可通過“海綿樣”作用抑制miR-577水平而上調 SMURF1的表達來加速前列腺癌進展，其可能成為前列腺癌的生物標志物[15]。另外，有研究發現，LncRNA SNHG3可通過調控miR-758-3p/SRGN軸促進急性髓系白血病細胞生長[16]。由以上研究可知，LncRNA SNHG3在多種惡性腫瘤組織中表達異常，推測其可能參與腫瘤的發生、進展過程。

本研究結果顯示，AJCC分期高、發生淋巴結轉移的肝癌組織LncRNA SNHG3的相對表達量明顯升高，提示LncRNA SNHG3的表達與肝癌的發生及轉移有關，其可能在肝癌中發揮促癌作用。既往研究顯示，LncRNA SNHG3的高表達與肝內膽管癌患者預后明顯相關，LncRNA SNHG3是預測肝內膽管癌患者預后的獨立生物標志物[17]。另有研究發現，LncRNA SNHG3可通過調節miR-384/HDGF軸加速膠質瘤進展，敲低SNHG3可誘導細胞凋亡，抑制腫瘤的增殖和侵襲[18]。本研究中ROC曲線分析結果顯示，LncRNA SNHG3診斷肝癌的AUC為0.803(95%CI：0.711～0.936，P<0.05)，診斷特異度為82.61%，靈敏度為89.77%。本研究結果提示LncRNA SNHG3診斷肝癌的特異度、靈敏度較高，其在肝癌的發生、發展過程中發揮重要作用，可能成為肝癌臨床診斷標志物。據此推測LncRNA SNHG3在腫瘤組織中發揮促癌作用。

綜上所述，肝癌組織中LncRNA SNHG3呈高表達，其可能與肝癌的發生、發展有關。