α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα與艾滋病病毒感染患者預后的相關性分析

劉 凌，徐紅帥，趙俊玲

艾滋病，亦稱“獲得性免疫缺陷綜合征”，是一種由于機體感染人類免疫缺陷病毒(immunodeficiency virus,HIV)所引起的全身性疾病[1]。艾滋病病毒能夠導致人體不同程度的免疫功能缺陷，未經過治療的患者在疾病的晚期極易發生各種并發癥和惡性腫瘤，最終導致死亡[2]。艾滋病是一種危害性極大的傳染病，男性和女性均可發病。其傳染源較為特殊，感染HIV的人都是該病的傳染源，其中包括了HIV感染者和艾滋病患者。HIV病毒主要存在于傳染源的血液、精液、陰道分泌物、羊水等體液中，傳染的途徑為性接觸、經血液以及血制品、母嬰傳播[3-4]。其發病的病因只有一種，為HIV侵襲機體之后造成感染，HIV侵犯人體的免疫系統，最終導致人體細胞的功能缺陷，然后引起各種機會性感染和腫瘤的發生[5]。該文研究了艾滋病病毒感染患者α1-抗胰蛋白酶、重組人趨化因子(recombinant human chemokines,CXCL12)、白細胞介素-15受體阿爾法(interleukin-15 receptor alpha,IL-15Rα)表達，旨在探究三者與艾滋病病毒感染患者預后的相關性。

1 材料與方法

1.1 研究對象選取2019年1月—2020年1月與錦州傳染病醫院病理學檢測確診為艾滋病病毒感染患者154例，為艾滋病組，男性89例，女性65例，年齡26～58(42.20±9.44)歲。另隨機選取于該院進行體檢的健康志愿者154例作為對照組，男性有78例，女性76例，年齡21～55(38.00±13.6)歲。按照疾病的分期將患者分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期，各期男/女分別為16/10、8/6、29/22、28/16。所有患者一般資料對比無統計學意義，具有可比性。納入標準：所有患者均符合中華醫學會中對艾滋病病毒感染患者的診斷標準[6]。排除標準：① 妊娠期間患者；② 合并心、肝、腎等器官功能不全者；③ 依從性差者。所有患者及家屬簽署知情通知書。

1.2 研究方法

1.2.1患者疾病分期 根據病理學和臨床癥狀檢測將患者分為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期[7]，Ⅰ期亦可稱之為急性感染期；Ⅱ期可稱之為潛伏期，該病期發生時一般不會發生任何的臨床癥狀，潛伏期一般是指從感染HIV開始到出現艾滋病臨床癥狀的這一段時間；Ⅲ期可稱之為艾滋病前期；Ⅳ期為典型的艾滋病期。

1.2.2取材 抽取所有患者空腹肘靜脈血5 ml，進行離心處理，分離血清后放置-4 ℃環境下保存待用。

1.2.3CD3、CD4水平檢測 使用間接法檢測CD3、CD4水平：將待測空腹靜脈血5 ml/例傳代到5孔板中，放在溫度37 ℃、5% CO2、飽和濕度環境下培養1、2、3 d，然后再加入濃度為0.25%的胰蛋白酶進行消化，然后用離心機2 000 r/min的轉速離心5 min收取細胞，收取細胞后使用PBS緩沖液洗滌3 min，再重復洗滌2次，洗滌完成后將以2 000 r/min的轉速離心機分離后收集細胞后加入1 ml 碘化丙啶(propidium iodide,PI)染液，注意避光的常溫下放置1 h后，然后再用特異熒光標記，在鞘液包裹下流動，期間會發射出光子，流式細胞儀進行檢測計數管內T細胞亞群CD3、CD4水平。

1.2.4α1-抗胰蛋白酶、CXCL12表達檢測 首先使用PBS緩沖液對標本進行沖洗，隨后裂解30 min，裂解后測定其蛋白濃度。取得20 μg/孔蛋白質進行電泳，電泳的同時加入蛋白緩沖液，10 min后把電轉膜放置到濃度為10%的牛奶中進行浸泡，常溫環境下封閉2 h。封閉后結合一抗孵育1 d，第二天取出后使用TBST液進行沖洗，隨后結合二抗。1 h后進行清洗、顯色，對α1-抗胰蛋白酶、CXCL12表達進行檢測。

1.2.5IL-15Rα表達檢測 使用PC-PCR檢測IL-15Rα表達：提取細胞總RNA，檢測RNA純度、含量，逆轉錄處理后獲得cDNA，使用Primer5.0軟件設計引物，采用2-ΔΔCt方法計算，內參U6。設置反轉錄反應條件：25 ℃、10 min,40 ℃、60 min,85 ℃、5 min；設置擴增條件:94 ℃、20 s,72 ℃、30 s,60 ℃、30 s,35個循環，采用2-ΔΔCt方法計算出需要檢測的miR-21表達量。

2 結果

2.1 艾滋病患者和健康志愿者T淋巴細胞亞群水平檢測與對照組相比，艾滋病組患者CD4、CD8水平異常下降，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 對照組與艾滋病組CD4、CD8水平比較

2.2 艾滋病患者和健康志愿者α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達對比與對照組相比，艾滋病組患者α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達均有所上升(P<0.05)。見表2。

表2 對照組與艾滋病組α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達對比

2.3 艾滋病病毒感染患者不同疾病分期中α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達對比與Ⅰ期患者相比，Ⅱ期患者體內α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達升高(P<0.05)；與Ⅱ期患者相比，Ⅲ期患者體內α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達升高(P<0.05)；與Ⅲ期患者相比，Ⅳ期患者體內α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達升高(P<0.05)。見表3、圖1。

表3 不同艾滋病期α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達對比

圖1 α1-抗胰蛋白酶、CXCL12表達Western blot圖A:Ⅰ期患者；B：Ⅱ期患者；C：Ⅲ期患者；D：Ⅳ期患者；與Ⅰ期患者比較：*P<0.05；與Ⅱ期患者比較：#P<0.05；與Ⅲ期患者比較：&P<0.05

2.4 艾滋病預后Logistic回歸分析對艾滋病患者α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達進行Logistic回歸分析，見表4。

表4 艾滋病預后Logistic回歸分析

2.5 艾滋病預后α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達相關性圖α1-抗胰蛋白酶、IL-15Rα表達之間呈正相關(r=0.508，P=0.001)；α1-抗胰蛋白酶、CXCL12之間呈正相關(r=0.331，P=0.001)；CXCL12、IL-15Rα表達之間呈正相關(r=0.371，P=0.001)。見圖2。

圖2 α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達相關性圖

3 討論

艾滋病是一種由HIV感染所引起的慢性致死性傳染病[7]。是一種危害性極大的傳染病，HIV是一種能夠能夠攻擊人體免疫系統的病毒，HIV病毒主要以人體免疫系統中重要的CD4+T淋巴細胞作為主要目標進行攻擊，大量地破壞該細胞，導致人體的免疫功能喪失，最終引起人體感染各種疾病，嚴重威脅患者的生命安全[8]。艾滋病病毒感染易發生于青壯年，即性生活較為活躍的年齡段。目前艾滋病在中國已經列入乙類法定傳染病，并且被列為國境衛生監測傳染病之一[9]。

CD4細胞時人體免疫細胞中的一種重要的免疫細胞，其主要是由Th細胞表達，是Th細胞TCR識別的抗原的抗體。大量臨床研究表明，CD4是HIV主要受體，有著“通風報信”的作用，對CD4細胞進行檢測，能夠對艾滋病的診斷、治療效果的判定和對患者的免疫功能的判定有著重要的意義，其原因是CD4細胞是艾滋病病毒的第一攻擊對象[10-11]。CD8細胞有著殺傷被感染細胞和癌細胞的作用，當艾滋病病毒進入到人體后，會感染體內的CD4細胞，當CD4細胞被感染后便失去可“通風報信”的作用，而CD8細胞便無法殺傷被感染細胞和癌細胞，最終導致機會性感染和癌癥[12]。趙 鵬 等[13]研究提示，艾滋病病毒感染患者CD4、CD8水平下降，說明CD4、CD8與艾滋病有著密切的關聯。該研究結果顯示，艾滋病病毒感染患者CD4、CD8水平有所下降，與上述一致，說明CD4、CD8水平與艾滋病有著密切的關聯，對其進行檢測，能夠較為準確的評判艾滋病病毒感染的發生發展和預后，且具有一定的相關性。

α1-抗胰蛋白酶是一種單鏈糖蛋白，α1-抗胰蛋白酶聯合原發性甲胎蛋白能夠提高對癌癥的檢出率，且與胰島素存在著競爭關系。CXCL12作為趨化因子CXC家族中的一員，由骨髓細胞分泌生成而來，并且這種分泌可持續不斷，是一種持續表達的趨化因子。CXCL12與艾滋病有著密切的關聯，對其進行檢測，能夠對艾滋病病毒感染過程和發展進行較為準確的評價。黃富強[14]的研究結果顯示，艾滋病病毒感染患者體內CXCL12表達升高，說明CXCL12表達與艾滋病患者有著密切的關聯。IL-15Rα制造的蛋白質與肌肉收縮密切相關，且還與艾滋病有著密切的關聯，任園園 等[15]的研究表明，IL-15Rα在艾滋病病毒感染患者體中存在，且呈高表達，說明IL-15Rα與艾滋病病毒感染有著密切的關聯。該研究中對α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα檢測顯示，艾滋病病毒感染患者體內α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα均呈現高表達，說明α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達與艾滋病病毒感染有著密切的關聯，且對α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達與艾滋病病毒感染進行Logistic回歸分析提示，α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達與艾滋病病毒感染的預后有著一定的相關性，呈正相關存在。

綜上所述，α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα表達與艾滋病病毒感染患者有著密切的關聯，對其進行檢測能夠較為準確的對艾滋病病毒感染的發生發展進行評價，且α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα與艾滋病病毒感染患者預后有著相關性。雖然上述結果顯示α1-抗胰蛋白酶、CXCL12、IL-15Rα與艾滋病病毒感染的發生發展以及預后密切相關，但本文研究中選取病例較少，存在著一定的局限性，所以研究結果仍需大樣本、多中心的試驗來證實。