NF-κB、25-(OH)D3、CK-MB在兒童病毒性腹瀉中的表達(dá)及臨床意義

孟祥會(huì)，陳 營，董 旭

(錦州市中心醫(yī)院 兒科,遼寧 錦州121000)

病毒性腹瀉屬于感染性腹瀉的一種，由病毒感染所致，其臨床癥狀多表現(xiàn)為嘔吐、排便次數(shù)增多、機(jī)體水電解質(zhì)紊亂等，其中以輪狀病毒(Rotavirus，RV)感染性腹瀉最為常見，另外因兒童各器官功能與成人相比尚未發(fā)育成熟，免疫功能低下，加之消化系統(tǒng)酶系活性較低、消化液分泌不足，較易受到病毒入侵，最終導(dǎo)致病毒性腹瀉的發(fā)生[1-3]。目前隨著臨床上對病毒性腹瀉的不斷深入研究發(fā)現(xiàn)，此病的發(fā)生與多種因素共同作用相關(guān)，核因子-κB(Nuclear factor- κB，NF-κB)在臨床上被認(rèn)為與機(jī)體炎癥反應(yīng)相關(guān)，認(rèn)為其在腹瀉發(fā)生過程中發(fā)揮著重要的作用[4]。研究顯示[5]，維生素D在腸道正常防御中就有重要的意義，適量的維生素D可保證腸道黏膜細(xì)胞發(fā)揮正常功能，但當(dāng)其缺乏時(shí)腸道正常防御被破壞，臨床上常用25羥基維生素D3(25 Hydroxylic Vitamin D3，25-(OH)D3)水平高低評價(jià)機(jī)體維生素D含量。另外腹瀉發(fā)生后患兒多伴隨著胴體過量產(chǎn)生、水分缺失等表現(xiàn)，上述表現(xiàn)可誘發(fā)酸中毒或者脫水，進(jìn)而損傷心肌，心肌損傷可導(dǎo)致心肌酶譜改變，其中以肌酸激酶同工酶(Creatine kinase isoenzyme，CK-MB)升高最為常見[6]。目前已有上述各項(xiàng)指標(biāo)在腹瀉中的研究，但并未有研究將三者聯(lián)合應(yīng)用于病毒性腹瀉的診斷中，鑒于此，在本文中首先分析病毒性腹瀉患兒血中上述指標(biāo)含量，再次分析三者對此病的診斷價(jià)值，以期望用于臨床此病的診治。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2020年1月-2021年1月于錦州市中心醫(yī)院就診的腹瀉患兒189例作為研究對象，根據(jù)是否為病毒性腹瀉分為病毒性腹瀉組121例、非病毒性腹瀉組68例，同期選取于我院健康體檢的健康兒童80例作為健康組。3組在性別比例、平均年齡、平均BMI等一般資料中均衡可比(P>0.05)，見表1。本次研究所有相關(guān)事項(xiàng)研究對象家屬均知情同意，簽署了知情同意書，且經(jīng)過我院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

表1 3組一般資料對比

納入標(biāo)準(zhǔn)：病毒性腹瀉組、非病毒性腹瀉組均符合《兒童腹瀉病診斷治療原則的專家共識(shí)》[7]中對腹瀉的診斷標(biāo)準(zhǔn)，有明顯的腹瀉、持續(xù)發(fā)熱、嘔吐等癥狀，大便性狀為水樣便、稀爛便、膿血便等，大便次數(shù)明顯增加。健康組無腹瀉、發(fā)熱、嘔吐等表現(xiàn)，大便癥狀，身體健康無疾病。

排除標(biāo)準(zhǔn)：多種病原菌混合感染者；合并心肝腎等重要臟器功能不全者；發(fā)育不全者；自閉、精神障礙、溝通障礙者；合并免疫系統(tǒng)疾病者；合并先天性心臟病等先天性疾病者。

1.2 檢測方法

樣本采集：采集所有研究對象入組后次日清晨空腹靜脈血3 ml，以離心半徑5 cm、轉(zhuǎn)速3 000 r/min離心處理10 min，分離上層血清，-80℃保存待檢。

采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)測定血清NF-κB、25-(OH)D3水平，NF-κB ELISA試劑盒由上海心語生物科技有限公司提供，25-(OH)D3 ELISA試劑盒由上海雅吉生物科技有限公司提供。采用全自動(dòng)生化分析儀測定血清中CK-MB水平。

1.3 指標(biāo)觀察

對比分析NF-κB、25-(OH)D3、CK-MB在3組兒童、病毒性腹瀉組不同感染類型、不同病情階段的差異，采用ROC曲線分析NF-κB、25-(OH)D3、CK-MB對兒童病毒性腹瀉的診斷價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 NF-κB、25-(OH)D3、CK-MB在健康組、非病毒性腹瀉組、病毒性腹瀉組中的表達(dá)差異

非病毒性腹瀉組、病毒性腹瀉組NF-κB、CK-MB水平高于健康組，25-(OH)D3水平低于健康組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；病毒性腹瀉組NF-κB、CK-MB水平高于非病毒性腹瀉組，25-(OH)D3水平低于非病毒性腹瀉組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 NF-κB、25-(OH)D3、CK-MB在健康組、非病毒性腹瀉組、病毒性腹瀉組中的表達(dá)差異

2.2 NF-κB、25-(OH)D3、CK-MB在病毒性腹瀉組患兒病毒感染類型中的表達(dá)差異

RV感染患兒NF-κB、CK-MB水平高于非RV感染患兒，25-(OH)D3水平低于非RV感染患兒，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 NF-κB、25-(OH)D3、CK-MB在病毒性腹瀉組患兒病毒感染類型中的表達(dá)差異

2.3 NF-κB、25-(OH)D3、CK-MB在病毒性腹瀉組不同病情階段中的表達(dá)差異

持續(xù)性期、慢性期NF-κB、CK-MB水平高于急性期，25-(OH)D3水平低于急性期，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；慢性期NF-κB、CK-MB水平高于持續(xù)性期，25-(OH)D3水平低于持續(xù)性期，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表4 NF-κB、25-(OH)D3、CK-MB在病毒性腹瀉組不同病情階段中的表達(dá)差異

2.4 ROC曲線分析NF-κB、25-(OH)D3、CK-MB對兒童病毒性腹瀉的診斷價(jià)值

與NF-κB、25-(OH)D3、CK-MB單項(xiàng)診斷相比，三項(xiàng)聯(lián)合對兒童病毒性腹瀉的診斷價(jià)值較高(P<0.05)，見表5。

表5 NF-κB、25-(OH)D3、CK-MB對兒童病毒性腹瀉的診斷價(jià)值分析

3 討論

病毒性腹瀉為在兒科較為常見的感染性疾病，嚴(yán)重者可致死，因此有效的診治對疾病控制和改善患兒預(yù)后，降低病死率尤為重要[8-9]。

研究認(rèn)為[10]，病毒性腹瀉發(fā)生后Toll樣受體會(huì)經(jīng)激活NF-κB，進(jìn)而促進(jìn)炎癥介質(zhì)的釋放，介導(dǎo)腸道黏膜內(nèi)免疫炎癥反應(yīng)，加速疾病進(jìn)展。NF-κB屬于Toll樣受體下游調(diào)控蛋白，是炎癥反應(yīng)過程中較為關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子，當(dāng)其被激活后，會(huì)誘發(fā)級聯(lián)炎癥反應(yīng)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明[11-13]，當(dāng)NF-κB被激活后會(huì)影響胃腸刺激相關(guān)因子的表達(dá)，導(dǎo)致腸粘膜能量代謝紊亂，誘發(fā)腹瀉的發(fā)生。本文結(jié)果顯示，與健康兒童和非病毒性腹瀉兒童相比，NF-κB在病毒性腹瀉患兒中表達(dá)明顯升高，且與患兒病毒感染類型、疾病階段相關(guān)，其中在RV感染和疾病處于慢性期中升高更為顯著，此結(jié)果提示，NF-κB可能參與病毒性腹瀉的發(fā)生發(fā)展，且與患兒病毒感染類型相關(guān)，分析其原因可能與病毒入侵后機(jī)體出現(xiàn)炎癥級聯(lián)反應(yīng)，激活NF-κB表達(dá)，而致腸粘膜炎癥浸潤，影響正常能量代謝，抑制腸道酶活性，而影響腸道吸收消化功能，最終導(dǎo)致腹瀉的發(fā)生相關(guān)，且隨著病程的延長，患兒上述變化更明顯，進(jìn)而導(dǎo)致NF-κB表達(dá)量更為加劇。而在此過程中以RV病毒感染最為嚴(yán)重，進(jìn)一步推測其原因可能為與非RV病毒相比，RV病毒對患兒腸的侵襲性更高，能量代謝嚴(yán)重失調(diào)，局部炎癥反應(yīng)加劇致NF-κB表達(dá)升高相關(guān)。

維生素D為類固醇衍生物，其可促進(jìn)鈣的吸收，調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌-免疫功能，在免疫調(diào)節(jié)、抗炎等過程中具有重要的作用。隨著臨床上的不斷深入研究發(fā)現(xiàn)，足量的維生素D可在一定程度上維持正常的腸道黏膜細(xì)胞功能，增強(qiáng)防御素的表達(dá)，在腸道正常防御中發(fā)揮著重要的作用[14-15]。維生素D在機(jī)體內(nèi)以25-(OH)D3的形式所存在，其在血中的含量高低可反映出機(jī)體內(nèi)維生素D含量[16]。本文經(jīng)檢測25-(OH)D3發(fā)現(xiàn)，與健康兒童和非病毒性腹瀉兒童相比，在病毒性腹瀉患兒中其表達(dá)明顯降低，這提示著病毒性腹瀉患兒存在維生素D缺乏現(xiàn)象，分析其原因可能患兒腹瀉發(fā)生后腸道消化功能受到影響，導(dǎo)致維生素D吸收率明顯降低，引發(fā)機(jī)體維生素D缺乏，不能滿足機(jī)體需求，影響腸道黏膜細(xì)胞功能，防御素含量降低，最終導(dǎo)致腹瀉的發(fā)生相關(guān)。進(jìn)一步分析與患兒病毒感染類型的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，RV感染患兒25-(OH)D3表達(dá)低于非RV感染患兒，分析其原因可能與RV病毒主要生長于小腸上皮細(xì)胞，具有較強(qiáng)的感染性，對患者腸道消化功能的影響更強(qiáng)烈最終導(dǎo)致25-(OH)D3降低相關(guān)。

目前臨床認(rèn)為腹瀉發(fā)生后多表現(xiàn)為心肌酶譜改變。CK-MB屬于CK的同工酶，其廣泛存在于心肌細(xì)胞中，在血清中含量極少，但當(dāng)心肌損傷發(fā)生后，其經(jīng)心肌細(xì)胞釋放至細(xì)胞中，導(dǎo)致其在血清中的含量明顯增加[17-18]。研究顯示[19-20]，病毒性腹瀉的發(fā)生可引起心肌損傷，且病毒可經(jīng)侵襲胃腸黏膜屏障經(jīng)淋巴結(jié)、血液擴(kuò)散，進(jìn)而加重心肌細(xì)胞損傷，而導(dǎo)致CK-MB升高。在本文中分析病毒性腹瀉患兒血中CK-MB表達(dá)情況，CK-MB在患兒血中表達(dá)明顯升高，且RV感染患兒表達(dá)異常更為顯著，分析其原因可能為RV病毒所感染的群體免疫力更低，其感染所引起的心肌損傷，而RV病毒感染的患兒機(jī)體水分缺失更為顯著，且體內(nèi)產(chǎn)生大量的酮體，致脫水酸中毒，對心肌的損傷更為劇烈相關(guān)，表現(xiàn)為CK-MB水平升高。

經(jīng)ROC曲線分析顯示，NF-κB、25-(OH)D3、CK-MB對病毒性腹瀉的診斷價(jià)值發(fā)現(xiàn)，與三者單項(xiàng)診斷相比，聯(lián)合診斷價(jià)值較高，此結(jié)果提示著，臨床可根據(jù)三者水平變化診斷此病。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)，與健康兒童、非病毒性腹瀉兒童相比，NF-κB、CK-MB在病毒性腹瀉中表達(dá)升高，25-(OH)D3表達(dá)降低，且與RV病毒感染、不同病情階段密切相關(guān)，臨床可通過其水平高低評估此病，以用于臨床治療方案的指導(dǎo)。

作者簡介：孟祥會(huì)(1978-)，女，滿族，副主任醫(yī)師，本科學(xué)歷，主要從事兒科相關(guān)臨床和科研工作。