虎紅平板凝集試驗與試管凝集試驗檢測人布魯菌病抗體的應用探討

魏 娜

（盤錦市盤山縣疾病預防控制中心，遼寧 盤錦 124107）

人布魯菌病是由于人類通過接觸感染動物的排泄物或者攝入感染或者患病動物制成的食品而患病。患病后患者主要變現為大汗、乏力、關節痛以及肝脾、淋巴結腫大等癥狀[1-2]。如果患者未及時進行控制治療，則會使細菌在細胞內不斷繁殖，形成局部病灶，病菌在細胞內破裂分布到各個臟器器官內，形成多發病灶，嚴重影響患者生活質量，威脅生命安全，給家庭、社會、醫療帶來負擔[3-4]。因此如果發現存在以上異常現象，應該及時就醫采取科學、合理檢驗方法，判斷臨床病情，做到早發現早治療。為此，選擇我疾控中心于2014年至2019年內收到的80例人布魯菌病患者血清樣品為研究對象，本文即分析對于人布魯菌病抗體采用試管凝集試檢測和虎紅平板凝集試驗檢測實際效果，主要內容見下文。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我疾控中心于2014年至2019年收到的80例人布魯菌病患者血清樣品為研究對象，將所有患者按照檢測方法的不同，分為對照組與觀察組。對照組：40例，男23例，女17例，年齡范圍21～67歲，平均年齡（42.23±8.77）歲。觀察組：40例，男25例，女15例，年齡范圍21～67歲，平均年齡（42.15±8.36）歲。納入標準：①均知情同意。②均為人布魯菌病患者。③均在21～67歲。排除標準：①精神異常，溝通障礙。②配合度較低。③其他合并類疾病。對兩組患者文化程度、年齡范圍、身高等基礎性資料分析后顯示，其差異無統計學意義（P＞0.05）。所有患者對本研究均完全知情同意并簽署知情同意書。我中心對本研究完全知情，并批準研究。

1.2 方法 對照組進行試管凝集試檢測，觀察組進行虎紅平板凝集試驗檢測。

1.2.1 虎紅平板凝集試驗檢測 觀察組患者進行虎紅平板凝集試驗檢測，在檢測中，取0.03 mL血清檢測樣品，放置于玻片上，將0.03 mL虎紅平板抗原加入其中，進行攪拌，確保攪拌均勻。等待5 min后觀察結果。如果玻片上混合物當中出現顆粒形狀物質或者發生凝集片，則說明顯示結果為陽性，如果混合液體呈現渾濁狀態，則說明檢測結果均為陰性。

1.2.2 試管凝集試驗檢測 對照組患者進行試管凝集試驗檢測，采用5支小試管，將2.30 mL生理鹽水加入第一支試管中，第二支試管不需要加入生理鹽水，第三支試管需要加入0.50 mL生理鹽水，第四支試管以及第五支試管需要同時加入0.50 mL生理鹽水。采用1 mL吸管，吸取0.20 mL血清樣品，并放置在第一支試管當中，保證液體混合均勻。采用1 mL吸管吸取第一支試管中血清，將0.50 mL分別加入到第二支試管以及第三支試管當中，保證第三支試管中攪拌均勻。吸出0.50 mL加入第四支試管中混均，再從第四管吸取0.50 mL加入第五管體液充分攪拌均勻，取出0.50 mL第五支試管中液體丟掉。分析試管中血清稀釋情況。第二支試管到第五支試管稀釋度分別為1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100。將0.50 mL抗原稀釋液加入到第二支試管以及第五支試管當中進行稀釋，分別為1∶25、1∶50、1∶100、1∶200。同時將抗原對照以及陽性、陰性進行對照組、比濁管判斷。將對照管、試驗管、比濁管進行搖蕩后，放置在37 ℃溫箱內22 h后取出放置2 h后判斷。如果發現試管凝集反應血清為1∶100稀釋度凝集現象“++”以上，則為人布魯菌病抗體陽性。

1.3 療效標準 ①對兩組患者樣品分別進行虎紅平板凝集試驗檢測和試管凝集試驗檢測后檢測結果進行對比分析。②對兩組患者樣品分別進行虎紅平板凝集試驗檢測和試管凝集試驗檢測后敏感度和準確度進行對比分析。③對兩組患者樣品分別進行虎紅平板凝集試驗檢測和試管凝集試驗檢測后對布魯菌進行對比分析。

1.4 統計學方法 研究所得到的數據均采用SPSS 23.0軟件進行處理。（）用于表示計量資料，用t檢驗；率（%）用于表示計數資料，用χ2檢驗。P＜0.05時則提示進行對比的對象之間存在顯著差異。

2 結果

2.1 兩組檢測結果分析 對照組進行試管凝集試驗檢測后陽性36（90.00%）例，陰性4（10.00%）例，觀察組進行虎紅平板凝集試驗檢測后陽性40（100.00%）例，陰性0例，兩組陽性（χ2=4.211，P=0.040）。研究結果顯示，觀察組進行虎紅平板凝集試驗檢測后檢測效果明顯優于對照組進行試管凝集試驗檢測后檢測效果，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組檢測結果分析[n（%）]

2.2 兩組敏感度和準確度對比分析 對照組進行試管凝集試驗檢測后敏感度80.00%，準確度為82.50%，觀察組進行虎紅平板凝集試驗檢測后敏感度為100.00%，準確度為97.50%。研究結果顯示，觀察組進行虎紅平板凝集試驗檢測后敏感度、準確度明顯高于對照組進行試管凝集試驗檢測后敏感度和準確度，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組敏感度和準確度對比分析[n（%）]

2.3 比較兩種方法檢測布魯菌結果 在布魯菌檢測結果方面，觀察組布魯菌檢出率為95.00%；對照組布魯菌檢出率為77.50%；觀察組數據相比較對照組較高（P＜0.05）。見表3。

表3 比較兩種方法檢測布魯菌結果[n（%）]

3 討 論

布魯菌病又被稱為人布病，此病誘發因素與地區、職業、人體免疫功能以及其他因素密切相關[5-6]。①地區：居于該病流行地區或者該病流行地區旅行者，更容易發生此病。②職業：某些職業此病患病率較高，比如：屠宰場工人、肉類加工工人、獸醫、實驗室工作人員等。③人體免疫功能，如果人體免疫功能正常，通過體液免疫以及細胞免疫能夠清除病菌，不會出現臨床癥狀。如果人體免疫功能不全或者感染病菌量較大、毒性較強、致病菌反復入血、則會發生慢性感染。④其他因素：進食生肉或者未經巴氏消毒奶制品等。此病潛伏期長短不一，一般為1～3周，也可長達數月。出現反復高熱伴大汗淋漓、肝、脾淋巴結腫大等癥狀，因此需要引起高度重視，及時采取有效檢測方法，判斷病情，做到早發現早治療，避免錯過最佳治療時機。

布魯菌病是臨床常見的傳染病，對此種疾病采取早期診斷以及治療能夠對此病予以較好的改善。臨床上對布魯菌病常采取的檢驗方法可見虎紅平板凝集試驗、酶聯免疫吸附試驗、熒光偏振免疫試驗以及試管凝集試驗等。雖然曾有研究認為試管凝集試驗對診斷布魯菌病更有效。但在相關研究中指出，試管凝集試驗需要較高的實施技巧，且試驗時間較長，在一定程度對其應用進行了阻礙。虎紅平板凝集試驗具有操作方便、檢測時間較短的特點。在相關研究中得知，采取虎紅平板凝集試驗患者的檢查結果數據相比較采取試管凝集試驗在檢測患者的結果數據更優，尤其是在布魯菌病抗體中有著較高的價值。另有研究結果表明，采取虎紅平板凝集試驗確診布魯菌的檢測準確率為96.43%，相比較其他兩種檢測方法較高。由此可見，此種方法的診斷效果較優。可有助于疾病的初期診斷以及治療。

由于基層實驗室的條件有限，對于布魯菌病原方面的檢測具有一定的難度，因此臨床中一般采用血清學檢測對布魯菌病進行診斷。布魯菌病的臨床診斷一般采用血清學檢測。在相關研究中得知，使用了兩種凝集試驗來檢測人類布魯菌病抗體。虎紅平板凝集試驗陽性率為5.90%，試管凝集試驗陽性率為3.30%。可見虎紅平板凝集試驗的數據相對較高；此外虎紅平板凝集試驗的主要檢測項目是IgG抗體，具有較高的靈敏度、特異性和準確度，表明其對人布魯菌病抗體具有較高的敏感性，盡管有一定的概率會產生抗原抗體反應假陽性結果，此方法具有操作簡單、成本低、速度快等特點，在大規模普查中有著重要的應用價值。

試管凝集試驗為半定量試驗方法，在微生物檢驗中常用已知細菌作為抗原液和一系列稀釋的受檢血清進行混合，保溫后觀察每管內抗原凝集程度，通過產生明顯凝集現象的最高稀釋度作為血清中抗體評價[7-8]。虎紅平板凝集試驗檢測是用來診斷布魯菌病，主要檢測方法為取被檢測血清0.03 mL和抗原0.03 mL相結合，5 min內觀察，如果出現“+”以上反應者均為陽性。布魯菌病虎紅平板凝集試驗抗原系用抗原性良好的布魯菌菌株，接種于適宜培養基培養，收獲菌體，經加熱滅活，離心后用虎紅染液染色，懸浮于乳酸緩沖液中制成[9-10]。反應強度標準如下：①“－”無凝集，為均勻粉紅色。②“++”出現明顯卷邊，凝集塊間液體稍清亮。③“+++”凝集反應較強。④“++++”凝集塊呈菌叢狀，凝集塊間液體清亮明顯。虎紅平板凝集試驗檢測一般無任何并發癥和危害，安全度較高[11]。本文即分析對于人布魯菌病抗體采用試管凝集試檢測和虎紅平板凝集試驗檢測實際效果，研究結果顯示，對照組進行試管凝集試驗檢測后敏感度80.00%，準確度為82.50%，觀察組進行虎紅平板凝集試驗檢測后敏感度為100.00%，準確度為97.50%。觀察組進行虎紅平板凝聚試驗檢測后敏感性以及準確性明顯高于對照組進行試管凝集試驗檢測后準確性以及敏感性（P＜0.05）；對照組進行試管凝集試驗檢測后陽性36（90.00%）例，陰性4例（10.00%），觀察組進行虎紅平板凝集試驗檢測后陽性40例（100.00%），陰性0例，觀察組進行虎紅平板凝集試驗檢測后檢測效果明顯優于對照組進行試管凝集試驗檢測后檢測效果（P＜0.05）。觀察組布魯菌檢出率為95.00%；對照組布魯菌檢出率為77.50%；觀察組數據相比較對照組較高（P＜0.05）。

綜上所述，在人布魯菌病抗體中采用虎紅平板凝集試驗檢測能夠提高敏感性和準確性，具有明顯檢測效果，實際工作中為保證精確度，往往采用虎紅平板凝集和試管凝集試驗相結合檢測。