一種測定蜂產品中氟胺氰菊酯殘留量的方法

楊熙，周漪波，郭鵬然，林澤鵬，張云龍

1. 廣東省科學院測試分析研究所（中國廣州分析測試中心），廣東省化學危害應急檢測技術重點實驗室，廣東省保健食品功效成分檢測與風險物質快速篩查工程技術研究中心（廣州 510220）；2. 廣東康信檢測科技有限公司（廣州 510530）

蜜蜂是與人類以及大自然關系密切的社會性昆蟲，它們不僅可以為人類提供營養豐富的蜂產品，還可以通過授粉模式維持生態平衡，對保護和維持生物多樣性起著重要作用[1]。我國是世界第一養蜂大國。蜂蜜中農藥殘留源于受殺蟲劑、除螨劑污染的蜜源植物，最主要的農藥是擬除蟲菊酯類氟胺氰菊酯（fluvalinate）、氟氯苯氰菊酯（flumethrin）和溴螨酯（bromopropylate）等[2]。氟胺氰菊酯因對蜜蜂低毒而對蜂螨有極強的殺傷力，被常用于螨害的防治中[3]。氟胺氰菊酯（fluvalinate），化學名為N-[2]-氯-4-（三氯四基）苯基]D-纈氨酸（±）-α氰基-3-酚氧苯基）-甲基酯，是我國傳統用于防治蜂螨的擬除蟲菊酯類殺螨劑[4]。氟胺氰菊酯最初注冊的產品英文名為“Fluvalinate”，該產品是4個立體異構體的混合物[5]。而對于氟胺氰菊酯污染后存在于蜂蜜及蜂產品制品中的具體含量無法估計，只能靠有效的方法對其進行測定。我國GB 2763—2019《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》[6]對氟胺氰菊酯殘留于蜂蜜及蜂產品制品中沒有規定限量指標。美國EPA（Environmental protection agency）環保總局認為氟胺氰菊酯具有發育和生殖的毒性，歐盟也將其列入可疑內分泌物干擾名單，世界各國均對蜂產品中的氟胺氰菊酯殘留量做出嚴格限定，歐盟對蜂蜜中氟胺氰菊酯的限量值定為0.01 mg/kg，美國和日本為0.05 mg/kg[7]，因此對于氟胺氰菊酯殘留量的檢測是有必要的。

目前，能夠檢測氟胺氰菊酯的方法有很多，比如GB 23200.95—2016[8]、農業部781號公告-9—2006[9]、NY/T 761—2008[10]等。前兩種標準方法處理步驟繁瑣、消耗溶劑量大且不利于環保、耗時較長，不適用于大批量檢測。而NY/T 761—2008不適用于此次的檢測對象。還有一些學者所用到的氣相色譜方法[11-13]等幾種方法檢測的蜂產品不夠全面，且檢出限比此次建立的方法稍高，所以試驗建立了一種選擇性高、定性良好、檢出限低、準確定量、操作簡單的分析方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 7890B氣相色譜儀配電子捕獲檢測器（ECD）；XW-80A微型渦旋混合儀（上海瀘西分析儀器有限公司）；TDZ5-WS離心機（湖南塞特湘儀科技有限公司）；N-EVAP氮吹儀（美國Organomation）；50 mL離心試管（美國Labcon Perform RTM）；100 mL燒杯、10 mL比色管（天波玻璃儀器有限公司）；Sartor電子天平（Sartorius）。

100 μg/mL氟胺氰菊酯（農業部環境保護科研監測所）；1 000 mg/6 mL弗羅里硅土凈化柱（山東青云耗材有限公司）；石油醚（沸點60～90 ℃）、丙酮、無水硫酸鈉（廣州化學試劑廠）。

1.2 試驗方法

1.2.1 蜂蜜及蜂王漿樣品處理方法

稱取10 g（精確至0.000 1 g）樣品置于50 mL離心試管中，加入10 mL蒸餾水混勻，加入25 mL石油醚-丙酮（4∶1，V/V）在微型漩渦混合儀振蕩2 min，將有機相溶劑轉移到100 mL燒杯，反復3次提取，合并所有提取液，經無水硫酸鈉干燥，在氮吹儀上（水溫45 ℃）濃縮至少2 mL左右，過弗羅里硅土凈化柱，用10 mL溶劑分數次清洗，最后氮吹之后定容5 mL，供氣相色譜分析。

1.2.2 蜂蜜樣品處理方法

稱取5 g（精確至0.000 1 g）樣品置于50 mL離心試管中，加5～10 g無水硫酸鈉攪勻，加入25 mL石油醚-丙酮（4∶1，V/V）在微型漩渦混合儀振蕩2 min，將有機相溶劑轉移到100 mL燒杯，反復3次提取，合并所有提取液，經無水硫酸鈉干燥，在氮吹儀上（水溫45 ℃）濃縮至少2 mL左右，過弗羅里硅土凈化柱，用10 mL溶劑分數次清洗，最后氮吹之后定容5 mL，供氣相色譜分析。

1.2.3 蜂粉樣品處理方法

稱取5 g（精確至0.000 1 g）樣品置于50 mL離心試管中，加入25 mL石油醚∶丙酮（4∶1，V/V）在微型漩渦混合儀振蕩2 min，將有機相溶劑轉移到100 mL燒杯，反復提取3次，合并所有提取液，經無水硫酸鈉干燥，在氮吹儀上（水溫45 ℃）濃縮至少2 mL左右，過弗羅里硅土凈化柱，用10 mL溶劑分數次清洗，最后氮吹之后定容5 mL，供氣相色譜分析。

1.2.4 蜂膠樣品處理方法

稱取5 g（精確至0.000 1 g）樣品置于50 mL離心試管中，于50 ℃水浴加熱至溶液黏稠液狀態時，加入5～10 g無水硫酸鈉攪勻，加入25 mL石油醚∶丙酮（4∶1，V/V）在微型漩渦混合儀振蕩2 min，將有機相溶劑轉移到100 mL燒杯，反復3次提取，合并所有提取液，經無水硫酸鈉干燥，在氮吹儀上（水溫45 ℃）濃縮至少2 mL左右，過弗羅里硅土凈化柱，用10 mL溶劑分數次清洗，最后氮吹之后定容5 mL，供氣相色譜分析。

1.3 色譜條件

色譜柱HP-5 MS（30 m×320 μm×0.25 μm）；柱溫150 ℃，以12 ℃/min升至280 ℃保持8 min，進樣口240 ℃；采用不分流進樣，進樣量1 μL；FPD檢測器300 ℃；載氣為氮氣，流量2 mL·min-1。

2 結論與探討

2.1 溶劑的選擇

可以用來作為提取溶劑的試劑有很多，如石油醚、正己烷、二氯甲烷、丙酮等。對幾種溶劑的篩選，經過多次試驗得出的結論：正己烷價格較高，長期使用成本高，為節約成本考慮不適用；二氯甲烷則沸點偏低，在濃縮過程中會導致揮發過快而對待測組分產生影響，會出現回收率不高的情況；而最終選用石油醚及丙酮是因為樣品本身含有一定量的水分，和丙酮溶劑不能完全分開，加入一定比例的石油醚之后能夠使它分層，并且石油醚價格相對較低，沸點也不會太高，最終選用石油醚及丙酮作為提取溶劑。

2.2 色譜柱選用及分離效果

在1.3小節的色譜條件下，采用毛細管柱HP-5 MS及DB 1701在電子捕獲檢測器分析后，兩種色譜柱的分離效果均可以清晰地看到氟胺氰菊酯的峰型良好、無出現拖尾峰、無干擾，達到良好的分離效果。因分離效果不相上下，2種色譜柱均適用。但由于之前參考農業部781號公告-9-2006標準使用的色譜柱就是HP-5 MS，最終選擇HP-5 MS。目標物峰的分析時間在27 min以內就全部出峰，由此可見色譜條件及色譜柱選用均是可行的。氟胺氰菊酯及陽性樣品、空白樣品色譜峰見圖1。

2.3 測定結果

按照該方法對29種蜂蜜及多種蜂產品制品進行測定分析，得出的結果見表1。該方法對多種蜂產品進行測定結果與最新國標方法GB 23200.95—2016檢測結果相比較，并沒有出現差異，結果偏差在6%以內，樣品呈陽性圖譜詳見圖1。由該方法檢測結果與國標方法對比之后更加證實了該方法的可行性和實用性，相比于國標方法，該方法更加節約時間、節約成本，檢出限更低，更為高效。

圖1

表1 該方法對多種蜂產品測試結果

2.4 標準曲線、線性范圍、相關系數及檢出限

將100 μg/mL氟胺氰菊酯標準溶液分別稀釋成質量濃度0.025，0.050，0.10，0.20，0.50和1.00 μg·mL-1線性標準溶液，上樣分析。以峰面積（Y）對應質量濃度（X）進行回歸分析，計算出相應的回歸方程。以3倍信噪比基線噪聲為10 Pa·s，樣品取樣量10 g或5 g，定容體積5 mL，3倍信噪比計算該方法的檢出限，結果見表2。可以看出，該方法回歸方程及相關系數各項參數結果良好，檢出限也要低于目前現行標準[8-9]的檢出限，滿足29種蜂蜜及蜂產品制品的測定研究，以及為目前國內檢測氟胺氰菊酯殘留量提供參考。

表2 氟胺氰菊酯的線性關系、相關系數及檢出限

2.5 回收率及精密度

取10 g蜂蜜陰性樣品進行加標試驗，以線性濃度中間濃度3個點0.050，0.20和0.80 μg/mL為加標濃度，加標量為1 mL（即絕對含量為0.050，0.20和0.80 μg），按照1.2小節的方法進行處理分析，每個加標濃度做平行樣6次（即n=6），根據標準對照品的保留時間定性，外標法定量，計算出3個加標濃度共18次平行加標的平均回收率和相對標準偏差SRSD），分析結果詳見表3。結果顯示，該方法精密度和準確度、重復性良好，能夠滿足對氟胺氰菊酯殘留的檢測分析。

表3 各加標濃度平均值、平均回收率及相對標準偏差（n=6）

3 結論

該方法與現行標準[8-9]相比，通過優化前處理，可以節省時間，使分析速度更快；通過改變色譜條件，使分離度更好，也使峰型變得尖銳。該試驗建立了一種測定蜂產品中氟胺氰菊酯殘留量的氣相色譜法。試驗表明：這種方法能夠準確定性定量，且回收率高、精密度和重復性良好、操作簡便、節約成本，也體現了該方法的適用性，為今后氟胺氰菊酯的研究提供了一種參考方案。