替比夫定治療慢性乙肝患者IL-26水平及與其他炎癥因子的相關性分析

張麗偉，秦浩歌，朱紅欣

（沈陽市第六人民醫院肝病消化內一科，遼寧 沈陽 110006）

慢性乙型肝炎主要是由慢性乙型肝炎病毒感染所致，隨著病情發展可出現肝硬化，甚至肝癌，具有較高病死率。目前臨床多認為炎癥活動、免疫細胞功能紊亂是誘發慢性乙型肝炎的主要因素，尤其是對于T 細胞，能夠通過釋放趨化因子、細胞因子，發揮抗病毒作用[1]。因此，密切觀察慢性乙型肝炎患者炎癥因子、免疫細胞因子動態變化對評估病情及預后具有積極作用。IL-26 由活化Th17 細胞產生，可通過與細胞IL-10R2、IL-20R1 受體復合物結合，從而促使炎癥因子產生[2]。替比夫定屬于一種核苷類藥物，是慢性乙型肝炎患者治療的常用藥，作用機制為阻礙HBV 復制[3]。為進一步探索IL-26在慢性乙型肝炎患者中的表達及其細胞來源，本研究選取 2018 年 6 月至 2020 年 1 月本院收治的 60 例慢性乙型肝炎患者作為研究對象，旨在分析應用替比夫定治療的慢性乙型肝炎患者IL-26水平及與其他炎癥因子的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取 2018 年 6 月至 2020 年 1 月本院收治的慢性乙型肝炎患者60例為研究組，其中男36 例，女 24 例；年齡 21～53 歲，平均（31.08±1.19）歲。納入標準：均已確診為慢性乙型肝炎[4]；且未實施免疫調節治療及其他抗病毒治療；無藥物過敏史。排除標準：其他病毒感染；自身免疫性感染以及酒精性肝炎；合并心血管疾病者；存在惡性腫瘤疾病者。另選取同期入院接受健康體檢者34 名為對照組，其中男20例，女14例；年齡21～52歲，平均（30.76±1.05）歲。兩組臨床資料比較差異無統計學意義，具有可比性。所有研究對象均對本研究知情同意并簽署知情同意書，本研究經本院倫理委員會審核批準。

1.2 方法

1.2.1 IL-26和IL-17 采用酶聯免疫吸附測定兩組血漿IL-26濃度，測定前按照1∶1比例進行血漿樣本稀釋，分析檢測IL-26濃度，嚴格按照所配套的試劑盒說明書操作。測定血漿IL-17濃度，采用IL-17酶聯免疫吸附試劑盒。

1.2.2 天冬氨酸轉氨酶（AST）、丙氨酸轉氨酶（ALT）、血清HBV 病毒載量（HBV-DNA） 采用生化自動分析儀檢測AST、ALT，熒光定量PCR 測定HBV-DNA。

1.2.3 CD4+T 細胞 采用流式細胞術測定CD4+T細胞。

1.3 觀察指標 比較兩組AST、ALT、HBV-DNA、IL-26、IL-17水平，分析IL-26與IL-17的相關性。

1.4 統計學方法 采用SPSS 22.0統計學軟件進行數據分析，計量資料以“”表示，采用t檢驗，計數資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組AST、ALT、HBV-DNA水平比較 研究組AST、ALT、HBV-DNA 水平均高于對照組（P＜0.05），見表1。

表1 兩組AST、ALT、HBV-DNA水平比較（）Table 1 Comparison of AST,ALT and HBV-DNA levels between the two groups()

表1 兩組AST、ALT、HBV-DNA水平比較（）Table 1 Comparison of AST,ALT and HBV-DNA levels between the two groups()

注：AST，天冬氨酸轉氨酶；ALT，丙氨酸轉氨酶；HBV-DNA，血清HBV病毒載量

組別研究組對照組t值P值HBV-DNA（拷貝/ml）3.70±0.58 0.08±0.03 36.281 0.000例數60 34 AST（U/L）121.99±10.63 15.23±2.04 57.832 0.000 ALT（U/L）136.52±5.80 16.11±2.28 115.865 0.000

2.2 研究組治療期間血漿IL-26水平、HBV-DNA拷貝數比較 研究組替比夫定治療12、24 周開始，血漿IL-26 水平呈逐漸下降趨勢，替比夫定治療期間HBV-DNA呈下降趨勢，見表2。

表2 研究組治療期間血漿IL-26水平、HBV-DNA拷貝數比較（）Table 2 Comparison of plasma IL-26 level and HBV-DNA copy number in the study group during treatment()

表2 研究組治療期間血漿IL-26水平、HBV-DNA拷貝數比較（）Table 2 Comparison of plasma IL-26 level and HBV-DNA copy number in the study group during treatment()

注：IL-26，白細胞介素-26；HBV-DNA，血清HBV病毒載量

治療時間（周）0 12 24 36 52 HBV-DNA（拷貝/ml）9.25±1.02 6.19±0.08 4.33±0.05 3.51±0.04 3.01±0.04血漿IL-26水平（ng/ml）8.11±1.69 6.37±1.35 4.08±0.70 3.10±0.64 2.03±0.52

2.3 慢性乙型肝炎患者血漿中IL-26 與IL-17 相關性 IL-17 水平與慢性乙型肝炎的炎癥反應存在相關性，治療0 周時，慢性乙型肝炎患者IL-17 水平高于對照組，隨著治療周期延長（12、24、36、52周），其水平呈逐漸下降趨勢（P＜0.05），IL-26水平與IL-17水平無明顯相關性，見圖1。

圖1 慢性乙型肝炎患者血漿中IL-26與IL-17相關性Figure 1 Correlation between IL-26 and IL-17 in plasma of patients with chronic hepatitis B

2.4 慢性乙型肝炎患者IL-26 CD4細胞表達 慢性乙型肝炎患者的IL-26+CD4+T 細胞頻率高于健康體檢者（P＜0.05），慢性乙型肝炎患者的IL-26+CD4+T細胞比高于IL-26 IL-26+CD4-（P＜0.05），見圖2。

圖2 慢性乙型肝炎患者IL-26、CD4細胞表達Figure 1 Expression of IL-26 and CD4 cells in patients with chronic hepatitis B

3 討論

慢性乙型肝炎主要病理表現為肝臟組織炎癥改變、肝細胞壞死、肝纖維化等，疾病發展進程為“慢性肝炎-肝硬化-肝癌”，嚴重危及患者生命安全。HBV 可活化免疫細胞，且釋放出大量促炎因子，從而誘發肝炎。經研究證實，IL-26 參與多種炎癥疾病、免疫性疾病的發生發展過程，如類風濕性關節炎、慢性丙型肝炎、克羅恩病等[5-6]。本研究結果顯示，隨著療程推進，兩者水平均呈逐漸下降趨勢。另外，還發現慢性乙型肝炎患者的AST、ALT 水平高于健康對象，AST、ALT 異常患者的IL-26 水平也高于健康對象。目前尚未明確IL-26在慢性乙型肝炎中的促炎機制，但通過慢性丙型肝炎疾病發現，IL-26能提高NK細胞膜TNF凋亡誘導表達水平，從而對NK 細胞產生刺激作用，增強其對丙型肝炎病毒清除能力。此外，有研究[7]指出，肝臟病理變化并不是HBV 復制所造成的直接結果，而免疫應答可能才是對慢性乙型肝炎發展與轉歸的直接影響，即HBV 感染是由細胞因子與免疫細胞共同作用的結果。

IL-26 能結合Toll 樣受體9，從而誘導漿細胞樣樹突狀細胞分泌出干擾素，通過阻礙病毒復制以降低肝細胞受損程度[8]。隨著慢性乙型肝炎疾病研究的不斷進展，發現慢性乙型肝炎發展中的輔助性T細胞亞群具有重要作用。T細胞屬于獲得性免疫細胞，CD4+T細胞具有促進調節細胞、細胞因子分泌及免疫應答的作用，其中包括Th17。Th17 細胞在慢性乙型肝炎疾病中具有重要作用，Th17細胞可促使IL-17 產生，激活中性粒細胞后，能加速免疫性疾病發生發展進程，IL-17 能夠釋放B 淋巴細胞活化劑，繼而提高免疫球蛋白水平，在治療期間對肝細胞具有一定保護作用[9]。Th17 細胞可分泌IL-26 細胞因子，具有促炎作用。可見，Th17 細胞屬于炎癥介質的一種，且能加重肝功能損傷及肝臟炎癥。CD4+T細胞含量下降不但能激活殺傷細胞，還可造成Th1/Th2細胞比例失衡，進而導致細胞因子失衡，給病毒貯存提供有利條件。同時，CD4+T細胞未Ts細胞靶細胞，具有抑制免疫應答作用，通常CD4+T 細胞比例正常，能有效維持免疫功能[10]。本研究結果提示，慢性乙型肝炎患者的血漿IL-17水平高于健康體檢者，且隨著療程推進，其水平呈下降趨勢（P＜0.05），IL-26水平與IL-17水平兩者無明顯相關性。通過測定慢性乙型肝炎患者與健康體檢者的CD4+T、CD4-T 細胞中 IL-26 的 mRNA 水平 ，提示 CD4+T 細胞中可釋放出IL-26，且發現IL-26 的mRNA 水平和RORγt 的 mRNA 水平相同，得出 RORγt+細胞是 IL-26+細胞的主要細胞，提示Th17細胞為IL-26的主源細胞，可促進IL-26釋放，從而進一步參與慢性乙型肝炎的炎癥反應[11]。

本研究結果顯示，研究組AST、ALT、HBV-DNA水平均高于對照組（P＜0.05）；研究組IL-26 水平高于對照組（P＜0.05），患者替比夫定治療期間的IL-26 水平隨治療時間推移而呈下降趨勢，血漿IL-26濃度與IL-17水平呈下降趨勢。研究組IL-26+CD4+T 細胞比高于IL-26 IL-26+CD4（-P＜0.05）；IL-26 的CD4+T 細胞表達與 RORγt 的 mRNA 水平呈正相關性（P＜0.05）。提示，HBV 感染會導致人體肝功能與肝細胞受損，IL-26水平與肝功能具有相關性，可介導免疫損傷，從而導致肝臟炎癥加重；HBV 感染所致肝功能損傷與輔助性T 細胞亞群、細胞因子而出現的免疫應答密切相關；CD4+T細胞可直接影響慢性乙型肝炎的發生[12]。

綜上所述，慢性乙型肝炎患者外周血中，Th17細胞為IL-26的主源細胞，IL-26可作為慢性乙型肝炎治療與預后的生物標志物。