氣相色譜法測定銀柴顆粒中薄荷腦和薄荷酮含量*

劉 斌

（四川省德陽市食品藥品安全檢驗檢測中心，四川 德陽 618000）

銀柴顆粒由忍冬藤、柴胡、枇杷葉、薄荷、蘆根5 味中藥材組方，具有清熱、解表、止咳功效，用于風(fēng)熱感冒、發(fā)熱咳嗽等癥。現(xiàn)行藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［1］僅對薄荷腦進行薄層色譜定性鑒別，但薄荷含有以薄荷腦和薄荷酮為主的揮發(fā)性成分［2］。本研究中建立了同時測定銀柴顆粒中薄荷腦和薄荷酮含量的氣相色譜（GC）法，為銀柴顆粒薄荷質(zhì)量的有效控制提供參考。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 7890B型氣相色譜儀（美國安捷倫公司），配有氫火焰離子化檢測器、Agilent 7693 型自動進樣器；SPH - 300A 型氫氣發(fā)生器，SPB - 3 型全自動空氣源（北京中惠普分析技術(shù)研究所）；XS205 型電子天平（梅特勒- 托利多儀器＜上海＞有限公司，精度為十萬分之一）；KQ-700D 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率為700 W，頻率為40 kHz）。

1.2 試藥

薄荷腦對照品（批號為110728 - 201707，純度為99.8%），薄荷酮對照品（批號為111705-201105，純度為99.8%），均購自中國食品藥品檢定研究院；其余試劑均為分析純；銀柴顆粒（廠家GD，批號為190701；廠家YN，批號為190701；廠家HB，批號為200102；廠家FD，批號為200901；廠家KH，批號為191203；廠家FC，批號為200807）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：HP - INNOWax 石英毛細管柱（30 m ×0.32 mm，0.25 μm）；程序升溫：初始溫度90 ℃、維持1 min，以3 ℃/min 的速率升至130 ℃、維持2 min，再以30 ℃/ min 的速率升至220 ℃、維持2 min；載氣：高純氮；載氣流速：1.5 mL/min；分流比：10∶1；進樣口溫度：220 ℃；檢測器溫度：250 ℃；進樣量：1μL。

2.2 溶液配制

分別稱取薄荷腦對照品199.07 mg，薄荷酮對照品139.34 mg，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加乙酸乙酯溶解并定容，搖勻，即得每1 mL 含薄荷腦1.986 7 mg、薄荷酮1.390 6 mg 的混合對照品溶液。取樣品適量，研細，取6 g，精密稱定，置150 mL 具塞錐形瓶中，精密加入乙酸乙酯20 mL，密封，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率為420 W，頻率為10 kHz）10 min，放冷，再稱定重量，補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取缺薄荷的其余藥材，按處方比例和制備工藝制備缺薄荷的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗：精密吸取2.2 項下3 種溶液各1 μL，按2.1項下色譜條件分別進樣檢測，色譜圖見圖1。結(jié)果薄荷腦和薄荷酮的理論板數(shù)分別為142 311和83 216，供試品溶液色譜中在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置有相同保留時間的色譜峰，且陰性對照無干擾，表明方法專屬性良好。

1.薄荷酮 2.薄荷腦A.對照品溶液 B.供試品溶液 C.陰性對照品溶液圖1 氣相色譜圖1.Menthol 2.MenthoneA.Reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.1 GC chromatograms

線性關(guān)系考察、檢測限和定量限確定：精密量取2.2項下混合對照品溶液0.5，1.0，2.5，5.0，7.5 mL，分別置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，按2.1 項下色譜條件進樣測定。以待測成分質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程分別為Y腦= 1.871 1X腦+ 1.099 7（r=0.999 8，n=5），Y酮=1.824 3X酮+2.157 2（r=0.999 8，n=5），表明薄荷腦和薄荷酮的質(zhì)量濃度分別在99.335 9～1 490.039 0μg/mL，69.530 7～1 042.959 9μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。根據(jù)各成分的信噪比（S/N）。計算檢測限（S/N= 3）和定量限（S/N= 10）。結(jié)果薄荷腦的檢測限和定量限分別為0.476 8 mg / L 和1.589 4 mg/L；薄荷酮的檢測限和定量限定性檢測限分別為0.139 1 mg/L和0.556 2 mg/L。

精密度試驗：精密吸取2.2項下混合對照品溶液1μL，按2.1 項下色譜條件連續(xù)進樣測定6 次，記錄峰面積。結(jié)果薄荷腦和薄荷酮峰面積的RSD分別為0.87%和0.86%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗：取同一批（批號為200807）樣品6 份，精密稱定，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣測定。結(jié)果薄荷腦和薄荷酮峰面積的RSD分別為1.81%和3.84%（n= 6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一批（批號為200807）樣品6.0 g，精密稱定，按2.2 下方法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜條件分別于0，4，8，12，16，20，24 h 時進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果薄荷腦和薄荷酮峰面積的RSD分別為0.46%和2.13%（n= 7），表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗：取已知薄荷腦和薄荷酮含量的樣品（批號為200807，薄荷腦含量為0.792 4 mg/ g，薄荷酮含量為0.124 3 mg/g）6 份，精密稱定，分別精密加入薄荷腦和薄荷酮對照品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，計算回收率。結(jié)果見表1。薄荷酮的回收率偏低，主要原因為樣品中薄荷所含薄荷酮的含量低于0.01%，屬痕量級。

表1 加樣回收試驗結(jié)果（n=6）Tab.1 Results of the recovery test（n=6）

2.4 樣品含量測定

取6 批樣品，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，計算樣品中薄荷腦和薄荷酮的含量。結(jié)果見表2。

3 討論

曾比較提取溶劑環(huán)己烷、石油醚（60～90 ℃）、乙酸乙酯的提取效果，結(jié)果乙酸乙酯優(yōu)于其他溶劑。曾考察了超聲時間對提取效果的影響，結(jié)果超聲處理20 min和10 min后兩者含量無顯著差異，且均優(yōu)于超聲30 min，故選擇超聲提取10 min。

由表2 可知，6 個廠家的樣品中薄荷腦和薄荷酮的含量差異較大，且FD 廠家的薄荷腦與薄荷酮含量的比值遠大于其他廠家，提示存在非法添加薄荷腦的可能性。查閱文獻［3 - 7］，發(fā)現(xiàn)不同地理位置、環(huán)境因素對薄荷藥材薄荷油化學(xué)成分均有影響，其含量與薄荷種類、品種產(chǎn)地、采收時間、不同部位均密切相關(guān)。為提高銀柴顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，建議加強對薄荷飲片的質(zhì)量控制；針對可能存在薄荷腦代替市售薄荷藥材入藥的情況，建議提升銀柴顆粒制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

表2 樣品含量測定結(jié)果（mg/g）Tab.2 Results of content determination of menthol and menthone in the samples（mg/g）

綜上所述，本研究中建立的方法操作快捷，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于同時測定銀柴顆粒中薄荷腦和薄荷酮含量。