乳腺癌超聲造影參數(shù)與Ki-67、HER-2及雌孕激素水平的相關(guān)性

馬維東，張丹丹，蘇 潔，王書偉，朱 麗，黃 梅，張 超

乳腺癌是乳腺上皮細(xì)胞在多種致癌因子作用下出現(xiàn)增殖失控而形成的惡性病變，在女性惡性腫瘤中發(fā)病率居首位[1-2]。大多數(shù)乳腺癌患者早期無明顯癥狀，部分患者會出現(xiàn)乳房腫塊、乳頭溢液等癥狀，隨病情進(jìn)展可出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。近年，國內(nèi)該病的發(fā)病率也呈現(xiàn)出增高的趨勢，盡管針對該病的治療已較成熟，患者病死率得到控制，但在國內(nèi)偏遠(yuǎn)地區(qū)及經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)病死率的下降并不明顯，因此關(guān)于該病的治療及預(yù)后改善仍是社會各界關(guān)注的熱點[3-4]。隨著臨床研究的深入，較多學(xué)者發(fā)現(xiàn)增殖細(xì)胞核抗原(Ki-67)、人表皮生長因子受體-2(HER-2)及雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)在乳腺癌診斷、治療方案制訂、預(yù)后評估中有重要作用[5-7]。然而上述指標(biāo)在檢查過程中較復(fù)雜，且均需行有創(chuàng)檢查獲得，在診療工作中的應(yīng)用受到較大限制。本研究在乳腺癌手術(shù)治療前行超聲造影檢查，分析超聲造影參數(shù)與Ki-67、HER-2、ER、PR間的關(guān)系，為該病的診療工作提供參考。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年9月—2021年9月于我院行根治性手術(shù)治療的乳腺癌100例，均為女性，年齡45～65(55.79±6.81)歲；側(cè)別：左側(cè)43例，右側(cè)57例；體質(zhì)量指數(shù)21～25(23.18±1.46)kg/m2；TNM分期：Ⅱ期45例，Ⅲ期55例；病程13～20(16.42±2.67)個月；腫瘤直徑2～4(3.15±0.54)cm；病理類型：浸潤性導(dǎo)管癌74例，浸潤性小葉癌15例，導(dǎo)管原位癌5例，黏液癌6例。本研究獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)(倫理批號：2019-15號)。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：參照《中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范(2015版)》[8]診斷為乳腺癌，經(jīng)術(shù)后病理學(xué)檢查證實；18～65歲；TNM分期Ⅱ～Ⅲ期；患者或家屬知曉本研究目的及方法后自愿參與，簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：預(yù)計存活時間<3個月；存在超聲檢查禁忌證；既往有胸腹部外科手術(shù)治療史；超聲造影檢查前已接受化療、放療等治療；超聲造影檢查與外科手術(shù)治療間隔時間>1個月；存在嚴(yán)重心、肺、腎功能障礙。

1.3方法

1.3.1超聲造影檢查:超聲造影檢查于術(shù)前進(jìn)行。檢查儀器為德國西門子公司生產(chǎn)的Siemens s3000超聲診斷儀，探頭頻率9～15 MHz，造影劑為意大利Bracco公司生產(chǎn)的Sono Vue。檢查開始時患者取仰臥位，囑上舉雙臂，暴露乳腺，常規(guī)多切面觀察病灶，在超聲圖像可清晰顯示病灶時切換至造影模式，經(jīng)肘靜脈團(tuán)注2.4 ml的Sono Vue，使用前Sono Vue加入5 ml生理鹽水制成混懸液，造影劑注射后迅速注入5 ml生理鹽水，實時觀察并儲存病灶3～5 min的動態(tài)灌注過程、增強(qiáng)模式，檢查結(jié)束后借助QLAB軟件行圖像分析。

1.3.2圖像分析:超聲造影檢查結(jié)束后開啟QLAB軟件，選取病灶增強(qiáng)范圍邊緣的上、下、左、右4處感興趣區(qū)，感興趣區(qū)的選擇當(dāng)避開病灶滋養(yǎng)血管及血管壞死區(qū)，此時軟件自動生成各區(qū)域時間-強(qiáng)度曲線，行曲線擬合后獲得乳腺癌病灶區(qū)域的血流灌注參數(shù)，包括達(dá)峰時間、增強(qiáng)幅度、上升支斜率、曲線下面積、梯度。圖像分析由2名經(jīng)驗豐富的超聲醫(yī)師以盲法閱片。

1.3.3免疫組織化學(xué)檢測Ki-67、HER-2、ER、PR：術(shù)后取乳腺癌組織使用即用型非生物素免疫組織化學(xué)EliVisionTMPlus/HRP檢測試劑盒檢測Ki-67、HER-2、ER、PR水平。其中Ki-67以細(xì)胞核內(nèi)存在棕黃色染色且占比≥14%判定為陽性，<14%判定為陰性；HER-2以細(xì)胞膜內(nèi)出現(xiàn)棕色顆粒著色，陽性細(xì)胞占比10%～20%為(+)、20%～30%為(++)、≥30%為(+++)，0或(+)判定為陰性，(+++)判定為陽性，(++)經(jīng)HER-2基因擴(kuò)增后存在基因擴(kuò)增判定為陽性，無基因擴(kuò)增判定為陰性；ER、PR以腫瘤細(xì)胞核染色≥10%判定為陽性，<10%判定為陰性。

1.4觀察指標(biāo) 對比Ki-67、HER-2、ER、PR陽性及陰性患者的超聲造影參數(shù)差異，同時借助Spearman系數(shù)分析免疫組織化學(xué)指標(biāo)與超聲造影參數(shù)的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1Ki-67、HER-2、ER、PR陽性檢出情況 100例乳腺癌經(jīng)免疫組織化學(xué)檢查顯示，Ki-67陽性84例(84.00%)，HER-2陽性77例(77.00%)，ER陽性67例(67.00%)，PR陽性65例(65.00%)。

2.2Ki-67陽性及陰性患者超聲造影參數(shù)對比 Ki-67陽性患者增強(qiáng)幅度、上升支斜率、梯度高于Ki-67陰性患者，曲線下面積大于Ki-67陰性患者(P<0.05)；Ki-67陽性及陰性患者達(dá)峰時間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 Ki-67陽性及陰性乳腺癌患者超聲造影參數(shù)對比

2.3HER-2陽性及陰性患者超聲造影參數(shù)對比 HER-2陽性患者達(dá)峰時間短于HER-2陰性患者，而上升支斜率高于HER-2陰性患者(P<0.05)；HER-2陽性及陰性患者增強(qiáng)幅度、曲線下面積、梯度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 HER-2陽性及陰性乳腺癌患者超聲造影參數(shù)對比

2.4ER陽性及陰性患者超聲造影參數(shù)對比 ER陽性患者達(dá)峰時間短于ER陰性患者，上升支斜率高于ER陰性患者(P<0.05)；ER陽性及陰性患者增強(qiáng)幅度、曲線下面積、梯度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 ER陽性及陰性乳腺癌患者超聲造影參數(shù)對比

2.5PR陽性及陰性患者超聲造影參數(shù)對比 PR陽性達(dá)峰時間短于PR陰性患者，上升支斜率高于PR陰性患者(P<0.05)；PR陽性及陰性患者增強(qiáng)幅度、曲線下面積、梯度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表4 PR陽性及陰性乳腺癌患者超聲造影參數(shù)對比

2.6乳腺癌患者免疫組織化學(xué)指標(biāo)與超聲造影參數(shù)相關(guān)性分析 達(dá)峰時間與HER-2、ER、PR呈負(fù)相關(guān)，上升支斜率與Ki-67、HER-2、ER、PR呈正相關(guān)，增強(qiáng)幅度、曲線下面積及梯度與Ki-67呈正相關(guān)(P<0.01)。見表5。

表5 乳腺癌患者免疫組織化學(xué)指標(biāo)與超聲造影參數(shù)相關(guān)性分析

3 討論

腫瘤新生血管與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，而腫瘤邊緣則是癌細(xì)胞生長較旺盛的區(qū)域，該區(qū)域血管分布密集，且微血管間相互吻合成袢[9]。超聲造影是現(xiàn)階段臨床廣泛應(yīng)用的一種影像學(xué)檢查方式，在惡性腫瘤診斷中不僅能提供形態(tài)學(xué)證據(jù)，還能反映正常組織與病變組織的血流灌注信息，同時定量分析指標(biāo)還能對惡性腫瘤的診斷與預(yù)后評估提供參考，目前超聲造影的應(yīng)用價值已受到眾多臨床醫(yī)師的認(rèn)可[10-11]。乳腺疾病的發(fā)生、發(fā)展也受到Ki-67、HER-2、ER及PR的影響，在該病治療中對其變化情況進(jìn)行觀察可為疾病治療及預(yù)后評估提供指導(dǎo)。本研究對乳腺癌患者分別行超聲造影及免疫組織化學(xué)檢查，并對超聲造影參數(shù)與Ki-67、HER-2、ER、PR的關(guān)系進(jìn)行探討，旨在尋找一種早期無創(chuàng)評估患者病情、預(yù)后的方式，為乳腺癌診療工作提供依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示，100例乳腺癌Ki-67、HER-2、ER、PR陽性檢出率均較高。與楊虹等[12]、丁如和朱昭環(huán)[13]研究結(jié)果相似。由于乳腺為性激素依賴器官，ER、PR常用于乳腺癌的評估中，若ER、PR陽性檢出率過高則提示腫瘤分化程度高，惡性程度低[14-16]。Ki-67、HER-2也是乳腺癌診療中常用的生物標(biāo)志物，前者可反映癌細(xì)胞的增殖活性，過表達(dá)時往往提示癌細(xì)胞的快速增殖與較強(qiáng)惡性化程度和侵襲能力，此時腫瘤與周圍組織存在明顯粘連，而后者則是調(diào)控細(xì)胞分裂、分化的重要因子，高表達(dá)時腫瘤惡性程度、復(fù)發(fā)率較高，提示患者預(yù)后較差[17-20]。

本研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67陽性患者增強(qiáng)幅度、上升支斜率、梯度明顯增高，曲線下面積明顯增大，HER-2、ER、PR陽性患者達(dá)峰時間明顯縮短，而上升支斜率明顯增加，提示Ki-67、HER-2、ER、PR陽性及陰性患者的超聲造影參數(shù)存在不同程度的差異。Ki-67是一種腫瘤增殖相關(guān)蛋白，其陽性檢出率高提示癌細(xì)胞處于增殖期，此時會分泌較多的血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)，二者協(xié)同下可促進(jìn)病灶周圍新生血管生成，此時微血管密度明顯增加，血流、灌注速度也明顯加快，超聲造影檢查中造影劑可迅速進(jìn)入病灶內(nèi)部并滯留，而增強(qiáng)幅度、梯度、曲線下面積能夠反映局部組織微血管、血流灌注情況，故Ki-67陽性患者中增強(qiáng)幅度、梯度、曲線下面積明顯增加[21]。而本研究中ER、PR陽性患者達(dá)峰時間均縮短，可能是VEGF分泌增加導(dǎo)致腫瘤邊緣形成較多走行迂曲、雜亂無序且管壁纖薄的新生微血管，此時血流呈現(xiàn)出異常的高流速，故造影劑隨血流進(jìn)入病灶內(nèi)部的時間明顯縮短，從而使達(dá)峰時間縮短[22]。另外，值得關(guān)注的是，Ki-67、HER-2、ER、PR陽性患者上升支斜率均明顯增加，分析原因可能是腫瘤惡性程度增高，導(dǎo)致病灶內(nèi)血液流速、灌注明顯增加，造成上升支斜率增加。與高軍喜等[23]研究結(jié)果相符。

本研究對乳腺癌患者免疫組織化學(xué)指標(biāo)與超聲造影參數(shù)的關(guān)系進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)達(dá)峰時間與HER-2、ER、PR呈負(fù)相關(guān)，上升支斜率與Ki-67、HER-2、ER、PR呈正相關(guān)，增強(qiáng)幅度、曲線下面積及梯度與Ki-67呈正相關(guān)，可見乳腺癌患者免疫組織化學(xué)指標(biāo)與超聲造影參數(shù)關(guān)系密切，超聲造影參數(shù)或可替代Ki-67、HER-2、ER、PR對乳腺癌患者的病情進(jìn)行早期無創(chuàng)的評估，為臨床診治提供參考。

綜上所述，乳腺癌患者Ki-67、HER-2、ER、PR陽性檢出率較高，且與超聲造影參數(shù)關(guān)系密切。