海南地方習(xí)用藥材土人參質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

陳蘭 馮劍 黃夢(mèng)利 孫曉玉 劉洋洋

摘要為建立海南地方習(xí)用藥材土人參的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，依據(jù)《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)工作手冊(cè)》中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研制的要求，對(duì)土人參藥材的性狀、鑒別、水分、總灰分、浸出物、多糖含量等指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果明確了土人參藥材的性狀和顯微結(jié)構(gòu)特征，建立了具有專屬性的薄層鑒別方法;規(guī)定土人參藥材水分含量不得超過12.0%、總灰分含量不得超過18.0%、醇溶性浸出物含量不得少于8.0%、多糖含量不得少于9.0%。本研究可為建立土人參藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系提供參考。

關(guān)鍵詞土人參;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);多糖

中圖分類號(hào) S649??????? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A???????? DOI：10.12008/j.issn.1009-2196.2022.01.014

Development of Quality Standard for Talinumpaniculatum， a Native Traditional Medicine in Hainan

CHEN Lan?? FENG Jian?? HUANG Mengli?? SUN Xiaoyu?? LIU Yangyang

（Hainan Branch of the Institute ofMedicinal Plant Development， Chinese Academy ofMedical Sciences and Peking UnionMedical College/Hainan Provincial Key Laboratory for Conservation and Development ofMedicinal Plant Resources inSouth China， Haikou， Hainan 570311， China）

Abstract?? Talinum paniculatum is a native medicinal plant in Hainan， and its characteristics， identification methods， and con- tents of water， total ash， extract， polysaccharides， etc were identified based on the requirements for the quality standard of crude drugs in the Working Manual of National Drug Standardization （2015 edition）. The characteristics and microstructures of T. paniculatum were identified， and an exclusive thin layer-chromatography identification method for T. paniculatum was established. The crude drug of T. paniculatum is provided for to contain no more than 12.0% of water， no more than 18.0% of total ash， no less than 8.0% of alcohol soluble extract and no less than 9.0% of polysaccharides. These results could provide reference for the establishment of quality standard system for T. paniculatum.

Keywords?? Talinum paniculatum; quality control; polysaccharide

海南地方習(xí)用藥材土人參為馬齒莧科植物土人參Talinumpaniculatum（Jacq.）Gaertn.的干燥全株，又稱櫨蘭、假人參、參草、土高麗參、紅參、紫人參、煮飯花、力參、波世蘭，一年生或多年生草本，全株無毛，高 30～100 cm ，原產(chǎn)熱帶美洲，我國(guó)中部和南部均有栽植，有的逸為野生，生于陰濕地[1]。土人參味甘、性平，根為滋補(bǔ)強(qiáng)壯藥，有補(bǔ)中益氣、潤(rùn)肺生津之功效，用于氣虛乏力、體虛自汗、脾虛泄瀉，葉消腫解毒，治疔瘡癤腫[1-2]。土人參富含黃酮類、多糖、微量元素等活性物質(zhì)，其葉、根部也可作為蔬菜食用，起到補(bǔ)血益氣的藥膳作用[3-6]。其中多糖具有較好的免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、保肝、抗衰老、降血脂等活性[7-8]，黃酮類化合物具有較好的抗氧化作用，是良好的天然抗氧化劑[5]。此外，土人參的提取物還具有抗菌和抗氧化作用，具有較高的食用和藥用價(jià)值[5，9-11]。

目前土人參的研究主要集中于其藥用價(jià)值[1，4]、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[12-13]、化學(xué)成分[14-15]、儲(chǔ)藏方式[16-17]、傳統(tǒng)栽培技術(shù)[18-22]等方面。在貴州，土人參被作為地方習(xí)用藥材并收載于《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版中，該標(biāo)準(zhǔn)較為簡(jiǎn)單，僅有性狀和顯微鑒別項(xiàng)[23]。因此，為提升土人參藥材質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，本研究對(duì)土人參藥材的質(zhì)量控制指標(biāo)進(jìn)行了深入探討，為制定海南地方習(xí)用藥材土人參質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及深入開發(fā)和利用土人參提供理論依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1?? 儀器與試劑儀器：生物顯微鏡（日本 Nikon ），馬弗爐，紫外可見分光光度計(jì)（日本島津）。

試劑：無水葡萄糖（批號(hào)：110833-201707，購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院），其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.1.2? 實(shí)驗(yàn)材料 10 批實(shí)驗(yàn)用土人參藥材樣品均為野生種，采自海南海口、定安、屯昌、瓊海、澄邁、保亭、萬寧、陵水等地，詳細(xì)信息見表1。其中，土人參對(duì)照藥材（批號(hào) TRS06）于2018 年3 月采自海南省保亭黎族苗族自治縣毛感鄉(xiāng)，除去雜質(zhì)，曬干而得。原植物經(jīng)廣東藥科大學(xué)鄭希龍副研究員鑒定為馬齒莧科（Portulacaceae）植物土人參T.paniculatum（ Jacq.）Gaertn.，對(duì)照藥材（ TRS06）原植物憑證（臘葉）標(biāo)本保存于海南省中藥標(biāo)本館，憑證編號(hào)為 TRS18032806BT。

1.2? 方法

1.2.1? 性狀檢定參照《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)工作手冊(cè)》的性狀檢定方法[24]，對(duì)10 批土人參藥材的外觀形狀、大小、表面色澤和特征、質(zhì)地、斷面及氣味進(jìn)行檢定和描述。

1.2.2? 鑒別

1.2.2.1? 顯微鑒別參照《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)工作手冊(cè)》的顯微鑒別法[24]，將10批土人參藥材粉碎，過四號(hào)篩;挑取少許粉末置載玻片上，滴加水合氯醛試液進(jìn)行透化，加蓋玻片，于生物顯微鏡下觀察土人參藥材粉末的顯微結(jié)構(gòu)特征。

1.2.2.2? 薄層鑒別將土人參藥材粉碎，過四號(hào)篩;取粉末1 g ，加石油醚（60～90℃）10 mL ，超聲提取10 min，濾過，濾渣加95%乙醇25 mL? 超聲提取1 h，濾過;將濾液濃縮至2 mL，作為土人參薄層鑒別供試品溶液。另取土人參對(duì)照藥材粉末1 g，同法制成土人參薄層鑒別對(duì)照藥材溶液。參照《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)工作手冊(cè)》照薄層色譜法，分別吸取上述2 種溶液各3 μL，點(diǎn)于同一硅膠 G 薄層板上，以正丁醇-水-冰醋酸（4 ∶1∶0.3）為展開劑，展開，取出晾干;噴以磷鉬酸試液，以105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，置日光下檢視。

1.2.3? 水分、總灰分、浸出物的測(cè)定土人參水分、總灰分、浸出物參照《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)工作手冊(cè)》中的測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定[24]。

1.2.4? 多糖的測(cè)定

1.2.4.1? 多糖對(duì)照品溶液制備取無水葡萄糖對(duì)照品適量，精密稱定，加水制成每1 mL 含0.6 mg 的溶液，即得。

1.2.4.2? 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密量取多糖對(duì)照品溶液 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，分別定容至50 mL;精密量取上述各溶液2.0 mL，分別置于10 mL 具塞試管中，迅速精密加入5%苯酚溶液1 mL 并搖勻;加入濃硫酸7 mL ，混勻后置于40℃水浴30 min，后冰浴5 min;取出，以相應(yīng)的試劑為空白，參照《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)工作手冊(cè)》中的紫外-可見分光光度法[24]，在490 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度;以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4.3? 土人參多糖供試品溶液制備將土人參藥材粉碎，過四號(hào)篩;取粉末約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加水25 mL，密塞，稱定重量;靜置1 h 后，水浴回流1 h，放冷，再稱定重量，用蒸餾水補(bǔ)足減失的重量;搖勻，離心，取上清液 1 mL，用蒸餾水定容至50 mL，搖勻，即得土人參多糖供試品溶液。

1.2.4.4? 方法學(xué)考察（ 1）線性關(guān)系考察精密量取對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，分別定容至50 mL，配制成葡萄糖含量為0.0012 、0.0024、0.0036、0.0048、0.0060 mg/mL 的系列溶液，以濃度作為橫坐標(biāo)（ X軸），吸光度為縱坐標(biāo)（ Y軸），進(jìn)行線性回歸，計(jì)算回歸方程。

（2 ）精密度試驗(yàn)精密吸取供試品溶液2.0 mL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的樣品制備方法，連續(xù)測(cè)定6 次，考察儀器精密度。

（3 ）穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取供試品溶液 2.0 mL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的樣品制備方法，測(cè)定反應(yīng)結(jié)束后的0 、10、20、30、40、50、60、90、120、150 min 的吸光度，考察供試品溶液的穩(wěn)定性。

（4 ）重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品6 份，按供試品溶液制備的方法，測(cè)定土人參多糖的含量;取同一批樣品制備6 份供試品溶液，用于測(cè)定吸光度，考察該方法重復(fù)性。

（5 ）回收率取已知含量的同一批樣品6 份，每份0.2 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法，分別精密加入1 mL 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液和1 mL 供試品溶液，定容至100 mL，測(cè)定并計(jì)算結(jié)果，考察該方法的準(zhǔn)確度。

1.2.4.5? 含量測(cè)定精密量取土人參多糖供試品溶液2 mL，置于10 mL 具塞試管中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品制備方法，測(cè)定樣品吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出土人參多糖供試品溶液中無水葡萄糖的含量，經(jīng)計(jì)算即得。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 性狀

土人參長(zhǎng)30～100 cm。根圓錐形或長(zhǎng)紡錘形，有的分枝;主根長(zhǎng)5～30 cm，直徑0.1～2.5 cm，表面凹凸不平，灰黑色，有縱皺紋及點(diǎn)狀突起的須根痕;質(zhì)堅(jiān)硬，難折斷。莖圓柱形或扁圓柱形，長(zhǎng)5～50 cm ，直徑0.1～0.5 cm;淡棕色，具細(xì)縱棱線;質(zhì)脆，斷面淡棕色或灰白色，有髓或中空。單葉互生，多皺縮破碎，墨綠色至黑棕色，完整者展平后呈倒卵形或倒卵狀長(zhǎng)橢圓形，先端急尖，有時(shí)微凹，基部狹楔形，全緣。圓錐花序頂生或腋生，二叉狀分枝，具長(zhǎng)花序梗。蒴果近球形，3 瓣裂。種子多數(shù)，扁圓形。氣微，味淡。

2.2? 鑒別

2.2.1? 顯微鑒別

如圖1 所示，土人參粉末呈灰黃色，木栓細(xì)胞呈長(zhǎng)方型或類長(zhǎng)方形。草酸鈣簇晶眾多，直徑20～70μm ，邊緣短鈍。導(dǎo)管為梯紋導(dǎo)管、螺紋導(dǎo)管、網(wǎng)紋導(dǎo)管、具緣紋孔導(dǎo)管。淀粉粒單粒散在或復(fù)粒，單粒類球形或近圓形，復(fù)粒由2～5粒分粒組成，多糊化。纖維成束。

2.2.2? 薄層鑒別展開后的薄層色譜板噴以磷鉬酸試液，以105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，于日光燈下檢視，如圖2 所示。供試品在與對(duì)照藥材薄層色譜相應(yīng)位置上，均顯相同灰藍(lán)色斑點(diǎn)。

2.3? 水分、總灰分、浸出物的測(cè)定

10批土人參樣品的水分、總灰分、浸出物測(cè)定結(jié)果見表2 。10批土人參總灰分含量平均值為14.71%，其中采自陵水吊羅山鄉(xiāng)土人參總灰分含量最高（16.68%），采自屯昌烏坡鎮(zhèn)的最低（13.66%）。10 批土人參的水分含量平均值為7.63%，其中采自定安黃竹鎮(zhèn)的土人參水分含量最高（9.23%），采自海口瓊山區(qū)的水分含量最低（ 6.84%）。10批土人參的醇溶性浸出物含量平均值為11.05%，其中采自定安黃竹鎮(zhèn)的土人參浸出物含量最高（12.84%），采自澄邁橋頭鎮(zhèn)的最低（ 10.17%）。

2.4? 多糖含量測(cè)定

2.4.1? 方法學(xué)考察

2.4.1.1? 線性關(guān)系以濃度作為橫坐標(biāo)（ X軸），吸光度為縱坐標(biāo)（ Y軸），進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=63.833X+0.0688，R2=0.9992。結(jié)果顯示，無水葡萄糖對(duì)照品在0.0012～0.0060 mg/mL 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（表3 ）。

2.4.1.2? 精密度試驗(yàn)精密度考察結(jié)果（表4 ），6次測(cè)量的 RSD 為0.00%，表明儀器精密度良好。

2.4.1.3? 穩(wěn)定性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（表5 ）表明，在 150 min 內(nèi)，吸光度變化不大，但 30 min 后數(shù)值略有波動(dòng)，建議在20 min 內(nèi)完成測(cè)定。

2.4.1.4? 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果如表6 所示，土人參多糖的吸光度 RSD 為0.92%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.1.5? 回收率測(cè)定結(jié)果見表7，土人參多糖含量的加樣回收率為（102.22±0.88）%，RSD 值為0.86%。

2.4.2? 多糖測(cè)定結(jié)果 10 批土人參多糖含量平均值為11.60%，詳見表8。其中，采自海口瓊山區(qū)的多糖含量最高（12.93%），而采自屯昌烏坡鎮(zhèn)的多糖含量最低（10.17%）。

3? 討論與結(jié)論

3.1? 土人參藥材水分、總灰分及醇溶性浸出物含量限值的確定

10批土人參藥材水分含量為6.84%～9.23%，利用10批土人參水分含量平均值乘以120%，得到其限定標(biāo)準(zhǔn)：7.63%×1.2=9.17%，但考慮海南濕度較大，擬規(guī)定土人參藥材水分含量不得過12.0%。10 批土人參藥材總灰分含量為13.66%～16.68%，與楊暹等[25]測(cè)得土人參總灰分為（14.30±0.13）%的結(jié)果基本一致。同理，利用10批土人參總灰分含量平均值乘以120%，得到其限定標(biāo)準(zhǔn)：14.71%×1.2=17.65%，擬規(guī)定土人參藥材總灰分含量不得過18.0%。10批土人參藥材浸出物含量為10.17%～12.84%，利用10批土人參浸出物含量平均值乘以80%，得到其限定標(biāo)準(zhǔn)：11.05%×0.8=8.84%，擬規(guī)定土人參藥材醇溶性浸出物含量不得少于8.0%。

3.2? 土人參藥材多糖含量限值的確定

多糖是土人參的主要活性成分之一[7，10，26]，因此本研究將多糖含量作為土人參的質(zhì)控指標(biāo)之一。10 批土人參藥材的多糖含量為10.17%～12.93%，利用10批土人參藥材多糖含量的平均值乘以80%，得到土人參藥材多糖含量限定標(biāo)準(zhǔn)：11.60×0.8=9.28%。故擬定按干燥品計(jì)算，土人參多糖含量不得少于9.0%。

本研究對(duì)海南地方習(xí)用藥材土人參藥材的性狀、顯微特征、薄層色譜、水分、總灰分、浸出物以及多糖含量等質(zhì)量指標(biāo)進(jìn)行研究，并制定相應(yīng)限值或要求，可為建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系提供參考，對(duì)確保土人參的臨床用藥安全及其作為制劑原料的安全性、有效性和穩(wěn)定性具有一定的意義。

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（責(zé)任編輯林海妹）