丙肝病毒RNA與丙肝抗體在丙肝診斷中的檢驗(yàn)效果分析

劉 軒

（天津市東麗醫(yī)院檢驗(yàn)科，天津 300300）

丙型病毒性肝炎（hepatitis C）是由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染所致的傳染性疾病，可通過(guò)母嬰、血液及性接觸等渠道進(jìn)行傳播，是我國(guó)重點(diǎn)關(guān)注的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一[1，2]。該病發(fā)病較為隱匿，早期癥狀多不明顯，其臨床診斷存在一定的漏診及誤診現(xiàn)象[3]。目前，丙肝抗體（HCV-Ab）及丙肝病毒RNA（HCV-RNA）檢測(cè)均是HCV 感染的主要診斷方式。其中HCV-Ab 檢驗(yàn)操作簡(jiǎn)便，診斷快速，但受到抗體窗口期的影響，其早期診斷作用較差[4]。HCV-RNA 檢驗(yàn)則可有效反映HCV的復(fù)制活躍程度，具有較高的檢驗(yàn)準(zhǔn)確率，在疾病診斷及療效監(jiān)測(cè)中均具有重要意義。但其影響因素較多，且技術(shù)、條件要求高，不利于基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)的推廣[5]。本研究結(jié)合2019年2月-2021年2月天津市東麗醫(yī)院收治的286 例丙肝疑似病例，分析HCV-RNA與HCV-Ab 檢測(cè)在丙肝診斷中的檢驗(yàn)效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年2月-2021年2月天津市東麗醫(yī)院收治的286 例丙肝疑似病例為研究對(duì)象，其中男185 例，女101 例；年齡24～68 歲，平均年齡（37.65±5.19）歲，所有受檢者均知情且自愿參與。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①伴有腹脹、乏力、厭油等癥狀表現(xiàn)，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶（AST）指標(biāo)升高，初步診斷為疑似丙肝者；②臨床資料完整；③檢測(cè)前未接受相關(guān)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他肝功能疾病者；②妊娠及哺乳期女性；③檢查前服用過(guò)肝代謝藥物的患者。

1.3 方法 于清晨采集患者外周靜脈血5 ml，1500 r/min，離心10 min，將其上清液移至離心管中。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)HCV-Ab，選用人丙型肝炎病毒抗體定量檢測(cè)試劑盒（北京萬(wàn)泰生物有限公司），于包被微孔依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP 標(biāo)記抗體，經(jīng)溫育洗滌后，采用底物TMB 顯色，其顏色深淺與樣品中HCV-Ab 呈正相關(guān)。隨后應(yīng)用酶標(biāo)儀（美國(guó)伯樂(lè)bio-rad 型）于450 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度，吸光度/陽(yáng)性判定值≥1 為陽(yáng)性，反之陰性。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法檢測(cè)HCVRNA 含量，儀器為Roche 羅氏LightCycler480 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀，試劑均來(lái)自上海科華生物工程股份有限公司，試劑盒最低檢出量為250 IU/ml，線性范圍（1.0×103～1.0×107）IU/ml，HCV-RNA 含量＞1000拷貝/ml 判定為陽(yáng)性，反之陰性。以上檢測(cè)均按照相應(yīng)試劑說(shuō)明嚴(yán)格進(jìn)行。

1.4 觀察指標(biāo) 分析本次受檢者的HCV-RNA、HCVAb 檢測(cè)結(jié)果，以病理學(xué)檢查（肝穿刺）為金標(biāo)準(zhǔn)。比較HCV-RNA 檢驗(yàn)與HCV-Ab 檢驗(yàn)的診斷符合率、誤診率、漏診率、診斷敏感度、診斷特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值。診斷敏感度=真陽(yáng)性/真陽(yáng)性+假陰性，診斷特異度=真陰性/假陽(yáng)性+真陰性，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性/真陽(yáng)性+假陽(yáng)性。比較不同HCV-RNA 檢測(cè)水平下的谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、白蛋白（ALB）指標(biāo)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，組間比較行x2檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 陽(yáng)性檢測(cè)率比較 兩項(xiàng)檢測(cè)均為陽(yáng)性的患者共33.22%（95/286），HCV-RNA 陽(yáng)性、HCV-Ab 陰性患者共35.66%（102/286），HCV-RNA 陰性、HCV-Ab陽(yáng)性患者共24.13%（69/286），單HCV-RNA 陽(yáng)性患者多于單HCV-Ab 陽(yáng)性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 診斷符合率比較 以病理學(xué)檢查為金標(biāo)準(zhǔn)（陽(yáng)性268 例，陰性18 例），HCV-RNA 檢驗(yàn)的診斷符合率高于HCV-Ab 檢驗(yàn)，漏診率低于HCV-Ab 檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩種檢測(cè)方式的診斷符合率比較[n（%）]

2.3 診斷價(jià)值分析 HCV-RNA 檢測(cè)的敏感度、特異度均高于HCV-Ab 檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2、表3。

表2 HCV-Ab、HCV-RNA 診斷結(jié)果分析（n）

表3 兩種診斷方式價(jià)值比較（%）

2.4 不同HCV-RNA 檢測(cè)水平下ALT、ALB 指標(biāo)比較 不同HCV-RNA 檢測(cè)水平下ALT、ALB 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中ALT 指標(biāo)隨著HCV-RNA 檢測(cè)水平的升高而上升，而ALB 指標(biāo)隨HCV-RNA 檢測(cè)水平升高而下降，見(jiàn)表4。

表4 不同HCV-RNA 檢測(cè)水平下ALT、ALB 指標(biāo)比較（n=286，±s）

表4 不同HCV-RNA 檢測(cè)水平下ALT、ALB 指標(biāo)比較（n=286，±s）

3 討論

丙肝是常見(jiàn)感染性疾病，呈高度慢性化發(fā)展，目前尚無(wú)可預(yù)防疫苗，其早期檢驗(yàn)具有重要意義[6，7]。HCV-Ab 與HCV-RNA 檢驗(yàn)均是當(dāng)前常用的實(shí)驗(yàn)室診斷方式，HCV-Ab 采用ELISA 法檢驗(yàn)，其操作簡(jiǎn)單、快捷，檢驗(yàn)成本低，可保證診斷的及時(shí)性[8，9]，但丙肝窗口期通常為3～6 個(gè)月，其抗體的血清學(xué)轉(zhuǎn)換延遲可導(dǎo)致假陰性結(jié)果，因而早期診斷作用較低[10-12]。HCV-RNA 需通過(guò)熒光定量PCR 法檢驗(yàn)，其檢測(cè)準(zhǔn)確率高，可于HCV 感染1～2 周內(nèi)檢出，是反映HCV復(fù)制活躍程度及傳染性的重要方式，但RNA 易降解，且影響因素多，對(duì)設(shè)備及實(shí)驗(yàn)室條件均具有較高要求，普及性不高[13-15]。

本研究結(jié)果顯示，在受檢者的檢測(cè)結(jié)果中，2 項(xiàng)檢測(cè)均為陽(yáng)性的患者共33.22%，表示慢性HCV 感染，具有傳染性。HCV-RNA 陽(yáng)性、HCV-Ab 陰性患者共35.66%，提示存在HCV 感染，但血液中HCV抗原滴度未達(dá)到試劑檢測(cè)靈敏度，可能患者正處于感染窗口期，其機(jī)體尚未產(chǎn)生抗體。HCV-RNA 陰性、HCV-Ab 陽(yáng)性患者共24.13%（69/286），提示HCV 感染早期，但HCV-RNA 含量未達(dá)陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，可能存在RNA 降解情況[16]。且本次研究中，單HCV-RNA 陽(yáng)性患者多于單HCV-Ab 陽(yáng)性患者（P＜0.05），表明HCV-RNA 檢驗(yàn)相較于HCV-Ab 檢驗(yàn)具有更高的陽(yáng)性檢出率。同時(shí)，HCV-RNA 檢驗(yàn)的診斷符合率高于HCV-Ab 檢驗(yàn)（P＜0.05），漏診率低于HCV-Ab 檢驗(yàn)，這與多項(xiàng)研究[17-20]結(jié)果一致，提示HCV-RNA 在HCV 檢驗(yàn)中具有更高的診斷準(zhǔn)確率。分析認(rèn)為，除了抗體窗口期時(shí)間的影響外，長(zhǎng)期采用免疫抑制劑治療及血液透析的患者，其HCV-Ab 多呈陰性，可導(dǎo)致漏檢率的增加，進(jìn)而影響其診斷準(zhǔn)確性[21]。此外，HCV-RNA 檢測(cè)的敏感度、特異度均高于HCV-Ab 檢測(cè)（P＜0.05），提示HCV-RNA 檢測(cè)對(duì)丙肝疾病的診斷價(jià)值高于HCV-Ab 檢測(cè)。通常情況下，丙肝患者多伴有不同程度的肝細(xì)胞損傷，可引起肝臟合成及代謝功能的下降，導(dǎo)致肝臟合成物ALB濃度下調(diào)，同時(shí)造成肝細(xì)胞中ALT 等物質(zhì)的外滲，導(dǎo)致血清ALT 濃度增加，ALB 與ALT 均是反映肝功能損傷的重要指標(biāo)。而本次研究中，不同HCVRNA 檢測(cè)水平下ALT、ALB 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中ALT 指標(biāo)隨著HCV-RNA 檢測(cè)水平的升高而上升，而ALB 指標(biāo)隨HCV-RNA 檢測(cè)水平升高而下降，提示HCV-RNA 檢測(cè)結(jié)果可有效反映患者的肝損傷程度，這是由于病毒活躍程度與肝功能損傷存在密切關(guān)聯(lián)。因此，HCV-RNA 水平可作為機(jī)體肝功能檢測(cè)的輔助參考依據(jù)。

綜上所述，HCV-RNA 檢驗(yàn)在丙肝中的診斷價(jià)值高于HCV-Ab 檢驗(yàn)，且HCV-RNA 定量檢測(cè)對(duì)患者肝功能損傷也具有一定檢驗(yàn)價(jià)值。但考慮到HCV-RNA 檢驗(yàn)價(jià)格昂貴、檢測(cè)要求高、普及度低等弊端，建議將其應(yīng)用于HCV-Ab 篩查后，通過(guò)二者應(yīng)用優(yōu)勢(shì)的結(jié)合，保證疾病診斷的準(zhǔn)確性，提高HCV 窗口期檢出率，同時(shí)降低盲目檢驗(yàn)成本，為該病早期防治提供可靠參考信息。