精液不液化不育患者的精子DNA碎片指數與其精子常規參數、精子頂體酶活性的關系及其對體外受精結局的影響分析

劉洋

鄭州市婦幼保健院生殖遺傳科，河南省鄭州市 450000

不孕不育是世界醫學領域的三大難題之一，我國15%左右的育齡期夫婦出現不孕不育，其中因男方因素導致的不育約占50%[1-2]。目前，精液常規參數仍被作為診斷男性不育的主要指標，但其存在一定局限性，因為研究發現在精液常規參數正常的男性人群中有15%左右發生不育[3]。精液常規參數在優質精子篩選的輔助生殖領域的應用效果不佳，已無法滿足臨床要求。精子DNA碎片指數(DFI)是一項評估精子質量的新指標，常被用于男性生育力的評估及輔助生殖助孕結局的預測[4]。為探討精液不液化不育患者精子DNA碎片指數與精子常規參數、精子頂體酶活性的關系及其對體外受精結局的影響，本研究選取106例精液不液化不育患者與52名正常健康男性進行了檢測分析，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年12月至2020年5月在我院就診的精液不液化不育患者106例為觀察組。納入標準：(1)患者符合男性不育癥的診斷標準[5]；(2)患者夫妻正常性生活1年以上；(3)查體及彩色多普勒超聲檢查未發現患者有明顯的睪丸、附睪及輸精管異常；(4)患者無遺傳疾病家族史；(5)女方生育能力正常；(6)患者簽署檢測研究知情同意書。選取同期在我院進行健康體檢的有正常健康生育史的男性52名為對照組。觀察組患者年齡18～43歲，平均(29.86±4.39)歲；不育年限1～12年，平均(5.75±1.39)年。對照組志愿者年齡18～45歲，平均(30.28±4.57)歲。兩組研究對象的年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 精液分析 采兩組研究對象的精液，參照《世界衛生組織人類精液檢查與處理實驗室手冊(第5版)》[6]采用計算機輔助精液分析系統分析精子常規參數，包括精液濃度、精子正常形態率、前向運動精子量等。

1.2.2 精子DFI檢測 采用精子染色質擴散法觀察兩組研究對象的精子DFI，試劑盒購自安徽安科生物科技有限公司。標準：精子頭部無光暈或光暈較小，或單側光暈厚度≤1/3精子頭部最小直徑，均判斷為存在精子DNA碎片。精子DFI=存在DNA碎片的精子數/總精子數×100%。

1.2.3 精子頂體酶活性檢測 采用精子頂體染色試劑盒檢測兩組研究對象的精子頂體酶活性，試劑盒購自深圳市華康生物醫學工程有限公司。

1.2.4 體外受精試驗 常規處理精液不液化不育患者夫婦的精子與卵細胞，進行體外受精試驗。觀察到雙原核的受精卵即為正常受精。正常受精率=雙原核卵數/獲卵數×100%；胚胎卵裂率=發生卵裂胚胎數/總胚胎數×100%。

1.3 觀察指標

1.3.1 比較兩組研究對象的精液參數、精子DFI、精子頂體酶活性、吸煙及生活作息情況。每天吸煙1支以上且持續1年以上者判定為吸煙。

1.3.2 對影響精液不液化不育患者精子DFI的因素進行Logistic回歸分析。

1.3.3 對精液不液化不育患者的精子DFI、精子頂體酶活性與其年齡、精液參數的關系進行Pearson相關分析。

1.3.4 根據精子DFI，將精液不液化不育患者分為精子DFI<10%組與精子DFI≥10%組，比較兩組患者的體外受精結局。

1.4 統計學處理 采用SPSS 21.0統計學軟件進行數據分析。計量資料以x±s表示，兩組間均數比較采用t檢驗。計數資料以%表示，組間比較采用χ2檢驗。對精液不液化不育患者精子DFI、精子頂體酶活性與其年齡、精液參數的關系，精子DFI與精子頂體酶活性的關系進行Pearson相關分析；對影響精液不液化不育患者精子DFI的因素進行logistic回歸分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組研究對象的精液參數、精子DFI、精子頂體酶活性、吸煙及生活作息情況比較 觀察組患者的精液濃度、精子正常形態率、前向運動精子量、精子頂體酶活性顯著小(少)于對照組，精子DFI、吸煙率、生活作息不規律發生率顯著高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2 影響精液不液化不育患者精子DFI的多因素Logistic回歸分析 以精子DFI≥10%為因變量，以年齡、吸煙、生活作息、精液濃度、精子正常形態率、前向運動精子量、精子頂體酶活性為自變量進行多因素logistic回歸分析。結果顯示，年齡、精液濃度、精子正常形態率、前向運動精子量、精子頂體酶活性、吸煙、生活作息不規律均是影響精液不液化不育患者精子DFI的獨立因素(P<0.05)。見表2。

表2 影響精液不液化不育患者精子DFI的多因素logistic回歸分析

2.3 精液不液化不育患者精子DFI、精子頂體酶活性與其精液參數的關系分析 Pearson相關性分析結果顯示，精液不液化不育患者的精子DFI與其年齡呈正相關，與其精液濃度、精子正常形態率、前向運動精子量、精子頂體酶活性呈負相關；精液不液化不育患者的精子頂體酶活性與其年齡呈負相關，與其精液濃度、精子正常形態率、前向運動精子量呈正相關。見表3。

表3 精液不液化不育患者精子DFI、精子頂體酶活性與精液參數關系的Pearson相關性分析

2.4 不同精子DFI患者的體外受精結局比較 精子DFI<10%精液不液化不育患者體外受精試驗的正常受精率顯著高于精子DFI≥10%患者(P<0.05)，但他們的胚胎卵裂率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 不同精子DFI患者的體外受精結局比較

3 討 論

研究表明，任何影響精子產生、降低精子質量和功能的因素均會影響男性的生育能力，導致男性不育[7]。精子DNA損傷是導致男性生殖能力下降的常見因素，年齡大、吸煙、生活作息不規律等與精子DNA受損有關[8]。本研究結果顯示，精液不液化不育的觀察組患者的精液濃度、精子正常形態率、前向運動精子量、精子頂體酶活性顯著小(少)于對照組，精子DFI、吸煙率、生活作息不規律發生率顯著高于對照組，提示精液濃度、精子正常形態率、前向運動精子量、精子頂體酶活性、精子DFI、吸煙、生活作息不規律等可能是導致精液不液化患者不育的因素。多因素logistic回歸分析結果顯示，年齡、精液濃度、精子正常形態率、前向運動精子量、精子頂體酶活性、吸煙、生活作息不規律均是影響精液不液化不育患者精子DFI的獨立危險因素；通過分析發現，精液不液化不育患者的精子DFI與其年齡呈正相關，與其精液濃度、精子正常形態率、前向運動精子量、精子頂體酶活性呈負相關；患者的精子頂體酶活性與其年齡呈負相關，與其精液濃度、精子正常形態率、前向運動精子量呈正相關。由此可以推測，將精子DNA碎片指數與精子常規參數、精子頂體酶活性等指標結合起來，可更全面、準確地評估男性生育能力。

本研究結果顯示，精液不液化不育患者的精子DFI與其年齡呈正相關，與其精液濃度、精子正常形態率、前向運動精子量、精子頂體酶活性呈負相關，與一些文獻[9-11]報道的結果相似。隨著年齡增長，男性睪丸、附睪、前列腺等器官逐漸老化，抗氧化能力降低，活性氧自由基增多，機體內活性氧積聚，會誘導氧化應激損傷精子質膜、損傷精子DNA；而精子DNA鏈出現過多斷裂可引起精子細胞凋亡，從而導致前向運動精子量減少、精子活動率降低、精子形態發生改變[12]。本研究結果顯示，精液不液化不育患者的精子頂體酶活性與其年齡呈負相關，與其精液濃度、精子正常形態率、前向運動精子量呈正相關，提示精子頂體酶活性可能也是影響精液不液化不育患者生育能力的重要因素之一。精子頂體酶是存在于精子頂體內的胰蛋白酶，受精時釋放，可水解蛋白，并與透明帶結合，從而調節精子頂體內容物的釋放，促進受精過程的完成。精子頂體酶活性降低，可導致精子頂體內容物不完全釋放，導致精子對透明帶的穿透力降低，誘發男性不育。楊斯桀等[13]報道，男性精子DFI較高不育夫婦的體外受精妊娠率很低。本研究結果顯示，精子DFI<10%精液不液化不育患者體外受精試驗的正常受精率顯著高于精子DFI≥10%患者，但他們的胚胎卵裂率比較差異卻無統計學意義，提示精子DFI是否會影響精液不液化不育患者的體外受精結局還有待進一步深入研究。