病原微生物檢測技術(shù)進(jìn)展

摘要：病原微生物是一類可侵犯人體、動物或植物，引起傳染性、食源性疾病的微生物的統(tǒng)稱，不僅可對人們、動物的身體健康安全構(gòu)成一定威脅和危害人們的食品安全，嚴(yán)重時還會導(dǎo)致人們、動物死亡，因此，就需要積極探尋有效檢測技術(shù)對病原微生物進(jìn)行檢測。本文主要簡述了病原微生物檢測的意義，并總結(jié)了病原微生物檢測技術(shù)進(jìn)展。

關(guān)鍵詞：病原微生物;檢測技術(shù);進(jìn)展

病原微生物感染不僅可引發(fā)人們出現(xiàn)相應(yīng)的疾病，同時病原微生物還會污染食品、飲用水，從而對人類的食品安全構(gòu)成一定的威脅，進(jìn)而會對其身體健康和生命安全構(gòu)成一定的威脅，因此，就需要及時采取有效技術(shù)檢測出病原微生物，并根據(jù)病原微生物類型采取針對性的方案對人們進(jìn)行治療或?qū)Σ≡⑸镞€會污染食品、飲用水等進(jìn)行處理，才能保障人們的身體健康和生命安全，基于此，本文特總結(jié)了病原微生物檢測技術(shù)進(jìn)展情況。

1.病原微生物檢測的意義

病原微生物指的是可以侵犯人體、動物或植物，引起感染或傳染病的微生物，包含真菌、細(xì)菌、病毒、支原體、衣原體、立克次體、寄生蟲（蠕蟲、原蟲、醫(yī)學(xué)昆蟲）等，這些病原微生物均屬于微小生物，依靠人眼無法觀測，因此，就需要借助相關(guān)的檢測技術(shù)將微生物放大很多倍，才能對其進(jìn)行仔細(xì)、準(zhǔn)確的觀察，從而有助于幫助明確病原微生物類型，進(jìn)而有助于采取針對性的措施對其進(jìn)行處理。

2.病原微生物檢測技術(shù)進(jìn)展

2.1實驗室檢測技術(shù)

實驗室檢測是最傳統(tǒng)的病原微生物檢測技術(shù)，主要包含了病原微生物分離培養(yǎng)和涂片鏡檢兩種類型，其中，分離培養(yǎng)主要是在固體平板培養(yǎng)基上用單孢子分離法、液體稀釋法或劃線分離法將多種病原菌分離出來進(jìn)行檢測的技術(shù)。這種檢測技術(shù)雖能為多種病原微生物分離檢測提供可靠的依據(jù)，但是，其存在無法批量出來樣本、檢測周期長的缺陷。涂片鏡檢較分離培養(yǎng)更加方便快捷，且還能初步診斷出結(jié)核分歧桿菌、淋球菌感染等特殊形態(tài)的病原微生物，因此，其是實驗室較為重要的病原微生物檢測技術(shù)之一。

2.2免疫學(xué)檢測技術(shù)

免疫學(xué)檢測技術(shù)是一種利用各種指示抗原抗體反應(yīng)檢測食源性疾病、傳染病、環(huán)境中含有的相關(guān)病原微生物抗體、抗原的檢測技術(shù)，目前，常用的免疫學(xué)檢測技術(shù)有酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)和免疫磁珠分離技術(shù)。

2.2.1酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)

酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)是一種將酶催化的放大作用與病原微生物特異性抗原、抗體產(chǎn)生反應(yīng)結(jié)合起來的微量檢測分析技術(shù)，具有檢測時間段、準(zhǔn)確率高、檢測結(jié)果客觀標(biāo)準(zhǔn)以及適合大批標(biāo)準(zhǔn)檢測等優(yōu)勢，因此，被廣泛應(yīng)用與疾病檢測、食品安全檢測中，如其不僅能檢測人類唾液的抗幽門螺旋桿菌抗體，從而準(zhǔn)確診斷出幽門螺旋桿菌感染，還能采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)檢測食品大腸埃希氏菌含量，從而能保證食品安全。

2.2.2免疫磁珠分離技術(shù)

免疫磁珠分離技術(shù)是一種將磁珠特有的磁響應(yīng)性與免疫學(xué)反應(yīng)的高度特異性相結(jié)合而產(chǎn)生的新型免疫學(xué)技術(shù)，其主要是將磁珠當(dāng)作病原微生物抗原、抗體的載體與微生物抗原、抗體之間實現(xiàn)特異性結(jié)合，形成相應(yīng)的抗原或抗體磁珠復(fù)合物，然后，在磁場的作用下使磁珠復(fù)合物標(biāo)本的其余成分相互分離，從而實現(xiàn)對病原微生物純化處理和檢測，該項檢測技術(shù)在疾病、食品病原微生物檢測方面均有良好的應(yīng)用效果。如高陽等人指出，采用該項檢測技術(shù)能有效檢測出豬肉食品樣本的金黃色葡萄球菌、沙門菌，從而能準(zhǔn)確預(yù)測是否會出現(xiàn)突發(fā)性的公共衛(wèi)生事件。

2.3分子生物學(xué)檢測技術(shù)

分子生物學(xué)檢測技術(shù)是一種將分子生物學(xué)與分子遺傳學(xué)結(jié)合而產(chǎn)生的生物學(xué)檢測技術(shù)，包含了聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)、多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)、滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)、基因芯片檢測技術(shù)等。

2.3.1聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，其主要是利用雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，然后在病原微生物外復(fù)制一段已經(jīng)得知的序列DNA片段，并在反應(yīng)體系中設(shè)置微生物特異性引物，最后，通過檢測擴(kuò)增產(chǎn)物而達(dá)到檢測和鑒別病原微生物的目標(biāo)。相關(guān)研究指出，將其應(yīng)用于醫(yī)療領(lǐng)域的病原微生物檢測中，不僅能對重性感染過程中的肝炎病毒情況和肝炎病毒的重疊性進(jìn)行準(zhǔn)確檢測，還能快速、準(zhǔn)確地檢測出一些生長速度較慢且不容易進(jìn)行分離培養(yǎng)的病原微生物，如分枝桿菌、衣原體等。將其應(yīng)用于食品領(lǐng)域的病原微生物檢測中，能夠快速檢測出金黃色葡萄球菌毒株。

2.3.2多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)

多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)是一種可同時對多個靶基因進(jìn)行定量檢測的分子生物學(xué)檢測技術(shù)，其主要是通過對靶序列片段的2個特異探針進(jìn)行合理設(shè)計，結(jié)合高度特異的連接反應(yīng)，然后，對雜交后的連接產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增和毛細(xì)管電泳，再對比擴(kuò)增片段長度或預(yù)定擴(kuò)增片段，從而檢測和鑒定出未知靶序列。Kim等人指出，多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)可同時對13種食源性致病菌進(jìn)行高通量檢測，通過檢測能有效實現(xiàn)動物源性食品引起的食源性疾病的早期預(yù)警。

2.3.3滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)

滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)是一種通過模仿病毒遺傳物質(zhì)滾環(huán)式復(fù)制而形成的擴(kuò)增技術(shù)，相比于傳統(tǒng)的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增技術(shù)，該種擴(kuò)增技術(shù)在DNA聚合酶的催化下通過擴(kuò)增閉合環(huán)狀模板產(chǎn)生成千上萬的重復(fù)序列，且檢測序列與結(jié)合引物引發(fā)擴(kuò)增的中間序列互不影響，從而能采用一種引物對多種鎖式探針擴(kuò)增以實現(xiàn)多靶標(biāo)檢測，進(jìn)而使得擴(kuò)增效率明顯提高，檢測信號顯著放大，這樣一來，便有效提高了檢測的靈敏度。張世佳等人在研究中指出，滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)可在較短時間內(nèi)實現(xiàn)對多種病原微生物極微量的分子檢測，靈敏度可達(dá)20cfu/μL。且研究中還指出，滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)是一種信號擴(kuò)增和放大技術(shù)，可聯(lián)用多種生物傳感器技術(shù)，通過將帶有信號的標(biāo)記物與擴(kuò)增產(chǎn)物相結(jié)合，還能直接讀取擴(kuò)增信號，從而具有操作簡單方便，靈敏度高、讀取結(jié)果方便等優(yōu)勢。

2.3.4基因芯片檢測技術(shù)

基因芯片檢測技術(shù)也被稱作DNA芯片技術(shù)，主要利用DNA芯片作為載體，采用微點針方式、片原位合成方式和其他形式，在DNA芯片上排列基因組探針或寡核苷酸探針，然后，通過觀察和檢測探針與被檢測樣本之間發(fā)生的反應(yīng)而實現(xiàn)對病原微生物的基因分析。該項檢測技術(shù)具有檢測效果較好、準(zhǔn)確度高、特異性強(qiáng)、檢測速度快等優(yōu)勢，且還能用于各個領(lǐng)域的病原微生物檢測。應(yīng)用該項技術(shù)進(jìn)行病原微生物檢測，需要對病原微生物的共有靶基因進(jìn)行擴(kuò)增處理，并按照微生物特有標(biāo)志基因和微生物相互之間的差異序列對靶基因進(jìn)行合理設(shè)置，再進(jìn)行擴(kuò)增處理，這樣能有效明確有無病原微生物感染和檢測出病原微生物感染類型。

2.4代謝學(xué)檢測技術(shù)

代謝學(xué)檢測技術(shù)是一類新型的病原微生物檢測技術(shù)，常見的有電阻抗技術(shù)和三磷酸腺苷生物發(fā)光技術(shù)兩種類型。

2.4.1電阻抗技術(shù)

電阻抗技術(shù)是一種根據(jù)病原微生物在培養(yǎng)基中代謝活動的不同，采用測量法檢測和鑒定微生物的技術(shù)，在檢測過程中，需要合理測定培養(yǎng)基中蛋白質(zhì)含量、碳水化合物含量、脂肪類含量，并將這些大分子物質(zhì)代謝成為小分子物質(zhì)，以促進(jìn)培養(yǎng)基的導(dǎo)電性能增強(qiáng)，才能有效提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。相關(guān)研究指出，這項檢測技術(shù)能快速檢測出食品中細(xì)菌、沙門菌等病原微生物總體數(shù)量。

2.4.2三磷酸腺苷生物發(fā)光技術(shù)

三磷酸腺苷生物發(fā)光技術(shù)是一種通過對果蔬切片制作樣本菌液，然后，對樣本菌液中的三磷酸腺苷含量進(jìn)行測定，從而間接測定出細(xì)菌活菌數(shù)量的檢測技術(shù)，其主要用于果蔬食品病原微生物檢測中，具有操作簡單、檢測速度快、檢測準(zhǔn)確度高等優(yōu)勢，能及時、準(zhǔn)確地明確果蔬樣本是否安全。

3.結(jié)語

病原微生物是一類可侵犯人體、動物或植物，引起傳染性、食源性疾病的微生物的統(tǒng)稱，包含真菌、細(xì)菌、病毒、支原體、衣原體、立克次體、寄生蟲（蠕蟲、原蟲、醫(yī)學(xué)昆蟲）等，不僅可對人們身體健康和生命安全構(gòu)成一定的威脅，嚴(yán)重時還會威脅其生命安全，因此，就需要采取有效檢測技術(shù)進(jìn)行病原微生物檢測，既往，臨床多采用分離培養(yǎng)和涂片鏡檢等實驗室檢測技術(shù)進(jìn)行病原微生物檢測，雖有一定的檢測價值，但是，這些檢測技術(shù)耗時較長，因此，臨床不斷探尋新的病原微生物檢測技術(shù)，探究出免疫學(xué)檢測技術(shù)（酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)、免疫磁珠分離技術(shù)）、分子生物學(xué)檢測技術(shù)（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)、多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)、滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)、基因芯片檢測技術(shù)等）、代謝學(xué)檢測技術(shù)（電阻抗技術(shù)、三磷酸腺苷生物發(fā)光技術(shù)），這些檢測技術(shù)不僅操作簡便、檢測準(zhǔn)確率高，且檢測速度也非常快，且部分檢測技術(shù)還能實現(xiàn)對病原微生物的定量定性分析，從而有助于病原微生物鑒別檢測，進(jìn)而能為病原微生物感染疾病治療或病原微生物污染食品、水源處理提供可靠的參考依據(jù)。

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作者簡介：龍獻(xiàn)乾，性別：女，民族：漢族，籍貫：廣西平南縣，學(xué)歷：本科學(xué)士學(xué)位

科室：檢驗科，主管檢驗技師