溶血對電化學發光微粒子免疫法檢測胰島素與C肽結果的影響

潘永康

[摘要]目的：分析溶血對采取電化學發光微粒免疫法測定胰島素、C肽結果的影響。方法：選取81例糖尿病患者為研究對象，在空腹狀態下采集血液，之后在口服葡萄糖耐量試驗（OGTT）后0.5.h、1.h、2.h、3.h采集血清，之后進行標本溶血，對不同標本進行血清胰島素、C肽的測定，比較檢測結果的差異。結果：溶血前胰島素與C肽的檢測結果分別為（36.11±2.25）μU/mL、（6.51±0.51）ng/mL，溶血后分別為（30.14±2.35）μU/mL、（5.88±0.48）ng/mL，對比差異有統計學意義（P<0.05）;不同時間段標本血清胰島素與C肽水平比較差異無統計學意義（P>0.05）;胰島素的濃度同標本溶血以及放置時間呈現出負相關關系。結論：采取電化學發光微粒子免疫法測定糖尿病患者的胰島素與C肽水平，若是標本發生溶血可引起檢測結果的降低。

[關鍵詞]溶血;電化學發光微粒免疫法;胰島素;C肽

[中圖分類號]R446.6.R587.1.

[文獻標識碼]A.

[文章編號]2096-5249（2022）03-0157-03

糖尿病是一種常見的慢性代謝性疾病，發病原因主要為機體胰島素分泌不足或相對不足，胰島素作用缺陷導致以高血糖為典型特征的代謝性疾病，若機體長時間處在高血糖狀態容易引起多臟器功能損傷或者衰竭，因此對疾病盡早診斷及合理治療有非常重要的意義[1]。研究顯示胰島素與C肽釋放試驗、口服葡萄糖耐量試驗（oral glucose tolerance test，OGTT）對診斷糖尿病有一定價值。其中胰島素與C肽釋放試驗，常需要在不同的時間點采集血液，根據采集情況對測定結果進行綜合分析，而為了確保測定結果的準確性，需要保證任意時間點的測定結果準確無誤，確保判定結果的科學性及合理性[2]。而日常進行血生化檢驗工作中，存在諸多對檢測結果準確性的影響因素，其中最常見的一種影響因素是溶血。標本溶血可導致紅細胞破裂，造成多項檢測結果的準確性差異改變，繼而影響檢測結果的準確性[3]。在研究分析溶血對電化學發光微粒子免疫法測定胰島素、C肽結果的影響，報道如下。

1對象與方法

1.1研究對象

選取2020年1月至2021年3月在本院接受胰島素與C肽釋放試驗檢測的81例糖尿病患者為研究對象。男性50例，女性31例;年齡33～85（54.12±2.16）歲。

（2017年版）》[4]糖尿病相關診斷標準;（2）病例資料完整，精神意識良好，具備正常溝通交流能力。

排除標準：（1）合并嚴重肝腎功能損傷患者;（2）合并惡性腫瘤疾病患者;（3）精神疾病或者認知功能障礙患者;（4）依從性差患者。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑

羅氏Cobase601型全自動電化學發光免疫分析儀;胰島素與C肽檢測試劑盒，上海羅氏制藥有限公司;真空采血管、一次性采血針，廣州陽普醫療科技股份有限公司;離心機，北京白洋醫療器械有限公司。

1.2.2研究方法

在清晨空腹狀態下，采集患者的肘靜脈血液4mL到真空采血管，將這一時間點作為0h。進行OGTT試驗，主要是飲用250mL含75g葡萄糖，在飲用后1h、0.5h、2h、3h均采集4mL的血液。將試管放在常溫下15min，血液完全凝固后置入到離心機中，以3500r/min的速度離心5min，離心后的血清呈現淡黃色，肉眼未見溶血、黃疸及脂濁。每一例患者采集的五管血在集齊后同時上機進行檢測。完成標本的測定后，即刻應用吸管吹打攪拌紅細胞，實現人為溶血處理，然后將溶血的標本置入離心機中，以3500r/min的速度持續離心5min，觀察溶血標本的離心血清呈現為納入標準：（1）均符合《中國2型糖尿病防治指南淡紅色，將標本即刻上機進行檢測。81例患者的血液標本在溶血前后應用羅氏電化學發光免疫分析儀與配套試劑盒檢測胰島素與C肽，控制檢測室內環境的溫濕度適宜，使得測定結果滿意。

為了避免標本質量對于檢測結果的影響，肘靜脈血液采集主要參照如下標準進行。（1）標本采集前準備。要求采血者需禁食12h，但是不能過度空腹，前一天晚上6～8點可正常進食，但注意避免飲酒及過量使用糖分及脂肪含量高的食物。準備好采血需要用到的器械，包括一次性注射器、一次性塑料試管、壓脈帶、真空采血管、碘伏、無菌棉簽、抗凝管。（2）標本采集操作。仔細核對檢驗申請單、受檢者的姓名，為受檢者講解操作目的以取得患者的配合，將標簽貼在采血管上;選擇受檢者適合的血管，通常可選擇肘窩靜脈、肘正中靜脈、前臂內側靜脈，穿刺部位肢體下可墊一次性墊巾以及壓脈帶;應用復合碘棉前對穿刺部位消毒處理，于靜脈穿刺上4～7cm部位綁扎壓脈帶，指導受檢者握緊拳頭，充分顯露靜脈充盈情況;操作者采取真空采血方式，將靜脈穿刺針上保護套摘掉予以靜脈穿刺操作，成功穿刺后應用貼好的標簽負壓真空采集管采血，松開壓脈帶后囑咐患者松拳，用棉簽壓住進針部位并拔出針頭。（3）標本采集后處理。采血完成后囑咐患者應棉墊壓瘡穿刺部位，觀察幾分鐘若是無不適可自行離開。

1.3觀察指標

比較標本溶血前后的胰島素與C肽檢測結果。對0h、0.5h、1h、2h、3h的標本測定結果進行對比。對溶血或者時間因素干擾測定結果的情況進行評價，主要根據下面的共識評價溶血或者時間因素對于測定結果的影響：|F|=（X-X0）/X0。上式中的|F|表示溶血或者時間因素引起的誤差;X表示溶血標本或者放置一定時間待測物的濃度;X0為非溶血血清待測物濃度。如果|F|>0.10主要是表示溶血干擾客觀存在，而如果|F|<0.10則是表示溶血受輕微干擾，基本可以忽略不計。

1.4統計學方法

使用SPSS21.0軟件做統計學結果分析。計量資料用（x±s）表示，使用t檢驗;計數資料用[n（%）]表示，使用χ2檢驗，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1溶血前后標本檢測結果

采集的血液標本，在標本發生溶血后，可見血清胰島素與C肽檢測結果降低，溶血前后檢測結果比較，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2不同時間點檢測結果

對不同時間采集的未溶血標本，血清胰島素與C肽的檢測比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表2。

2.3不同時間段不同溶血標本胰島濃度

分析溶血程度與時間段的關系，顯示標本溶血會讓胰島素濃度降低，溶血程度越大、標本放置時間越長，胰島素濃度降低情況也更佳明顯，胰島素濃度測定同標本溶血程度、標本放置時間呈現負相關關系，見表3。

3討論

胰島素是一種多肽類物質，主要是在胰島β細胞中合成，分子量為5700，由兩條氨基酸肽鏈組成，胰島素是引起糖尿病的直接因子，主要是胰島素功能障礙可造成疾病發生及持續進展。胰島素能直接或者間接的影響機體每個組織的功能，在糖代謝中的作用多種多樣，包括抑制糖原分解以及糖異生，增加葡萄糖轉運到脂肪和肌肉，增強脂肪以及肌肉中糖酵解并且刺激糖原的合成;胰島素能明顯增強脂肪、肌肉以及肝臟等組織部位糖原合酶活性水平，通過增強湯酵解通路使得骨骼肌與脂肪組織中糖酵解速率提高[6]。此外胰島素也可以促進氨基酸轉運肝細胞、骨骼肌以及成纖維細胞，明顯增加核糖體數量以及翻譯效益，抑制蛋白質的分解[7]。C肽則是胰島素β細胞的分泌產物，同胰島素一樣存在共同前體胰島素原。胰島素前體可分解同等摩爾量的胰島素、C肽，測定C肽可以評估胰島β細胞的活性[8]。在胰島素與C肽的特征上，胰島素40%～50%是由肝臟滅活，半衰期大約是5min，對于C肽則不經過肝臟攝取但是卻經肝臟清除，C肽的半衰期在30min以上，同時在波動幅度上更，因此在一些特殊的情況下，檢測C肽更具有優勢。

胰島素與C肽的檢測對于評估糖尿病及判定療效有一定的價值。對胰島素、C肽的測定，主要是采取聯合釋放試驗，而在實際的檢測工作上發現，實際的測定過程中常容易出現溶血的情況[9]。在胰島素與C肽的試劑盒中就標明，若是標本存在溶血不能測定，需要重新進行標本的采集;放射免疫分析的方式報告時間長并且結果不穩定，并且還經常存在同位素污染的問題，這一檢測方式也趨于淘汰;酶聯免疫分析的方式雖然可以充分克服放射免疫分析中放射性污染的弊端，在使用的檢測設備上簡單以及操作安全，但是這種方式卻依賴比色法以及偏振光法測定技術，存在的缺陷如光度測定范圍廣、靈敏度低、容易遺漏等，這樣使得測定的方式在應用上受限[10]。電化學發光微粒免疫法則具有靈敏度高及特異性強的優點，檢測應用的試劑也具備良好穩定性，測定的范圍寬，儀器可以實現自動化，不會污染環境還可以消除常規熒光測定高背景的優點，屬于非放射免疫分析中的優勢測定方式[11]。本研究結果顯示，在應用電化學發光微粒免疫法測定糖尿病患者的胰島素與C肽上，溶血后在血清胰島素與C肽的檢測水平上明顯低于溶血前，而空腹及OGTT不同時間采集的血液標本，在胰島素與C肽的檢測結果上比較差異無統計學意義;根據溶血對檢測胰島素的影響，顯示溶血程度提供胰島素的測定值呈現負相關關系。這一結果表明溶血可造成胰島素與C肽測定結果偏低情況。分析原因主要是在標本出現溶血后，紅細胞膜破裂時胰島素降解酶釋放到血清中，高效的分解胰島素，隨著溶血程度的增加胰島素的檢測濃度也不斷降低[12]。而對于C肽而言，溶血對其水平的影響相關研究報道的結果不一，這主要同檢測方式、檢測儀器以及檢測試劑等因素相關。

考慮到標本溶血對胰島素與C肽測定結果的不良影響，應確保實驗室獲得合格的標本，便于及時、正確及有效的得出測定結果。首先是需要控制好標本采集的工作，按照規范進行采集，應加強對標本管理人員的培訓，具體培訓包括標本采集、標本處理及標本運送等，結合實際情況建立起完整規范的標本檢測前處理流程，提高標本的合格率，對于出現溶血的標本應建立退回制度。實際中對于出現靜脈條件差、多次靜脈穿刺等引起的標本溶血情況，需要對患者進行解釋，告知采血困難的基本情況，避免患者出現恐懼以及不配合的情況，順利的完成血液標本的采集。此外還需要正確分析溶血對檢測結果的影響，按照檢測的規范要求進行相關指標的測定，將測定的結果記錄下來。單個分析研究結果，在肉眼下可見標本溶血引起胰島素與C肽降低的情況，其中溶血對胰島素的測定結果影響更加明顯，這樣影響醫師的判斷。

綜上所述，標本溶血會影響電化學發光微粒免疫法測定血清胰島素與C肽的結果，原因主要在于溶血后紅細胞內降解酶存在，為避免對檢測結果的影響，可考慮嘗試在真空采血管內加胰島素酶抑制劑，以確保測定結果的準確性。

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（收稿日期：2021-09-19）