復褥方對大鼠皮膚刺激性和壓瘡創面局部病理改變的觀察

王窕 俸一然 劉晗 晏文娟 陸蕾

摘要：目的 對復褥方進行大鼠皮膚刺激性試驗并對大鼠壓瘡創面的局部病理改變進行觀察，評估其安全性。方法 （1）將大鼠隨機分為完整皮膚組和破損皮膚組，分別進行一次和多次給藥的皮膚刺激性實驗，觀察去除藥物后大鼠的皮膚反應情況。（2）將大鼠隨機分為4組，即正常組（A組）、模型組（B組）、紫蓮膏組（C組）、復褥方組（D組），除正常組外，其余3組制作大鼠壓瘡模型。造模成功后，在常規處理的基礎上，C組創面再涂紫蓮膏，D組創面再涂復褥方。每天2次，連續10 d。分別在給藥后第0、3、7、10 d后測量創面面積。末次給藥后處死大鼠，取創面組織進行HE染色。結果 （1）復褥方一次給藥對完整皮膚組無刺激，均未出現紅斑、水腫等現象，對破損皮膚組去藥1 h后有輕微刺激，表現為皮膚的輕微水腫，可自行消退，未再出現損傷現象。復褥方多次給藥對完整皮膚組、破損皮膚組均無刺激等現象。（2）與B組相比較，C組、D組創面面積均顯著縮小（P<0.01）;C組與D組比較，D組縮小面積優于C組（P<0.05）;C組和D組HE染色結果顯示炎性浸潤程度明顯減輕，新生肉芽組織明顯增多;C組與D組比較，D組炎性浸潤明顯減輕，新生肉芽組織明顯增多。結論 （1）復褥方單次使用對大鼠完整皮膚無刺激，對破損皮膚有輕微刺激，24h可自行消退;多次使用對大鼠完整皮膚、破損皮膚均無刺激，有較好的安全性。（2）復褥方具有促進大鼠壓瘡創面愈合和抗炎的作用，這可能是復褥方治療大鼠壓瘡的機制之一。

關鍵詞：復褥方;大鼠;皮膚刺激性;壓瘡創面;病理改變

中圖分類號：R285.5 文獻標志碼：A 文章編號：1007-2349（2022）04-0054-06

Observation on Local Pathological Changes of Skin Irritation and Pressure Ulcer Woundsin Rats by Compound Decubitus Prescription

WANG Tiao， FENG Yi-ran， LIN Han， YAN Wen-juan， LU Lei

（The First Affiliated Hospital of Kunming Medical University， Kunming 650032， China）

【Abstract】Objective： To make a skin irritation test of Compound Decubitus Prescription in rats and observe the local pathological changes of the pressure ulcer wounds in rats， and to evaluate its safety and efficacy. Methods： （1） The rats were randomly divided into an intact skin group and a damaged skin group. Skin irritation experiments were carried out for one and multiple administration respectively， and the skin reaction of the rats after removing the drug was observed. （2） The rats were randomly divided into 4 groups， namely， normal group （group A）， model group （group B）， purple lotus paste group （group C）， and Compound Decubitus Prescription group （group D）. The other three groups were used to make pressure ulcer models in rats. After successful modeling and on the basis of routine treatment， the wounds of group C were re-applied with purple lotus paste， and the wounds of group D were re-applied with Compound Decubitus Prescription， twice a day for 10 consecutive days. The wound area was measured at the 0， 3rd， 7th and 10th days after administration respectively. The rats were sacrificed after the last administration and their wound tissue was collected for HE staining. Results： （1） The Compound Decubitus Prescription group did not irritate the intact skin at one-time administration and no erythema and edema occurred. In the damaged skin group， there was slight irritation one hour after the drug was removed. No further damage occurred. The repeated administration of Compound Decubitus Prescription did not cause irritation to the intact skin group and the damaged skin group. （2） Compared with that of group B， the wound area of group C and group D was significantly reduced （P<0.01）; compared between group C and group D， the reduced area of group D was better than that of group C （P<0.05）. The results of HE staining in group C and group D showed that the degree of inflammatory infiltration was significantly reduced， and the new granulation tissue was significantly increased; compared with that in group C， the inflammatory infiltration in group D was significantly reduced， and the new granulation tissue was significantly increased. Conclusion： （1） The one-time use of Compound Decubitus Prescription has no irritation to the intact skin of rats， but has a slight irritation to the damaged skin， and it can subside on its own within 24 hours. The repeated use has no irritation to the intact skin and damaged skin of rats， with good effect and safety. （2） Compound Decubitus Prescription has the effect of promoting wound healing and anti-inflammatory effect of pressure ulcers in rats， which may be one of the mechanisms of Compound Decubitus Prescription in treating pressure ulcers in rats.

【Key words】Compound Decubitus Prescription; Rats; Skin Irritation; Pressure Ulcer Wounds; Pathological Changes

科室自研制劑復褥方由黃連、紫草、黃柏、生地、當歸、血竭、青黛等藥物組成[1-7]，用于臨床壓瘡的治療效果良好[8]。為進一步臨床推廣使用，筆者設計了復褥方對大鼠皮膚刺激性及壓瘡創面的實驗研究，觀察其局部給藥后對皮膚的刺激性及壓瘡創面局部的病理改變，為臨床用藥提供實驗數據和理論依據。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 藥品 復褥方，由昆明醫科大學第一附屬醫院制劑室提供。

1.2 動物及試劑 SD清潔級大鼠，72只，體重320～350 g，平均體重（300±20）g，雌雄各半，由昆明醫科大學動物中心提供，動物生產許可證號：SCXK（滇）k2015-0002。主要實驗試劑Sigma H3136的蘇木素、Sigma 230251的伊紅。

1.3 實驗方法

1.3.1 皮膚刺激性試驗 健康SD清潔級大鼠32只，常規飼養1周后，隨機分為4組，即完整皮膚組與破損皮膚組各2組，每組8只。給藥24h前，將大鼠背部脊柱兩側皮毛用脫毛劑脫毛，面積每側約5 cm×5 cm，去毛部位無皮膚損傷[9]。破損皮膚組的制作：大鼠脫毛區消毒，并用手術刀作#字狀劃破皮膚，刺傷表皮，不傷真皮，以滲血為度[10]。

1.3.1.1 一次性給藥實驗[11-12] 各取一組完整皮膚與破損皮膚組大鼠，將復褥方0.5 mL涂于每只大鼠左側脫毛區，覆蓋1層蠟紙和2層消毒紗布，用無刺激性紗布、膠布固定，右側脫毛區為對照區域。4h后用棉簽蘸生理鹽水輕柔洗凈藥物，觀察去除藥物后1、24、48、72 h大鼠皮膚刺激情況，參考相關文獻[13]，使用表1計算半定量評分，表2評估皮膚刺激程度。

1.3.1.2 多次給藥實驗[14] 給藥步驟與一次給藥相同，更改頻率為每天給藥2次，連續7 d。同樣觀察及評估去除藥物后1、24、48、72 h大鼠皮膚刺激情況。

1.3.1.3 評分標準 根據中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術指導原則[15]，以紅斑、水腫等為評價指標，如表1。刺激性分值=（紅斑反應總分+水腫反應總分）/每組動物數。根據刺激性分值判斷皮膚刺激性強度，如表2。

1.3.2 壓瘡創面病理改變

1.3.2.1 分組和動物造模 健康SD清潔級大鼠40只，常規飼養1周后，隨機分為4組，即正常組、模型組、紫蓮膏組、復褥方組，每組10只。除正常組外，其余3組參照Peirce[16]、Wasserman等[17]體內埋置鐵片加外用磁鐵加壓的造模方法制作大鼠壓瘡模型，以局部皮膚外觀和病理出現壓瘡病變為壓瘡模型復制成功。壓瘡面積為約2 cm×2 cm。

1.3.2.2 治療方法 模型組、紫蓮膏組、復褥方組采用2%碘酒及75%乙醇消毒壓瘡創面周圍皮膚，生理鹽水沖洗創面，干紗布塊擦干創面后，紫蓮膏組創面上涂滅菌的紫蓮膏0.5 mL，復褥方組創面上涂滅菌的復褥方0.5 mL。每天2次，連續10 d。分別在給藥后第0、3、7、10 d后測量創面面積。末次給藥后處死大鼠，取創面組織進行HE染色觀察壓瘡創面肉芽組織生長及愈合情況。

1.3.2.3 觀察指標 大鼠創面組織HE染色后病理切片鏡下觀察：

（1）創面修復面積。（2）成纖維細胞、白細胞、淋巴細胞浸潤情況。（3）血管微結構：血管內膜增生、血管充血、血管周圍水腫。

1.4 統計學方法 采用spss19.0統計軟件進行分析處理。數據以均數±標準差（x±s）表示;多個樣本均數之間比較采用單因素方差分析，不同時間點的比較采用重復測量方差分析，相關樣本先后比較采用t檢驗。認為P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 皮膚刺激實驗

2.1.1 復褥方一次性給藥的刺激性實驗結果 實驗結果如表3、圖1-2所示，復褥方一次性給藥對完整皮膚無紅斑、水腫等刺激表現，對去藥1 h后的破損皮膚表現為輕微刺激，部分皮膚可見輕微水腫，24 h自行消退。

2.1.2 復褥方多次給藥對大鼠皮膚的刺激性實驗結果 實驗結果如表4、圖3-4所示，復褥方多次給藥對完整皮膚、破損皮膚均無紅斑、水腫等刺激。

2.2 壓瘡創面病理改變

2.2.1 復褥方對大鼠壓瘡創面面積的影響 實驗結果如表5、圖5所示，復褥方組在給藥后第3 d開始壓瘡創面面積顯著減少（P<0.01）;紫蓮膏組在第7 d開始創面面積顯著減少（P<0.05）。10 d后，復褥方組創面皮膚完整，皮膚顏色與實驗前比較無顯著差別，紫蓮膏組創面仍有少量皮損，但與模型組相比創面明顯減小。

2.2.2 復褥方對大鼠壓瘡創面組織病理變化的影響 HE染色結果見表6～8及圖6，正常組表皮結構完整，真皮層內可見正常附屬器，結締組織間可見少量炎細胞浸潤。模型組鏡下顯示創面皮膚全層（表皮及真皮）壞死伴鈣化，未見肉芽組織。復褥方組鏡下顯示出現大量新生肉芽組織，炎性浸潤程度明顯減輕;紫蓮膏組鏡下顯示亦出現新生肉芽組織，炎性浸潤亦減輕，但與復褥方組相比，肉芽組織減少，炎細胞浸潤加重。

3 討論

壓瘡又稱壓力性潰瘍，由于身體局部長期受壓，組織持續性缺氧缺血，營養缺乏，皮膚失去正常功能，最終導致組織破損和壞死等一系列病變[18]。它在臨床上較為常見，常遷延難愈，不僅給患者造成痛苦，也會增加感染的風險，并給護理工作帶來了困難。

在復褥方的方藥組成中黃連、黃柏具有清熱燥濕、瀉火解毒功效[19-20]。紫草具有為清熱涼血、解毒透疹之功效[21]。當歸生肌斂瘡、排膿解毒[22]，青黛清熱瀉火、涼血解毒[23]，血竭活血化瘀、斂瘡生肌[24]。生地清營涼血[25]，諸藥合用，共奏清熱涼血，化瘀生新的功效，臨床上用于壓瘡等的治療，可促進皮膚創面愈合，在我院臨床推廣使用后反饋良好[8]。

皮膚刺激性是外用制劑最常見的不良反應，是皮膚接觸某些特定制劑后產生的局部可逆性損傷，皮膚刺激性試驗是外用人類健康相關制劑評價的項目之一[26]。

本研究通過皮膚刺激性試驗評價復褥方外用的安全性，通過復制大鼠壓瘡模型評價復褥方對大鼠壓瘡創面的修復效果，評價指標主要為創面修復的面積和病理學變化。實驗結果表明，復褥方單次使用可能對皮膚有輕微刺激，但24h可自行消退，而復褥方的長期使用對皮膚無刺激。對于大鼠壓瘡創面，復褥方組壓瘡創面面積顯著減少，炎性浸潤程度明顯減輕，新生肉芽組織明顯增多。因此復褥方制劑皮膚給藥具有較好的安全性，同時具有促進大鼠壓瘡創面愈合及抗炎的作用，這可能是復褥方治療大鼠壓瘡的機制之一，具體的機制需在今后的研究中進行進一步的觀察及評價。

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（收稿日期：2021-10-14）