前列腺癌組織前列腺特異性抗原、雄激素受體、嗜鉻粒蛋白A表達(dá)與Gleason分級(jí)的相關(guān)性

馮小蘭，黃喜健

[1.廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)院（廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院）病理科；2.廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)院（廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院）泌尿外科，廣西 南寧 530001]

前列腺癌是老年男性最常見的腫瘤疾病之一，其早期可以根治，但早期卻不易發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)移率較高，多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已發(fā)展為中晚期，采用內(nèi)分泌治療、化療、放療等均達(dá)不到完全治愈的效果，嚴(yán)重威脅男性的健康和生命，因此對(duì)前列腺癌患者提供有效的預(yù)后評(píng)估指標(biāo)是目前研究的熱點(diǎn)之一。目前前列腺癌病理評(píng)分采用的是Gleason評(píng)分系統(tǒng)，其從組織學(xué)角度評(píng)估患者的預(yù)后，主要根據(jù)腫瘤的生長(zhǎng)形態(tài)和腫瘤在間質(zhì)的浸潤(rùn)狀況作為分級(jí)依據(jù)，已成為制定前列腺癌治療方案和預(yù)后評(píng)估的重要參考指標(biāo)之一[1]。前列腺特異性抗原（PSA）篩查在全世界廣泛應(yīng)用，也是臨床醫(yī)師篩查前列腺癌患者的重要參考指標(biāo)，其高水平表達(dá)提示存在前列腺癌的可能；雄激素受體（AR）為雄激素依賴性轉(zhuǎn)錄因子，可介導(dǎo)依賴雄激素的細(xì)胞功能，是促進(jìn)前列腺癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵因素[2]；嗜鉻粒蛋白A（CgA）是神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞最特異性的標(biāo)志物，在雄激素缺乏的環(huán)境誘導(dǎo)下，前列腺癌細(xì)胞可以轉(zhuǎn)化為具有神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞樣功能的腫瘤細(xì)胞[3]。但目前關(guān)于PSA、AR、CgA在前列腺癌發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移中作用的報(bào)道有限。基于此，本研究旨在探討前列腺癌Gleason評(píng)分與前列腺癌病理組織PSA、AR、CgA表達(dá)的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2016年6月至2021年6月廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)院（廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院）收治的65例行經(jīng)尿道前列腺增生電切術(shù)且經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)為前列腺腺癌患者的臨床資料。患者年齡53～88歲，平均（73.62±6.32）歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)：符合《診斷病理學(xué)（第3版）》[4]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)腺體上皮細(xì)胞出現(xiàn)核間變（核增大、核漿比例增大、核不規(guī)則，出現(xiàn)明顯大核仁）、腺體結(jié)構(gòu)異常（腺體大小及輪廓不規(guī)則）、浸潤(rùn)性生長(zhǎng)及免疫組化抑癌基因P63、高分子細(xì)胞角蛋白（HCK）基底細(xì)胞染色缺失綜合判斷。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)者；病理診斷為前列腺腺泡性腺癌患者；有逐漸加重的排尿困難、尿頻、尿急等尿路梗阻癥狀或無痛性肉眼血尿或前列腺增大癥狀者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他原發(fā)性惡性腫瘤者；其他類型前列腺癌或轉(zhuǎn)移癌者；術(shù)前經(jīng)過相應(yīng)治療者等。本研究經(jīng)院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核并批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫組化染色方法 患者前列腺癌組織經(jīng)常規(guī)蘇木精‐伊紅染色及免疫組化染色。所有標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定，取材、脫水、包埋、連續(xù)4 μm厚切片4張，1張行蘇木精 -?伊紅染色，另3張分別行PSA、AR、CgA免疫組化染色。所有抗體均購自福州邁新公司，采用鏈霉菌抗生素蛋白 -?過陽化酶（SP）法進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，以已知陽性前列腺癌組織切片為陽性對(duì)照，磷酸鹽緩沖液（PBS）代一抗為陰性對(duì)照，按說明書進(jìn)行免疫組化染色步驟操作。

1.2.2 免疫組化結(jié)果判定 AR陽性著色定位于細(xì)胞核，PSA、CgA陽性著色定位于細(xì)胞質(zhì)，且陽性表達(dá)均為棕黃色顆粒。在400倍光學(xué)顯微鏡下，每張切片隨機(jī)觀察10個(gè)視野，按陽性細(xì)胞所占視野總細(xì)胞數(shù)量的百分比進(jìn)行分級(jí)：陽性細(xì)胞數(shù) ＜ 1%為陰性(-)；陽性細(xì)胞數(shù)1%～10%為弱陽性（+）；陽性細(xì)胞11%～50%為中度陽性（++）；陽性細(xì)胞≥ 51% 為強(qiáng)陽性（+++）[5‐6]。

1.2.3 病理Gleason評(píng)分 根據(jù)2014年國(guó)際泌尿病理協(xié)會(huì)（ISUP）共識(shí)會(huì)議前列腺癌分級(jí)分組標(biāo)準(zhǔn)[7]進(jìn)行病理分級(jí)，該分級(jí)系統(tǒng)將前列腺癌組織分為主要和次要分化程度，分化程度（生長(zhǎng)方式）從高分化（1級(jí)）到低分化（5級(jí)）共分為5級(jí)，分別為1～5分，Gleason總分=主要結(jié)構(gòu)類型（級(jí)別）+次要結(jié)構(gòu)類型（級(jí)別），總分2～10分。1級(jí)組Gleason評(píng)分≤ 6分，形態(tài)特點(diǎn)僅由單個(gè)分離的、形成良好的腺體組成；2級(jí)組Gleason評(píng)分3+4=7分，形態(tài)特點(diǎn)以形成良好的腺體為主，伴少量形成不良/融合/篩狀腺體；3級(jí)組Gleason評(píng)分4+3=7分，形態(tài)特點(diǎn)以形成不良/融合/篩狀腺體為主，伴少量形成良好的腺體；4級(jí)組Gleason評(píng)分4+4=8分，3+5=8分，5+3=8分，形態(tài)特點(diǎn)僅有形成不良/融合/篩狀腺體或以形成良好的腺體為主，伴少量缺乏腺樣分化的成分，或以缺乏腺樣分化的成分為主伴少量形成良好的腺體；5級(jí)組Gleason評(píng)分4+5=9分，5+4=9分，5+5=10分，形態(tài)特點(diǎn)缺乏腺體形成（或伴壞死），伴/不伴形成不良/融合/篩狀腺體，其中Gleason評(píng)分2～4分相當(dāng)于WHOⅠ級(jí)（高分化、低級(jí)別癌），Gleason評(píng)分5～7分相當(dāng)于WHOⅡ級(jí)（中分化癌），Gleason評(píng)分8～10分相當(dāng)于WHOⅢ級(jí)（低分化、高級(jí)別癌），但從治療和預(yù)后的角度，Gleason評(píng)分可劃分為4組：2～4分，5～6分，7分，8～10分。

1.3 觀察指標(biāo) ①前列腺癌Gleason評(píng)分結(jié)果。②分析前列腺癌Gleason評(píng)分與PSA陽性表達(dá)結(jié)果。③分析前列腺癌Gleason評(píng)分與AR陽性表達(dá)結(jié)果。④前列腺癌Gleason評(píng)分與CgA陽性表達(dá)結(jié)果。⑤免疫組化染色觀察典型病例前列腺癌組織PSA、AR、CgA陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，雙向有序等級(jí)資料以（例）表示，采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman一致性檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)意義。

2 結(jié)果

2.1 前列腺癌Gleason評(píng)分 65例前列腺癌患者按照Gleason評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)分別分為5～6分（1級(jí)組）10例，7分（2、3級(jí)組）30例，8～10分（4、5級(jí)組）25例。

2.2 前列腺癌Gleason評(píng)分與PSA陽性表達(dá)的相關(guān)性65例前列腺癌患者病理組織標(biāo)本經(jīng)免疫組化染色顯示，PSA陽性表達(dá)率為84.62%（55/65），表達(dá)強(qiáng)度以+～++為主，與Gleason評(píng)分呈負(fù)相關(guān)性（r= -0.627），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 前列腺癌Gleason分級(jí)與免疫組化PSA的表達(dá)結(jié)果

2.3 前列腺癌Gleason評(píng)分與AR陽性表達(dá)的相關(guān)性65例前列腺癌患者病理組織標(biāo)本經(jīng)免疫組化染色顯示，AR陽性表達(dá)率為83.08%（54/65），表達(dá)強(qiáng)度以+～++為主，與Gleason評(píng)分呈負(fù)相關(guān)性（r= -0.602），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 前列腺癌Gleason分級(jí)與免疫組化AR的表達(dá)結(jié)果

2.4 前列腺癌Gleason評(píng)分與CgA陽性表達(dá)的相關(guān)性65例前列腺癌患者病理組織標(biāo)本經(jīng)免疫組化染色顯示，CgA陽性表達(dá)率為26.15%（17/65），表達(dá)強(qiáng)度以-～+為主，與Gleason評(píng)分呈正相關(guān)性（r= 0.382），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表 3。

2.5 PSA、AR、CgA蛋白在前列腺癌組織中的陽性表達(dá)情況 Gleason評(píng)分為8分的患者PSA（+++）標(biāo)本中可見PSA陽性信號(hào)呈棕黃色，定位于腺體上皮細(xì)胞胞質(zhì)，陽性細(xì)胞≥ 51%，見圖1‐A。Gleason評(píng)分為8分的患者AR（+++）標(biāo)本中可見AR陽性信號(hào)呈棕黃色，定位于腺體上皮細(xì)胞胞核，陽性細(xì)胞≥ 51%，見圖1‐B。Gleason評(píng)分為10分的患者CgA（++）陽性信號(hào)呈棕黃色，定位于腺體上皮細(xì)胞胞質(zhì)，陽性細(xì)胞11% ～ 50%，見圖1‐C。

圖1 Gleason評(píng)分為8～10分的前列腺癌患者病理組織PSA、AR、CgA免疫組化染色（×200）

3 討論

前列腺癌是發(fā)生于前列腺上皮的惡性腫瘤，好發(fā)于前列腺外周帶，其病灶侵襲性有較大的差異，中高危險(xiǎn)性前列腺癌侵襲性較大，病情可在短期內(nèi)迅速進(jìn)展，需及時(shí)進(jìn)行內(nèi)分泌或手術(shù)等有效治療措施；而低危前列腺癌侵襲性相對(duì)較小，對(duì)于高齡或生命時(shí)間較短的患者而言，可能只需進(jìn)行常規(guī)隨訪、檢測(cè)即可[8]。前列腺癌的Gleason評(píng)分是目前前列腺癌最有效的預(yù)后評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于未接受放化療、前列腺根治術(shù)或其他物理、新輔助治療的患者而言，其可以預(yù)測(cè)手術(shù)后局部復(fù)發(fā)以及淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的發(fā)生率[9]。

前列腺組織的腺體上皮由分泌細(xì)胞、基底細(xì)胞、少量的神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞及干細(xì)胞等組成。PSA由成熟的前列腺腺上皮中已分化的上皮細(xì)胞產(chǎn)生，是前列腺分泌細(xì)胞在雄性激素刺激下分泌的一種酶，通常定位于前列腺腺泡和導(dǎo)管，具有組織特異性。正常生理情況下，富含PSA的前列腺腺泡內(nèi)容物與淋巴系統(tǒng)之間存在由內(nèi)皮層、基底細(xì)胞層和基底膜構(gòu)成的屏障相隔，但當(dāng)患前列腺癌時(shí)，腫瘤細(xì)胞異常增殖，使得屏障受到破壞，PSA滲透到血液中，引起血液中PSA升高，而組織中原位PSA含量降低，因而高水平血清PSA往往提示前列腺癌，且Gleason評(píng)分越高，危險(xiǎn)度越大[10]。本研究結(jié)果顯示，在Gleason評(píng)分為5～6分時(shí)，PSA陽性表達(dá)率為100.00%，均為（++） ～ （+++）表達(dá)；Gleason評(píng)分為7分時(shí)，PSA陽性表達(dá)率為100.00%，其中18 例（++） ～ （+++）表達(dá)；Gleason 評(píng)分為 8～10 分時(shí)，PSA陽性表達(dá)率60.00%，其中5例表達(dá)（++）～（+++），提示PSA陽性表達(dá)率及陽性表達(dá)強(qiáng)度隨著Gleason評(píng)分的升高而減弱，兩者呈負(fù)相關(guān)。楊明濤等[11]研究PSA在前列腺癌組織不同分級(jí)和分期的表達(dá)中發(fā)現(xiàn)，PSA表達(dá)與前列腺癌的病理分級(jí)有一定相關(guān)性，低分化組的表達(dá)比高分化組和中分化組均低；但也有研究認(rèn)為，PSA表達(dá)與Gleason評(píng)分無明顯相關(guān)性[12]。本研究認(rèn)為，在Gleason評(píng)分5～6、7分時(shí)，分化良好的腺體增多，癌細(xì)胞分泌PSA能力強(qiáng)，隨著前列腺癌病理分級(jí)的升高，腫瘤組織結(jié)構(gòu)中分化良好腺體減少，則癌細(xì)胞分泌PSA的能力下降，PSA表達(dá)陽性率及強(qiáng)度與Gleason評(píng)分呈負(fù)相關(guān)。

前列腺腺癌來源于泌尿生殖道上皮，屬于雄激素依賴性疾病，雄激素生物學(xué)活性是由細(xì)胞內(nèi)受體（核受體）介導(dǎo)的，無論睪酮還是雙氧睪酮均以AR為有效配基而發(fā)揮作用，AR在前列腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞中均有表達(dá)[13]。AR屬于甾體激素核受體，是一種雄激素依賴性轉(zhuǎn)錄因子，可調(diào)節(jié)基因使細(xì)胞增殖和分化，其在前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，是雄激素代謝和發(fā)揮作用過程的中心環(huán)節(jié)之一[14]。本研究結(jié)果顯示，在Gleason評(píng)分為5～6分時(shí)，AR陽性表達(dá)率為100.00%，均為（++） ～ （+++）表達(dá)；Gleason評(píng)分7分時(shí)，AR陽性表達(dá)率為100.00%，其中18例強(qiáng)陽性表達(dá)（++） ～ （+++）；Gleason 評(píng)分 8～10 分時(shí)，AR陽性表達(dá)率56.00%，其中6例表達(dá)（++） ～ （+++），表明AR陽性表達(dá)率及陽性表達(dá)強(qiáng)度隨著Gleason評(píng)分升高而減弱，兩者呈負(fù)相關(guān)。分析其原因?yàn)椋谠缙陔A段，幾乎所有的前列腺腺癌上皮細(xì)胞都存在AR表達(dá)，而當(dāng)發(fā)展到晚期時(shí)，前列腺癌細(xì)胞自身可合成AR激動(dòng)劑或雄激素來進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，從而失去了對(duì)AR的表達(dá)，因此，隨著Gleason評(píng)分增高分化程度降低，AR陽性率下降，這可能與功能性的雄激素受體丟失有關(guān)[15]。國(guó)內(nèi)有學(xué)者研究AR在前列腺癌不同分級(jí)分組組織中的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，AR在高分化前列腺癌中高表達(dá)[16]，與本研究結(jié)果類似。

CgA是正常神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分泌的一種酸性糖蛋白顆粒，正常前列腺組中神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞較少，但在雄激素缺乏的環(huán)境誘導(dǎo)下可促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化為具有神經(jīng)分泌功能樣功能的癌細(xì)胞。近年來，前列腺癌的神經(jīng)內(nèi)分泌轉(zhuǎn)化機(jī)制受到關(guān)注，前列腺癌的神經(jīng)內(nèi)分泌轉(zhuǎn)化可表現(xiàn)為未治療的原發(fā)現(xiàn)象或治療后的去勢(shì)抵抗性前列腺癌[17]。本研究結(jié)果顯示，在Gleason評(píng)分5～6分時(shí)，CgA無陽性表達(dá)；Gleason評(píng)分7分時(shí)，CgA陽性表達(dá)率16.70%；Gleason評(píng)分8～10分時(shí)，CgA陽性表達(dá)率為48.00%，表明CgA陽性表達(dá)率及陽性表達(dá)強(qiáng)度隨著Gleason評(píng)分升高而增強(qiáng)，兩者呈正相關(guān)。有學(xué)者在前列腺癌穿刺標(biāo)本及術(shù)后隨訪病例中發(fā)現(xiàn)，CgA表達(dá)水平隨著Gleason評(píng)分及臨床分期升高而逐漸升高[18]。因此CgA可應(yīng)用于前列腺癌的診斷，可作為前列腺癌治療預(yù)后的判斷指標(biāo)，隨著前列腺臨床分級(jí)和分期增高，CgA陽性表達(dá)率明顯提高，前列腺癌的分化程度越低越易出現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)分泌分化。未來隨著人們對(duì)神經(jīng)內(nèi)分泌分化機(jī)制和起源的深入研究，明確可以預(yù)防或逆轉(zhuǎn)神經(jīng)內(nèi)分泌分化的信號(hào)通路，將為提高前列腺癌患者的生存率和生活質(zhì)量提供廣泛的前景。

綜上，PSA、AR表達(dá)陽性率及強(qiáng)度隨著Gleason評(píng)分的升高而減弱，呈負(fù)相關(guān)，而CgA表達(dá)陽性率及強(qiáng)度隨著Gleason評(píng)分升高而增強(qiáng)，呈正相關(guān)，PSA、AR、CgA可用于前列腺癌的診斷和預(yù)后預(yù)測(cè)，值得臨床進(jìn)一步研究。