先兆流產(chǎn)患者相關(guān)細(xì)胞因子水平與陰道微生態(tài)菌群分布的關(guān)系研究

王 麗

（成都雙楠醫(yī)院婦科，四川 成都 610047）

先兆流產(chǎn)的臨床表現(xiàn)多為陰道流血、下腹疼痛等，若未能予以及時有效的治療，則可隨著病情進展，導(dǎo)致患者出現(xiàn)流產(chǎn)，引發(fā)不良妊娠結(jié)局，嚴(yán)重威脅女性的身體健康與家庭幸福。相關(guān)研究報道，先兆流產(chǎn)的發(fā)生可與多種因素有關(guān)，如母體免疫內(nèi)分泌調(diào)控失調(diào)是其中一種較為重要的原因，而腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-4（IL-4）、白細(xì)胞介素-22（IL-22）、白細(xì)胞介素-23（IL-23）作為免疫內(nèi)分泌調(diào)控因子，其水平異常時可介導(dǎo)機體免疫環(huán)境的失衡，進而影響妊娠結(jié)局；同時，正常妊娠情況下，女性陰道中存在著不同種類與數(shù)量的微生物，其可與環(huán)境、宿主之間形成良好的動態(tài)平衡關(guān)系，但當(dāng)妊娠期陰道內(nèi)菌群發(fā)生失衡時，會導(dǎo)致各種陰道感染，進而引發(fā)流產(chǎn)、早產(chǎn)、胎膜早破等不良妊娠結(jié)局[1-2]。基于此，本研究旨在探討先兆流產(chǎn)患者相關(guān)細(xì)胞因子水平與陰道微生態(tài)菌群分布的關(guān)系，以期臨床防治提供一定的指導(dǎo)與依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2018年9月至2021年9月成都雙楠醫(yī)院收治的50例先兆流產(chǎn)患者的臨床資料，將其作為先兆流產(chǎn)組，另回顧性分析同期進行體檢的50例健康孕婦的體檢資料，將其作為健康組。其中先兆流產(chǎn)組患者年齡20～40歲，平均（27.85±5.53）歲；孕周4～19周，平均（12.38±3.36）周；流產(chǎn)次數(shù)0～2次，平均（1.23±0.16）次；初產(chǎn)婦28例，經(jīng)產(chǎn)婦22例。健康組研究對象年齡19～40歲，平均（27.36±5.86）歲；孕周5～19周，平均（12.56±3.48）周；流產(chǎn)次數(shù)0～3次，平均（1.26±0.22）次；初產(chǎn)婦27例，經(jīng)產(chǎn)婦23例。兩組研究對象年齡、孕周、流產(chǎn)次數(shù)等一般資料經(jīng)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），組間具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：先兆流產(chǎn)組患者均符合《婦產(chǎn)科臨床指南》[3]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)臨床檢查確診；伴有陰道流血、下腹疼痛等癥狀者；無其他婦科疾病者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：非免疫因素導(dǎo)致的先兆流產(chǎn)者；伴有嚴(yán)重肝、腎等功能疾病者；有內(nèi)分泌代謝疾病者；近2個月服用抗生素或激素類藥物者；有凝血功能障礙者；感染性疾病者等。本研究經(jīng)成都雙楠醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)通過。

1.2 檢測方法 于先兆流產(chǎn)組患者入院時與健康組孕婦體檢時，分別采集其陰道內(nèi)分泌物，置于無菌管內(nèi)，緩沖液震蕩懸浮，并進行離心（12 000 r/min，5 min），得到下層沉淀，提取細(xì)菌DNA，使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）法進行擴增細(xì)菌DNA并純化產(chǎn)物，使用基因測序儀（因美納股份有限公司，型號：NextSeq 550）在97%相似水平下對所有序列進行操作分類單元歸類，并根據(jù)操作分類單元歸類對菌群物種間的親緣關(guān)系和物種間的差異進行分析，獲得菌群分類和菌群相對豐度。于先兆流產(chǎn)組患者入院時與健康組孕婦體檢時采集空腹靜脈血5 mL，以3 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min取上層血清，使用酶聯(lián)免疫吸附實驗法檢測血清 TNF-α、IL-2、IL-4、IL-22、IL-23 水平。

1.3 觀察指標(biāo) ①比較健康組和先兆流產(chǎn)組研究對象的陰道微生物菌群門水平相對豐度。②比較健康組和先兆流產(chǎn)組研究對象的陰道微生物菌群屬水平相對豐度。③比較健康組和先兆流產(chǎn)組研究對象血清TNF-α、IL-2、IL-4、IL-22、IL-23 水平。④分析血清 TNF-α、IL-2、IL-4、IL-22、IL-23水平與陰道微生態(tài)菌群相對豐度的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料以(±s)表示，行t檢驗。使用Pearson相關(guān)系數(shù)法分析血清 TNF-α、IL-2、IL-4、IL-22、IL-23 水平與陰道微生態(tài)菌群相對豐度的相關(guān)性。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 健康組和先兆流產(chǎn)組研究對象陰道微生物菌群門水平相對豐度 與健康組比，先兆流產(chǎn)組患者厚壁菌門、梭桿菌門的相對豐度均顯著降低，放線菌門、變形菌門、擬桿菌門的相對豐度均顯著升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表 1。

表1 健康組和先兆流產(chǎn)組研究對象陰道微生物菌群門相對豐度比較( ±s, %)

表1 健康組和先兆流產(chǎn)組研究對象陰道微生物菌群門相對豐度比較( ±s, %)

組別 例數(shù) 厚壁菌門 放線菌門 變形菌門 擬桿菌門 梭桿菌門健康組 50 82.68±7.24 7.28±2.35 3.81±0.62 1.96±0.36 2.69±0.18先兆流產(chǎn)組 50 60.36±7.55 21.34±2.59 10.18±2.44 6.11±0.55 0.42±0.16 t值 15.088 28.428 17.892 44.642 66.649 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.2 健康組和先兆流產(chǎn)組研究對象陰道微生物菌群屬水平相對豐度 與健康組比，先兆流產(chǎn)組患者乳酸桿菌屬的相對豐度顯著降低，加德納菌屬、奇異菌屬、普氏菌屬的相對豐度均顯著升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）；而兩組研究對象鏈球菌屬、梭桿菌屬的相對豐度經(jīng)比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），見表2。

表2 健康組和先兆流產(chǎn)組研究對象陰道微生物菌群屬相對豐度比較( ±s, %)

表2 健康組和先兆流產(chǎn)組研究對象陰道微生物菌群屬相對豐度比較( ±s, %)

組別 例數(shù) 乳酸桿菌屬 加德納菌屬 鏈球菌屬 奇異菌屬 普氏菌屬 梭桿菌屬健康組 50 72.62±8.23 12.25±2.32 8.36±2.64 1.96±0.34 1.64±0.38 0.23±0.06先兆流產(chǎn)組 50 56.37±7.52 24.38±2.54 7.98±2.47 7.15±1.32 3.19±0.45 0.22±0.07 t值 10.307 24.933 0.743 26.923 18.609 0.767 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＞0.05

2.3 健康組和先兆流產(chǎn)組研究對象血清TNF-α、IL-2、IL-4、IL-22、IL-23水平 與健康組比，先兆流產(chǎn)組患者血清 TNF-α、IL-2、IL-22、IL-23水平均顯著升高，血清 IL-4水平顯著降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表3。

表3 健康組和先兆流產(chǎn)組研究對象血清TNF-α、IL-2、IL-4、IL-22、IL-23水平比較( ±s)

表3 健康組和先兆流產(chǎn)組研究對象血清TNF-α、IL-2、IL-4、IL-22、IL-23水平比較( ±s)

注：TNF-α：腫瘤壞死因子-α；IL-2：白細(xì)胞介素-2；IL-4：白細(xì)胞介素-4；IL-22：白細(xì)胞介素-22；IL-23：白細(xì)胞介素-23。

組別 例數(shù) TNF-α(pg/mL) IL-2(pg/mL) IL-4(pg/mL) IL-22(ng/L) IL-23(ng/L)健康組 50 80.56±12.38 133.48±10.62 42.52±5.26 99.62±10.76 34.98±4.65先兆流產(chǎn)組 50 117.62±12.57 215.25±21.35 20.45±3.63 132.24±12.68 52.87±6.36 t值 14.853 24.248 24.419 13.870 16.056 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.4 相關(guān)性分析 血清 TNF-α、IL-2、IL-22、IL-23 水平分別與厚壁菌門、梭桿菌門、乳酸桿菌屬門的相對豐度均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.458、-0.685、-0.542、-0.658、-0.559、-0.448、-0.647、-0.623、-0.527、-0.555、-0.624、-0.666），與放線菌門、變形菌門、擬桿菌門、加德納菌屬、奇異菌屬、普氏菌屬的相對豐度均呈正相關(guān)（r= 0.647、0.588、0.539、0.528、0.572、0.556、0.586、0.594、0.635、0.569、0.647、0.685、0.654、0.652、0.678、0.663、0.641、0.632、0.628、0.721、0.752、0.645、0.752、0.725）；血清IL-4水平分別與厚壁菌門、梭桿菌門、乳酸桿菌屬的相對豐度均呈正相關(guān)（r= 0.636、0.634、0.678），與放線菌門、變形菌門、擬桿菌門、加德納菌屬、奇異菌屬、普氏菌屬的相對豐度均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.485、-0.456、-0.596、-0.697、-0.735、-0.789），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表4。

表4 血清TNF-α、IL-2、IL-4、IL-22、IL-23水平與陰道微生態(tài)菌群相對豐度的相關(guān)性

3 討論

先兆流產(chǎn)主要是指孕婦在妊娠早期出現(xiàn)陰道出血、腹痛及腰酸等表現(xiàn)的一種疾病，該疾病誘發(fā)因素相當(dāng)復(fù)雜，包括遺傳因素、免疫排斥因素、解剖因素、內(nèi)分泌因素、感染、環(huán)境因素等，若得不到及時有效治療，陰道出血時間長，極易引起宮腔感染，從而影響胎兒的生長發(fā)育，甚至?xí)?dǎo)致流產(chǎn)[4]。因此，通過分析先兆流產(chǎn)患者病情變化相關(guān)的生物學(xué)指標(biāo)，以得出早期診斷結(jié)果，對患者后期防治具有非常重要的指導(dǎo)意義。

女性陰道與外界相通的腔道內(nèi)存在數(shù)量龐大的不同種類微生物，正常情況下陰道微生態(tài)對病原體的侵入有自然的防御功能且能營造良好的妊娠環(huán)境。多種微生物菌群參與陰道微生態(tài)平衡，臨床研究中主要從菌群的優(yōu)勢種類、菌群密集度、菌群的多樣性、機體內(nèi)炎癥反應(yīng)及病原菌來判斷陰道微生態(tài)的情況，一定程度上能夠反映微生態(tài)演變和疾病的關(guān)系，其中乳酸桿菌是陰道菌群中的益生菌，通過調(diào)節(jié)機體免疫功能維持陰道酸性環(huán)境，而加德納菌屬、奇異菌屬及普氏菌屬是陰道中的致病菌，這些致病菌過度繁殖，容易導(dǎo)致流產(chǎn)、早產(chǎn)及胎膜早破等不良結(jié)局[5]。本研究中，先兆流產(chǎn)組患者厚壁菌門、梭桿菌門、乳酸桿菌屬的相對豐度均顯著降低，放線菌門、變形菌門、擬桿菌門、加德納菌屬、奇異菌屬、普氏菌屬的相對豐度均顯著升高，提示機體的陰道微生態(tài)菌群分布穩(wěn)態(tài)被破壞，使得致病菌比例增加，進而誘發(fā)多種疾病發(fā)生，影響胎兒的發(fā)育，提高先兆流產(chǎn)發(fā)生率。

血清TNF-α、IL-2、IL-4、IL-22、IL-23可用于反映機體的免疫內(nèi)分泌調(diào)控情況，其中血清TNF-α是一種促炎細(xì)胞因子，其主要來源于巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞，可參與機體的炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)過程，故其水平升高可提示機體的炎癥反應(yīng)加劇，免疫功能失調(diào)，進而不利于胚胎的生長、發(fā)育，易引發(fā)先兆流產(chǎn)[6]；IL-2是一種調(diào)節(jié)免疫因子，主要來源于CD4+細(xì)胞，其在正常水平下，可誘導(dǎo)、激活免疫網(wǎng)絡(luò)中的相關(guān)細(xì)胞，以發(fā)揮免疫應(yīng)答效應(yīng)，進而調(diào)節(jié)免疫功能，但其水平過高時，可促使機體發(fā)生排斥反應(yīng)，進而損傷胎盤細(xì)胞的分化和生長，不利于胚胎發(fā)育，易發(fā)生先兆流產(chǎn)[7]；IL-4主要來源于單核細(xì)胞、活化的T細(xì)胞等，其可介導(dǎo)B細(xì)胞增殖抗體生成，參與機體的體液免疫與適應(yīng)性免疫過程，進而在其中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，故其水平降低可提示患者的免疫內(nèi)分泌失調(diào)，進而增加先兆流產(chǎn)發(fā)生的風(fēng)險[8]；IL-22主要來源于CD4+T細(xì)胞亞群，其可參與機體的免疫炎癥反應(yīng)，當(dāng)其水平升高時，機體的免疫調(diào)節(jié)平衡發(fā)生失調(diào)，使得母體胎盤的免疫排斥反應(yīng)增強，免疫抑制作用減弱，進而誘發(fā)先兆流產(chǎn)發(fā)生；IL-23是一種促炎細(xì)胞因子，主要來源于抗原提呈細(xì)胞，其可誘導(dǎo)機體分泌、合成大量的炎性因子，加快炎癥反應(yīng)進程，并激活細(xì)胞免疫反應(yīng)，故其水平升高時，易使機體胚胎造成排斥反應(yīng)，從而導(dǎo)致先兆流產(chǎn)發(fā)生[9]。本研究結(jié)果顯示，與健康組相比，先兆流產(chǎn)組患者血清TNF-α、IL-2、IL-22、IL-23水平均顯著升高，血清IL-4水平均顯著降低，提示免疫細(xì)胞因子不僅具有免疫殺傷作用，能介導(dǎo)細(xì)胞免疫，調(diào)節(jié)相關(guān)的炎癥反應(yīng)，抑制胚胎著床、滋養(yǎng)細(xì)胞生長和胚胎發(fā)育，引發(fā)不良妊娠結(jié)局，還能刺激B 淋巴細(xì)胞增殖，產(chǎn)生抗體，調(diào)節(jié)體液免疫，維持正常妊娠，因此免疫細(xì)胞因子平衡對于維持正常妊娠起著重要的核心作用。

當(dāng)妊娠期婦女陰道的微生態(tài)菌群失調(diào)時，可導(dǎo)致致病菌大量的繁殖，并合成、分泌內(nèi)毒素，進而促使免疫調(diào)節(jié)因子、炎性因子大量釋放，促進環(huán)氧化酶和磷脂酶水平升高，從而增加宮縮力，升高宮腔內(nèi)壓力，造成先兆流產(chǎn)發(fā)生[10]。本研究中，血清TNF-α、IL-2、IL-22、IL-23水平分別與厚壁菌門、梭桿菌門、乳酸桿菌屬門的相對豐度均呈負(fù)相關(guān)，與放線菌門、變形菌門、擬桿菌門、加德納菌屬、奇異菌屬、普氏菌屬的相對豐度均呈正相關(guān)，而血清IL-4水平分別與厚壁菌門、梭桿菌門、乳酸桿菌屬的相對豐度均呈正相關(guān)，與放線菌門、變形菌門、擬桿菌門、加德納菌屬、奇異菌屬、普氏菌屬的相對豐度均呈負(fù)相關(guān)，提示先兆流產(chǎn)患者陰道微生物菌群分布紊亂可能會導(dǎo)致相關(guān)細(xì)胞因子水平失調(diào)，與熊文棟等[11]研究結(jié)果基本相符。

綜上，血清TNF-α、IL-2、IL-22、IL-23、IL-4水平與陰道微生態(tài)菌群相對豐度均可檢測先兆流產(chǎn)的發(fā)生情況，且其陰道微生物菌群分布紊亂可能會導(dǎo)致相關(guān)細(xì)胞因子水平失調(diào)，因此可通過調(diào)節(jié)陰道微生物菌群相對豐度與上述相關(guān)細(xì)胞因子水平，為疾病的防治策略提供依據(jù)。