免疫組化在鑒別甲狀腺乳頭狀癌與甲狀腺良性病變的應用

李成之，李紅全，周燦宦

（臺山市人民醫院 病理科，廣東 臺山 529200）

0 引言

目前，對于甲狀腺腫瘤的檢查主要通過細針穿刺細胞學活檢（FNAB）、核素顯像、超聲、觸診等檢查，其中評估甲狀腺良惡性結節初步診斷的重要檢查為細針穿刺細胞學活檢，但臨床對于病理檢查評估甲狀腺結節的性質判斷仍然具有一定的難度，主要源于甲狀腺良性病變和某些類型的甲狀腺癌的細胞形態學特征具有重疊性[1]。研究表明，對于甲狀腺惡性腫瘤的診斷可應用免疫組化方式檢測其57種甲狀腺癌分子標志物，包括CK19、HBME-1、Galectin-3等[2]。本研究選擇甲狀腺乳頭狀癌與良性甲狀腺病變，免疫組化分析其CK19、HBME-1、Galectin-3陽性表達情況，現報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

臨床選擇2019年4月-2020年2月在本院接受診治的甲狀腺乳頭狀癌40例為觀察組，甲狀腺良性乳頭狀病變40例為對照組，納入標準：符合世界衛生組織制定的甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺良性乳頭狀病變的診斷標準[3]；經臨床實驗室檢查、病理檢查、影像學資料明確診斷。全部研究對象均簽署知情同意協議，經本院醫學倫理委員會審批通過。其中觀察組甲狀腺乳頭狀癌中微小乳頭狀癌12例，濾泡型乳頭狀癌10例，經典乳頭狀癌18例；其中男14例，女26例，年齡25～69歲，平均（54.2±0.6）歲；甲狀腺良性乳頭狀病變中慢性淋巴細胞性甲狀腺炎10例，甲狀腺腺瘤6例，結節性甲狀腺腫24例；其中男13例，女27例，年齡25～69歲，平均（54.1±0.7）歲，兩組的平均年齡、性別等臨床資料大體一致（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

免疫組化分析兩組研究對象的間皮瘤抗原-1（HBNE-1）、細胞角蛋白19（CK19）、半乳糖凝集素（Galectin-2，Gal-3）等分子標記物的陽性表達情況；切片預處理：二甲苯脫蠟全部甲狀腺標本石蠟切片，酒精梯度水化；修復抗原：HBME-1無需處理，CK19：在PBS緩沖液內加入胰蛋白酶1mg/mL，加入石蠟切片，消化15min；Gal-3：在檸檬酸緩沖液內（PH6.0、10mm）煮石蠟切片20min，20min室溫冷卻；染色：染色：PBS沖洗2次，2min/次；加一抗，置于室溫下1h；PBS液沖洗三次，2min/次；加檢測試劑1滴，室溫放置半小時，PBS液沖洗三次，2min/次；DAB顯色10min；蘇木素復染，脫水，封片。

1.3 試劑與儀器

德國Leica Bond-max全自動免疫組化染色機，德國Leica235切片機，上海長島生物技術有限公司生產的HBME-1、CK19、Gal-3鼠抗人單克隆抗體。

1.4 結果評估標準

HBNE-1、CK19、Galectin-2細胞漿內產生棕黃色顆粒，染色強度評分標準：3分-棕褐色、2分-棕黃色、1分-淡黃色、0分-無著色。陽性分布范圍計分：4分（＞75%）、3分（51%～75%）、2分（26%～50%）、1分（5%～25%）、0分（＜5%）。二者相乘，強陽性（+++）：6分、中等陽性（++）：3～6分、弱陽性（+）：1～2分、陰性（-）：0分[4]。

1.5 統計學處理分析

全部數據傳輸至SPSS21.0軟件系統統計處理分析，計數資料為卡方檢驗，用n（%）表示，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺良性病變中分子標記物陽性表達情況分析

觀察組的間皮瘤抗原-1（HBNE-1）、細胞角蛋白19（CK19）、半乳糖凝集素（Galectin-2，Gal-3）等分子標記物的陽性表達情況顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺良性病變中分子標記物陽性表達情況分析[n(%)]

2.2 不同病理類型的甲狀腺乳頭狀癌分子標記物陽性表達情況分析

經典型甲狀腺乳頭狀癌、濾泡型甲狀腺乳頭狀癌、微小型甲狀腺乳頭狀癌的HBNE-1、CK19、Galectin-3 陽性表達比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同病理類型的甲狀腺乳頭狀癌分子標記物陽性表達情況分析[n(%)]

2.3 甲狀腺良性病變分子標記物陽性表達情況分析

慢性淋巴細胞性甲狀腺炎10例，甲狀腺腺瘤6例，結節性甲狀腺腫24例的HBNE-1、CK19、Galectin-3陽性表達比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表3。見圖1～4。

表3 甲狀腺良性病變分子標記物陽性表達情況分析[n(%)]

3 討論

本研究觀察甲狀腺良性病變和甲狀腺乳頭狀癌進行免疫組化法的臨床鑒別診斷價值研究，結果顯示：觀察組的間皮瘤抗原-1（HBNE-1）、細胞角蛋白19（CK19）、半乳糖凝集素（Galectin-2，Gal-3）等分子標記物的陽性表達情況顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；經典型甲狀腺乳頭狀癌、濾泡型甲狀腺乳頭狀癌、微小型甲狀腺乳頭狀癌的HBNE-1、CK19、Galectin-3陽性表達比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；慢性淋巴細胞性甲狀腺炎10例，甲狀腺腺瘤6例，結節性甲狀腺腫24例的HBNE-1、CK19、Galectin-3陽性表達比較，差異無統計學意義（P＞0.05），與陳亮等[5]的研究結果大體一致，本研究發現，經典甲狀腺乳頭狀癌的HE染色發現，前哨淋巴結出現轉移（見圖1）。Gal-3是凝集素和β-半乳糖苷酶相結合家族的一種，對正常細胞的凋亡及增殖起到調節作用[6-7]，同時參與腫瘤細胞的轉移和惡性轉化活動，見圖3。研究表明，在甲狀腺濾泡細胞中表達過度可引發細胞表型的改變[8-9]，細胞失去接觸抑制，增殖具有獨立性，說明Gal-3是潛在性的腫瘤轉移性標志物，腫瘤細胞株可通過siRNA沉默促使Gal-3表達下降，細胞凋亡進行誘導。細胞角蛋白是構成細胞骨架的一種中間絲狀物[10-11]，細胞癌變時CK19釋放增高，與CK19的DNA基因組變化密切相關（見圖2）。而HBME-1是惡性間皮瘤細胞表面微絨毛成分[12-13]，在甲狀腺惡性腫瘤中呈強陽性表達狀態，是診斷甲狀腺乳頭狀癌的敏感分子標志物之一[14-15]（見圖4）。綜上所述，甲狀腺乳頭狀癌中HBME-1、CK19、Gal-3陽性表達情況顯著高于良性病變，免疫組化檢測分子標記物有助于甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺良性病變的鑒別診斷。

圖1 經典型甲狀腺 乳頭狀癌HE染色（X100）

圖2 經典型甲狀腺乳頭狀癌CK19（+++）（X100）

圖3 經典型甲狀腺乳頭狀癌Gal-3（+++）（X100）

圖4 經典型甲狀腺乳頭狀癌 HBME-1（+）（X100）