白細胞介素、脂聯素基因多態性與乳腺癌發生的關系

許 偉 馬梓程 周細華

南通大學附屬如皋醫院 江蘇省如皋市人民醫院普通外科，江蘇如皋 226500

乳腺癌是臨床上常見的惡性腫瘤之一，其患病率占女性惡性腫瘤首位，近年來，我國乳腺癌發病率逐年升高，且呈年輕化趨勢[1-2]。乳腺癌發病機制復雜，目前尚未十分明確，但一般認為與遺傳、免疫、肥胖等密切相關[3-4]。有報道顯示，基因多態性作為個體中最常見的遺傳變異，與乳腺癌的發生密切相關[5]。白細胞介素（interleukin，IL）是在白細胞或免疫細胞間相互作用的淋巴因子，參與腫瘤細胞的免疫調節，在腫瘤發生、發展中發揮重要作用[6-7]。脂聯素（adiponectin，APN）為脂肪細胞分泌的內源性活性蛋白質，可作為胰島素增敏激素。有研究顯示，APN 與乳腺癌發生密切相關[8-9]。基于此，本研究就IL、APN 基因多態性與乳腺癌發生的相關性展開研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2018 年1 月至2020 年1 月南通大學附屬如皋醫院（以下簡稱“我院”）收治的96 例乳腺癌患者作為乳腺癌組，另隨機抽取我院96 名同期體檢正常女性的臨床資料作為正常對照組。納入標準：①觀察組經穿刺病理活檢診斷為乳腺癌；②年齡＞18 歲；③首次確診乳腺癌；④女性；⑤臨床資料完整。排除標準：①炎性乳腺癌；②伴有其他部位惡性腫瘤；③嚴重心、肝、腎功能性疾病；④妊娠期或哺乳期產婦。本研究經我院醫學倫理委員會批準。

1.2 研究方法

統計兩組一般資料，檢測IL、APN 基因多態性。基因型檢測：①核酸提取。清晨空腹抽取患者肘中靜脈血5 ml，乙二胺四乙酸二鉀抗凝，加入1.5 倍體積的細胞裂解液，3000 r/min 離心1 min，取下層沉淀物，采用DNA 提取試劑盒提取全血基因組DNA。②PCR擴增。采用WP-40 型PCR 擴增儀對提取核酸樣本進行擴增，94℃預變性2 min、變性30 s 使雙鏈DNA 模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA；58℃退火30 s 將引物與DNA 模板結合，形成局部雙鏈；72℃延伸1 min，在DNA 聚合酶作用下，以脫氧核糖核苷三磷酸為原料，從引物的3’端開始從5’→3’端的方向延伸，合成與模板互補的DNA 鏈。總擴增35 個循環。引物序列見表1。③基因分型。采用Clin-ToF-Ⅰ型飛行時間質譜儀（北京毅新博創生物科技有限公司）對上述基因表型進行分析，得出基因多態性分型結果。

表1 引物序列

1.3 統計學方法

選用SPSS 21.0 軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差（）表示，組間比較采用t 檢驗；計數資料以例數和百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。女性乳腺癌發生的影響因素采用多因素logistic 回歸分析。以P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 女性乳腺癌發生的單因素分析

兩組IL-10 基因啟動子區-1082 基因型、IL-16基因rs1556218 基因型、IL-6 基因-572 基因型、IL-8基因-251 基因型、APN 基因-276 基因型比較，差異有統計學意義（P ＜0.05）。見表2。

表2 女性乳腺癌發生的單因素分析

2.2 女性乳腺癌發生的多因素logistic 回歸分析

將“2.1”中差異有統計學意義（P ＜0.05）的變量作為自變量，納入logistic 回歸分析模型，進行量化賦值，見表3。結果顯示，IL-10 基因啟動子區-1082GA 基因型、IL-16 基 因rs1556218TG 基 因 型、IL-6 基 因-572CG 基因型、IL-8 基因-251TA 基因型、APN 基因-276TG 基因型是女性乳腺癌發生的影響因素（P ＜0.05），見表4。

表4 女性乳腺癌發生的多因素logistic 回歸分析

3 討論

乳腺癌作為高發性惡性腫瘤，其發病為遺傳、免疫、肥胖等共同作用的結果，目前對于其分子水平發病機制未十分清楚[10-11]。既往有報道指出，細胞色素P450 1A1 基因、胞嘧啶脫氨酶APOBEC3 基因、成纖維細胞生長因子受體2 基因等為乳腺癌的高危易感基因[12-13]。但關于乳腺癌易感性與IL、APN 基因多態性的研究較少，且結果、結論缺乏統一性。IL 作為人體內重要的細胞因子，與免疫、內分泌、炎癥反應等密切相關[14-15]。APN 與肥胖密切相關，而目前一般認為肥胖是乳腺癌的重要危險因素之一[16]。

本研究結果顯示，IL-10 基因啟動子區-1082 GA基因型、IL-16 基因rs1556218 TG 基因型、IL-6 基因-572 CG 基因型、IL-8 基因-251 TA 基因型是乳腺癌發生的影響因素，提示上述IL 基因多態性與乳腺癌的遺傳易感性密切相關。張志珊等[17]研究指出，乳腺癌患者IL-6 基因-572 CG 基因型例數明顯高于正常對照人群，認為IL-6 基因多態性在乳腺癌發病過程中具有重要作用。董靜等[18]研究證實，IL-10 基因啟動子區-1082GA 基因型與乳腺癌易感性密切相關。IL-10為抑制因子（由干擾素合成），可抑制Th1 輔助細胞合成γ 干擾素、IL-2、腫瘤壞死因子-α 等，并協同刺激淋巴細胞增殖分化，對免疫系統具有雙向調節作用，可對樹突狀細胞生長、分化進行抑制，下調機體對腫瘤細胞的免疫作用。有研究指出，IL-10 可協助乳腺惡性腫瘤細胞逃脫免疫系統攻擊[19-20]。IL-16 是由上皮細胞和淋巴細胞分泌的多肽類細胞因子，可與配體CD4 結合，參與腫瘤的發生、發展。IL-16 可作為鋅指蛋白36 的調節趨化因子，促進細胞浸潤，有助于乳腺癌細胞內單核巨噬細胞遷移。IL-6 為炎癥細胞因子，可參與乳腺腫瘤的免疫反應進程，促進乳腺癌細胞增殖、分化，并對腫瘤內營養血管具有促進作用[21-22]。IL-8 是中性粒細胞產生的趨化因子，在病理狀態下，對T 淋巴細胞及嗜堿性粒細胞具有趨化作用，可刺激乳腺癌細胞增殖，加快腫瘤外血管生成，促進腫瘤細胞的發生、轉移[23-25]。上述IL 基因多態性可能對IL 的產生、分泌具有一定影響，上調或降低機體免疫功能，而出現乳腺癌遺傳易感性。

本研究結果顯示，APN 基因-276TG 基因型是乳腺癌發生的影響因素，提示上述APN 基因多態性與乳腺癌的遺傳易感性密切相關。宗成國等[26]通過對乳腺癌患者和正常人群的脂聯素基因多態性進行比較分析，結果顯示脂聯素基因多態性與乳腺癌發生具有明顯相關性，與本研究相符。乳腺癌為雌激素誘發的惡性腫瘤，對雌激素具有明顯依賴性，APN 為脂肪細胞分泌的細胞因子，可調控雌激素-胰島素水平。報道顯示，乳腺癌細胞中存在APN 受體，可與脂聯素特異性結合，抑制磷酸腺苷激酶活性，而抑制腫瘤細胞生長。另有報道顯示，APN 可抑制內皮細胞增殖、遷移，而減少腫瘤內新血管生成，減緩癌細胞轉移[27-28]。

綜上所述，女性乳腺癌的發生與IL、APN 基因多態性密切相關，臨床應引起足夠重視。