HIV的ELISA、GICA初篩結(jié)果與WB確證結(jié)果之間的相關(guān)性

李瑾瑾 王曉艷

1 河南省周口市疾病預(yù)防控制中心專科病醫(yī)院檢驗(yàn)科 466000； 2 周口市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科

酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)是篩選艾滋病毒(HIV)常用方法。根據(jù)《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》相關(guān)要求，我國(guó)居民在進(jìn)行HIV抗體檢測(cè)程序后需要進(jìn)行復(fù)檢以明確HIV檢測(cè)結(jié)果[1]。檢驗(yàn)科需對(duì)陰性受試者提供HIV抗體報(bào)告，對(duì)陽(yáng)性受試者進(jìn)行試驗(yàn)。HIV檢測(cè)結(jié)果是否準(zhǔn)確直接影響著當(dāng)?shù)匾咔椋P(guān)系到HIV感染者是否能及時(shí)、有效的接受治療。目前，我國(guó)HIV感染人數(shù)不斷上升，對(duì)疫情的防控提出了新的挑戰(zhàn)[2]。本文回顧性分析我院2018年5月—2020年5月收集的HIV感染患者血液樣本，應(yīng)用ELISA與GICA檢測(cè)法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)將結(jié)果匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析我院2018年5月—2020年5月收集的HIV感染患者1 280例血液樣本，納入與排除后共有780例樣本參與本次研究。其中男451例，女329例，年齡25～64歲，平均年齡(35.89±1.48)歲。所有樣本均經(jīng)我院咨詢檢測(cè)初步篩選為陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)知情同意的患者；(2)以往病史明確的患者；(3)接受隨訪的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他病毒感染的患者；(2)中途退出研究的患者；(3)不同意本研究的患者。樣本納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)合格樣本；(2)經(jīng)咨詢檢測(cè)初步篩選為陽(yáng)性。

1.2 方法 (1)試劑：ELISA試劑盒購(gòu)于上海榮盛生物藥業(yè)有限公司。膠體金快速檢測(cè)試劑盒(雅培)購(gòu)于廣州萬(wàn)孚生物技術(shù)股份有限公司。HIVⅠ+2型免疫印跡試劑(WB法)試劑盒購(gòu)于杭州澳亞生物技術(shù)有限公司。核酸檢測(cè)試劑盒購(gòu)于上海莼試生物技術(shù)有限公司。(2)檢測(cè)方法：中心自愿咨詢檢測(cè)(VCT)樣本采用ELISA四代試劑初篩后，將陰性結(jié)果判斷為HIV抗體陰性。陽(yáng)性結(jié)果再用ELISA及GICA法進(jìn)行復(fù)檢，將復(fù)檢結(jié)果為陽(yáng)性的納為陽(yáng)性樣本。ELISA陽(yáng)性WB陰性樣本需重新采集血液，進(jìn)行核酸檢測(cè)。(3)陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)：①2條或以上env帶出現(xiàn)。②1條或以上env帶及p24帶同時(shí)出現(xiàn)。③符合試劑盒提供的陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。(4)WB確證試驗(yàn)：采用MP公司AS20蛋白印跡儀作為參比儀器及歐蒙EBM Ⅱ全自動(dòng)免疫印跡儀為實(shí)驗(yàn)儀器，2臺(tái)儀器同時(shí)對(duì)740份HIV陽(yáng)性血清標(biāo)本進(jìn)行WB確證。

2 結(jié)果

2.1 780例樣本篩查試驗(yàn)結(jié)果 780例血液樣本經(jīng)初檢后發(fā)現(xiàn)，雙陰性樣本40例，陽(yáng)性樣本740例。復(fù)檢后雙陽(yáng)性樣本690例，占比93.24%；50例單陽(yáng)性樣本中ELISA陰性/GICA陽(yáng)性樣本21例，占比2.84%；ELISA陽(yáng)性/GICA陰性樣本29例，占比3.92%；ELISA與GICA檢測(cè)結(jié)果比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(配對(duì)χ2=1.280，P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 ELISA與GICA檢測(cè)結(jié)果比較(n)

2.2 WB確證試驗(yàn)結(jié)果 740例HIV抗體初篩陽(yáng)性樣本經(jīng)WB確證，HIV-1抗體陽(yáng)性681例(確證陽(yáng)性率98.70%)，HIV-1抗體陰性45例，抗體不確定14例，見(jiàn)表2。

表2 690例HIV抗體篩查陽(yáng)性樣本W(wǎng)B

2.3 確證樣本帶型分布情況 681例確證陽(yáng)性樣本均是HIV-1抗體陽(yáng)性，經(jīng)WB試驗(yàn)出現(xiàn)10條帶及以上有439例，出現(xiàn)8條帶的124例，出現(xiàn)5～7條帶66例，出現(xiàn)3～4條帶45例，出現(xiàn)2條帶7例。其中出現(xiàn)率由高到低排列前兩位為gp160、p24，gp160出現(xiàn)率為99.56%，p24出現(xiàn)率為98.97%，其中出現(xiàn)率最低的為P55，為55.36%，見(jiàn)表3。

表3 確證樣本帶型分布情況(%)

2.4 ELISA與GICA檢測(cè)結(jié)果比較 780例初篩樣本中，ELISA檢出陽(yáng)性719例，經(jīng)確證陽(yáng)性681例；ELISA檢出陰性21例，經(jīng)確證陰性21例。GICA檢出陽(yáng)性711例，經(jīng)確證陽(yáng)性681例；GICA檢出陰性29例，經(jīng)確證陰性22例。以WB確證結(jié)果為檢驗(yàn)金標(biāo)準(zhǔn)，GICA的敏感性為94.71%、特異度為75.86%，與ELISA的95.78%、100.00%對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表4。

表4 ELISA與GICA診斷效能比較(%)

3 討論

艾滋病在全球流行趨勢(shì)呈現(xiàn)多樣性。艾滋病傳播途徑主要有性交、血液、母嬰傳播。HIV抗體檢測(cè)是艾滋病防御工作的前提基礎(chǔ)。目前，主要通過(guò)篩查、復(fù)查、確證3個(gè)步驟發(fā)現(xiàn)HIV感染者。篩查目的是對(duì)疑似HIV感染者進(jìn)行初步HIV抗體陽(yáng)性反應(yīng)檢測(cè)[3]，復(fù)查及確證是糾正上一環(huán)節(jié)中的假陽(yáng)性樣本，從而得出正確的HIV陽(yáng)性結(jié)論。目前，HIV抗體確認(rèn)方法及確證標(biāo)準(zhǔn)主要有WB、免疫熒光法(IFA)、條帶免疫試驗(yàn)(LIA)、放射免疫沉淀實(shí)驗(yàn)(RIPA)、ELISA、GICA法，其中WB是最常用。HIV-1抗體轉(zhuǎn)印條膜由3個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白的10個(gè)抗原組成，其中抗原分子量大小不同[4]，最大是pg160，最小是p17。WB檢測(cè)結(jié)果在轉(zhuǎn)印條膜特異性HIV抗原位置上以深淺不一的條帶顯示[5]，根據(jù)HIV檢測(cè)結(jié)果可將樣本結(jié)果判定為陽(yáng)性、陰性、不確定[4]。目前，臨床尚無(wú)HIV抗原統(tǒng)一判斷標(biāo)準(zhǔn)，但必須出現(xiàn)1條及以上env抗原帶。目前，HIV抗體檢測(cè)仍然存在不確定性，其不確定率約為20%。這種不確定性主要與p17、p24反應(yīng)有關(guān)，與HIV無(wú)關(guān)[6]。WB主要是來(lái)自細(xì)胞培養(yǎng)純化的病毒抗原，可能會(huì)受宿主細(xì)胞成分影響致使檢查結(jié)果出現(xiàn)交叉反應(yīng)。核酸擴(kuò)增法是一種針對(duì)病毒補(bǔ)充的檢測(cè)方法，其主要內(nèi)容包括病毒分離與培養(yǎng)、HIV-1p24抗原檢測(cè)等。但核酸擴(kuò)增法易出現(xiàn)假陽(yáng)性，其檢測(cè)結(jié)果只能作為參考。建議在檢測(cè)過(guò)程中可先用ELISA進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，對(duì)雙陽(yáng)性樣本進(jìn)行核酸擴(kuò)增試驗(yàn)檢測(cè)，若試驗(yàn)結(jié)果為HIV陽(yáng)性，可判斷為HIV陽(yáng)性，無(wú)須做WB。

本文結(jié)果顯示，經(jīng)中心自愿咨詢檢測(cè)共有780例HIV陽(yáng)性抗體，經(jīng)ELISA/GICA復(fù)檢發(fā)現(xiàn)雙陽(yáng)樣本690例，HIV抗體陽(yáng)性率93.24%。再經(jīng)WBC檢查，其結(jié)果顯示HIV-1抗體陽(yáng)性681例(確證陽(yáng)性率98.70%)。WBC檢查中出現(xiàn)不確定情況，其中GICA無(wú)不確定事件，ELISA發(fā)生不確定事件7例。其確證樣本帶型主要分布在gp160、p24，符合世界衛(wèi)生組織相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。本文結(jié)果顯示，雖然ELISA確證陽(yáng)性率與GICA相似，但確證陰性率較高，但兩者敏感性、特異度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示ELISA與GICA均能檢出HIV陽(yáng)性、陰性抗體。雖然我國(guó)使用WB作為HIV抗體陽(yáng)性的最終標(biāo)準(zhǔn)，但因WB存有缺陷，致使WB陰性受試者經(jīng)隨訪復(fù)查出現(xiàn)條帶進(jìn)展情況。同時(shí)，感染HIV后有一段潛伏期，部分感染者因非特異性免疫反應(yīng)致使其檢測(cè)結(jié)果為假陽(yáng)性。當(dāng)前，我國(guó)HIV抗體檢測(cè)主要面臨以下幾個(gè)問(wèn)題：(1)假陽(yáng)性。確證實(shí)驗(yàn)主要目的是排除其他檢驗(yàn)環(huán)節(jié)出現(xiàn)假陽(yáng)性。因確證實(shí)驗(yàn)方法自身具有高度的特異性，致使確證實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)gp160條帶滿足，從而滿足陽(yáng)性診斷標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)隨訪、病理學(xué)檢查后確診該受試者不是HIV感染者。(2)大量不確定結(jié)果出現(xiàn)給現(xiàn)行的HIV防治工作帶來(lái)諸多困難，影響受試者心理健康及無(wú)償獻(xiàn)血的積極性。(3)沒(méi)有明確規(guī)定窗口期感染診斷標(biāo)準(zhǔn)。(4)HIV抗體檢測(cè)確證實(shí)驗(yàn)具有明顯的局限性。WB進(jìn)行HIV抗體確證存在不確定情況。

綜上所述，HIV感染者經(jīng)ELISA、GICA檢查結(jié)果基本一致，兩者診斷效能相差不大，而初篩樣本ELISA、GICA檢測(cè)均為陽(yáng)性者WB結(jié)果確證陽(yáng)性率最高，聯(lián)合診斷更有利于提高HIV陽(yáng)性檢出率。由于目前技術(shù)局限性，聯(lián)合診斷后仍存在一定不確定性，未來(lái)還有待更多研究發(fā)現(xiàn)，進(jìn)一步降低WB不確定性。