標(biāo)本溶血對(duì)電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)生長(zhǎng)激素結(jié)果的影響

程雙喜，柯丹丹，江轉(zhuǎn)南，楊麗娟，李玉鳳

1.東莞市婦幼保健院兒童保健科，廣東東莞 523002；2.東莞市蘭衛(wèi)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，廣東東莞 523000；3.東莞市松山湖高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，廣東東莞 523000

血液標(biāo)本在采集、貯存過程中，紅細(xì)胞在一些不確定的因素作用下發(fā)生破壞， 使得紅細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)釋放到血清中，稱之為標(biāo)本溶血現(xiàn)象[1]。目前認(rèn)為標(biāo)本溶血會(huì)對(duì)生化、凝血功能、血常規(guī)等檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響。有文獻(xiàn)報(bào)道標(biāo)本輕、 中度溶血對(duì)電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)甲狀腺激素、性激素沒有產(chǎn)生明顯影響[2-5]，同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)標(biāo)本溶血對(duì)血糖、胰島素檢測(cè)結(jié)果有影響[6-8]。然而， 標(biāo)本溶血對(duì)生長(zhǎng)激素檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生什么樣的影響未見報(bào)道。由于生長(zhǎng)激素呈脈沖式分泌，且受運(yùn)動(dòng)及睡眠等因素的影響， 兒童保健工作中常常需要用生長(zhǎng)激素激發(fā)試驗(yàn)判斷生長(zhǎng)激素分泌情況[9]。該試需要檢測(cè)患者在藥物刺激前的生長(zhǎng)激素水平， 及其在藥物刺激后的30、60、90、120 min 的生長(zhǎng)激素水平， 通過檢測(cè)到的生長(zhǎng)激素峰值來判斷生長(zhǎng)激素是否缺乏。然而，在實(shí)際臨床工作中有時(shí)會(huì)因?yàn)橐恍┎豢煽氐囊蛩貢?huì)出現(xiàn)標(biāo)本溶血的情況。 當(dāng)生長(zhǎng)激素激發(fā)試驗(yàn)的關(guān)鍵結(jié)果出現(xiàn)標(biāo)本溶血后, 溶血標(biāo)本的生長(zhǎng)激素檢測(cè)值是否可靠？ 是否需要重新再進(jìn)行一次生長(zhǎng)激素激發(fā)試驗(yàn)？ 但是再次重新進(jìn)行一次生長(zhǎng)激素激發(fā)試驗(yàn)對(duì)患兒還是會(huì)造成一定的創(chuàng)傷， 同時(shí)還會(huì)增加患兒及其家庭的心理及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。 為了解決該問題， 該研究將兒童保健門診就診的149 例身材矮小患兒中收集到的正常標(biāo)本的生長(zhǎng)激素檢測(cè)結(jié)果與其溶血后的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了對(duì)比研究。 現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

收集因身材矮?。▍⒄罩袊?005 年九省/市兒童體格發(fā)育標(biāo)準(zhǔn)身高低于同年齡、同性別兒童2 SD）就診，并行生長(zhǎng)激素激發(fā)試驗(yàn)（實(shí)驗(yàn)采用：鹽酸精氨酸+左旋多巴或者溴吡啶斯的明+左旋多巴進(jìn)行激發(fā)[10-11]）而抽取的149 份生長(zhǎng)激素檢測(cè)值＞5.0 ng/mL，且肉眼觀察未出現(xiàn)溶血、脂血、黃疸的樣本。 研究對(duì)象年齡分布為3～13 歲，其中男性兒童樣本86 份，女性兒童樣本63 份。

1.2 方法

1.2.1 采集樣本 用干燥管采集患者靜脈血，靜置，待血清析出后放置低速離心機(jī)，3 500 r/min 離心10 min，選取外觀無溶血、脂血、黃疸的血清樣本，測(cè)定其生長(zhǎng)激素的結(jié)果。

1.2.2 配制重度溶血的血清標(biāo)本 選取測(cè)定結(jié)果＞5.0 ng/mL 樣本，用無菌竹簽將正常血清標(biāo)本紅細(xì)胞人為破壞，置于低速離心機(jī)，3 500 r/min 轉(zhuǎn)離心10 min，取出，吸出溶血血清300 μl,作為重度溶血樣本（Hb＞0.500 g/dl）于2～8℃保存，并于溶血后30 min 或8 h再次測(cè)定其結(jié)果。

1.2.3 其他 檢測(cè)設(shè)備及試劑：應(yīng)用羅氏Cobas6000 e 601 全自免疫分析儀及其原裝的生長(zhǎng)激素檢測(cè)試劑盒。 檢測(cè)方法為：電化學(xué)發(fā)光法。 試劑精密度：根據(jù)CLSI 的方案（EP5-A2）,使用ELECSYS 試劑、混合人血清和質(zhì)控品確定精密度，得出批間精密度≤3%。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 16.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 99 例正常血清標(biāo)本與其溶血后30 min 檢測(cè)結(jié)果比較

收集99 例生長(zhǎng)激素檢測(cè)值＞5.0 ng/mL 且肉眼觀察未出現(xiàn)溶血、脂血、黃疸的正常血清標(biāo)本，與其人為破壞造成樣本重度溶血后30 min 檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行配對(duì)比較， 兩組生長(zhǎng)激素檢測(cè)結(jié)果曲線大部分重疊。見圖1。其中男童樣本56 例，女童樣本43 例，年齡分布為3～13 歲。

圖1 99 例正常血清標(biāo)本與其溶血后30 min 檢測(cè)結(jié)果比較

2.2 50 例正常血清標(biāo)本與其溶血后8 h 檢測(cè)結(jié)果比較

收集50 例生長(zhǎng)激素檢測(cè)值＞5.0 ng/mL 且肉眼觀察未出現(xiàn)溶血、脂血、黃疸的正常血清標(biāo)本與其人為破壞造成樣本重度溶血后8 h 檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行配對(duì)比較，兩組生長(zhǎng)激素檢測(cè)結(jié)果曲線大部分重疊。見圖2。其中男童樣本30 例，女童樣本20 例，年齡分布為4～11 歲。

圖2 50 例正常血清標(biāo)本與其溶血后8 h 檢測(cè)結(jié)果比較

2.3 正常標(biāo)本與溶血后30 min 及8 h 生長(zhǎng)激素檢測(cè)結(jié)果比較

生長(zhǎng)激素檢測(cè)值＞5.0 ng/mL 且肉眼觀察未出現(xiàn)溶血、脂血、黃疸的正常血清標(biāo)本與其人為破壞造成樣本重度溶血后檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。溶血后30 min，溶血組均值小于其正常值（0.22±0.60）ng/mL，溶血后8 h,溶血組均值小于其正常值（0.19±0.27）ng/mL。 見表1。

表1 正常標(biāo)本與溶血后30 min 及8 h 生長(zhǎng)激素檢測(cè)結(jié)果比較[(±s),ng/mL]

表1 正常標(biāo)本與溶血后30 min 及8 h 生長(zhǎng)激素檢測(cè)結(jié)果比較[(±s),ng/mL]

?

3 討論

影響兒童生長(zhǎng)的病因復(fù)雜， 其中內(nèi)分泌相關(guān)的疾病在生長(zhǎng)障礙的患兒中占了較大比重， 特別是垂體分泌的生長(zhǎng)激素對(duì)兒童的生長(zhǎng)影響很大[12]。 用于生長(zhǎng)激素激發(fā)試驗(yàn)的常用藥物有：胰島素、精氨酸、吡啶斯的明、可樂定、左旋多巴等，它們通過抑制生長(zhǎng)抑素釋放或者通過促進(jìn)GHRH 釋放激素來刺激體內(nèi)生長(zhǎng)激素的分泌。 然而臨床上也不能僅僅依靠生長(zhǎng)激素激發(fā)試驗(yàn)來診斷生長(zhǎng)激素缺乏癥[13-14]，而是需要結(jié)合兒童的既往病史、家族遺傳背景、身高、生長(zhǎng)速率、骨齡、類胰島素樣生長(zhǎng)因子-1、生化指標(biāo)及其他內(nèi)分泌指標(biāo)等綜合分析診斷。 但是生長(zhǎng)激素激發(fā)試驗(yàn)仍然是生長(zhǎng)激素分泌水平的一個(gè)重要的評(píng)估指標(biāo)。 生長(zhǎng)激素激發(fā)試驗(yàn)過程中常用留置靜脈針聯(lián)合采血器采血，盡管采血部位、靜脈通暢度、試管類型、采血月份等可能溶血發(fā)生的主要影響因素。溶血時(shí)紅細(xì)胞高濃度成分逸出、 血紅蛋白本身對(duì)吸光度的干擾、 某些物質(zhì)的血細(xì)胞內(nèi)濃度低于血漿時(shí)溶血導(dǎo)致血漿被稀釋、 血紅蛋白還可競(jìng)爭(zhēng)性抑制分析物與試劑中的反應(yīng)物結(jié)合等原因都可能干擾溶血樣本的檢測(cè)結(jié)果。 此外，溶血時(shí)血小板、白細(xì)胞等血細(xì)胞破壞所釋放的某些細(xì)胞內(nèi)成分也可影響溶血樣本的檢測(cè)結(jié)果[15-16]。

標(biāo)本溶血在臨床工作中仍不能完全避免, 由于生長(zhǎng)激素激發(fā)試驗(yàn)時(shí)不同時(shí)間點(diǎn)生長(zhǎng)激素濃度不同， 在實(shí)驗(yàn)過程中某個(gè)時(shí)間點(diǎn)出現(xiàn)標(biāo)本溶血后除非重新再次進(jìn)行激發(fā)試驗(yàn)， 否則不能再次獲得該時(shí)間點(diǎn)標(biāo)本。 然而再次重新進(jìn)行的生長(zhǎng)激素激發(fā)試驗(yàn)對(duì)患兒還是會(huì)造成一定的損傷。通過對(duì)99 例生未出現(xiàn)溶血的正常血清標(biāo)本與其人為破壞造成樣本重度溶血后30 min 檢測(cè)結(jié)果及50 例未出現(xiàn)溶血的正常血清標(biāo)本與其人為破壞造成樣本重度溶血后8 h 檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行配對(duì)比較研究結(jié)果顯示： 標(biāo)本溶血會(huì)導(dǎo)致其檢測(cè)結(jié)果稍低于正常值。雖然兩者間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但兩者實(shí)際差別的絕對(duì)值并不大。 99 例正常標(biāo)本檢測(cè)值-其溶血后30 min 檢測(cè)值為（0.22±0.60）ng/mL，相對(duì)誤差為2.16%。 50 例正常標(biāo)本檢測(cè)值-其溶血后8 h 檢測(cè)值為（0.19±0.27）ng/mL，相對(duì)誤差為1.88%。

生長(zhǎng)激素是一種由191 個(gè)氨基酸組成肽類激素。下丘腦釋放出生長(zhǎng)激素釋放激素作用于腦垂體，促使腦垂體分泌產(chǎn)生生長(zhǎng)激素。 在血液中生長(zhǎng)激素與生長(zhǎng)激素結(jié)合蛋白相結(jié)合并通過血流傳輸至肝臟和其他組織， 與組織細(xì)胞膜上的相應(yīng)受體結(jié)合后產(chǎn)生作用。生長(zhǎng)激素的過度分泌會(huì)導(dǎo)致肢端肥大，兒童期生長(zhǎng)激素分泌不足會(huì)導(dǎo)致身材矮小。 紅細(xì)胞內(nèi)液并不含有生長(zhǎng)激素。電化學(xué)發(fā)光法采用了生物素-鏈霉親和素包被、 以三聯(lián)吡啶釕作為示蹤物質(zhì)及磁性分離等技術(shù)有效避免了紅細(xì)胞內(nèi)液中的物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾。 但在嚴(yán)重溶血后細(xì)胞內(nèi)液對(duì)血清有一定的稀釋作用， 可造成檢測(cè)溶血后結(jié)果較未溶血前結(jié)果稍低。

綜上所述，在日常的工作中要規(guī)范采血的操作，科學(xué)貯存標(biāo)本等，盡量避免標(biāo)本溶血的出現(xiàn)。但是對(duì)于不可避免地出現(xiàn)溶血的標(biāo)本，該研究認(rèn)為：即使標(biāo)本出現(xiàn)重度溶血， 電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)生長(zhǎng)激素的結(jié)果與溶血前稍有降低，但是差異較小，而且這種差異在標(biāo)本溶血30 min 后及溶血8 h 后沒有太大變化。那么溶血標(biāo)本的生長(zhǎng)激素的電化學(xué)發(fā)光法的檢測(cè)結(jié)果仍然可以作為臨床參考。