X染色體連鎖鋅指蛋白軸蛋白在胃癌組織中的表達水平及與臨床病理因素的相關性分析

鄭 煒, 蔡文寶, 葉賢剛

(1.福建醫科大學附屬第一醫院胃腸外科, 福建 福州 350005 2.福建省泉州市泉港區總醫院普外科， 福建 泉州 362800 3.福建醫科大學附屬第一醫院閩南分院普外科, 福建 泉州 362800)

胃癌是一種上消化道惡性腫瘤，在臨床極為常見，從胃黏膜上皮起源，在我國，在各類腫瘤發病率中，胃癌位居第一位。在全球范圍內，在癌癥死亡原因中，胃癌位居第三位[1]。胃癌一方面會損害患者的消化系統，另一方面還可能對患者的呼吸功能、肝腎功能造成不良影響，嚴重的情況下還會有惡病質出現，對患者的生命安全造成威脅[2]。早期胃癌患者具有較好的預后，但是由于早期具有隱匿的病情，確診時通常已經處于晚期，患者具有較差的預后，極易轉移、復發。現階段，臨床真正有效的靶向治療仍然缺乏。因此，需要對胃癌的發病機制進行研究，將早期診斷分子標志物尋找出來，進而將潛在新治療靶點尋找出來[3]。惡性腫瘤患者的ZFX表達水平高。Axin在腎、腦、心、肺、肝等正常組織中廣泛表達，但是在卵巢癌、乳腺癌等多種腫瘤中表達缺失或下降。目前，臨床還較少有相關研究報道ZFX、Axin在胃癌中的表達。本研究分析了胃癌組織中X染色體連鎖鋅指蛋白、軸蛋白表達水平及與臨床病理因素的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料：回顧性選取2018年2月至2021年2月本院胃癌患者300例，將其胃癌組織300例及癌旁組織(與胃癌組織相距5.0cm以上)140例手術切取下來，年齡36～70歲，平均(65.03±11.10)歲，女性138例，男性162例。在腫瘤直徑方面，<5cm164例，≥5cm136例；在腫瘤部位方面，胃體112例，近端胃104例，遠端胃84例；在Duke分期方面，Ⅰ～Ⅱ期166例，Ⅲ～Ⅳ期134例；在分化程度方面，低分化126例，中分化138例，高分化36例；在浸潤深度方面，黏膜外層238例，黏膜層32例，黏膜及其下層30例；在淋巴結轉移情況方面，轉移192例，未轉移108例。兩組患者的一般資料比較差異均無統計學意義(P>0.05)。納入標準：①均具有完善的臨床資料；②均符合原發性胃癌的診斷標準。排除標準：①有其他對生命造成威脅的器質性病變；②合并其他臟器原發腫瘤。本研究通過醫院醫學倫理委員會批準，患者均知情同意。

1.2方 法

1.2.1X染色體連鎖鋅指蛋白(ZFX)表達水平檢測:切片、脫蠟、水化、抗原修復，用梯度乙醇水化，然后將ZFX一抗加入其中，在4℃的溫度下孵育過夜，第2天用PBS緩沖液洗滌，之后將二抗滴加其中，在37℃的溫度下孵育30min，最后用DAB、蘇木精、中性樹膠分別顯色、復染、封片。

1.2.2軸蛋白(Axin)檢測:連續切片，厚度為3μm，免疫組化染色：用二甲苯、85%、90%、95%、100%梯度酒精、雙蒸水、枸櫞酸鈉溶液(pH=6.0)、羊血清分別脫蠟、浸泡水化、高溫高壓抗原修復3min、封閉1h，在4℃的溫度下孵育5μg/mL Axin一抗過夜，PBS洗滌3次，每次5min，將二抗(B液∶C液=50∶1)滴加其中，DAB法染色。

1.3結果判定:高倍鏡視野下將5個視野隨機從每張組織切片中選取出來，依據切片中陽性細胞染色范圍與細胞染色強度對染色結果進行判定，顯微鏡下運用雙盲法閱片。染色強度：基本不著色、掐黃色、棕黃色、棕褐色分別為0分、1分、2分、3分；染色范圍：1%～5%、6%～25%、26%～50%、51%～75%、76%～100%分別評定為0分、1分、2分、3分、4分。二者相乘，0分、1～2分、3～4分、5～6分分別表示陰性、弱表達、中度表達、強表達，0～2分、3～6分分別表示陰性、陽性[4]。

1.4統計學分析:采用SPSS21.0，計數資料用率表示，用χ2檢驗。檢驗水準α=0.05。

2 結 果

2.1胃癌組織和癌旁組織中ZFX、Axin表達情況比較:胃癌組織中ZFX表達陽性率84.33%(253/300)高于癌旁組織17.14%(24/140)(P<0.05)；Axin表達陽性率34.00%(102/300)低于癌旁組織84.29%(118/140)(P<0.05)。見表1。

表1 胃癌組織和癌旁組織中ZFX Axin陽性表達情況比較n(%)

2.2胃癌組織中ZFX表達與臨床病理因素的相關性分析:Duke分期Ⅰ～Ⅱ期患者胃癌組織中ZFX表達陽性率低于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)，分化程度低分化、中分化、高分化患者胃癌組織中ZFX表達陽性率逐漸降低(P<0.05)，浸潤深度黏膜外層、黏膜層、黏膜及其下層患者胃癌組織中ZFX表達陽性率逐漸降低(P<0.05)，淋巴結轉移患者胃癌組織中ZFX表達陽性率高于淋巴結未轉移患者(P<0.05)，但不同性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤位置患者胃癌組織中ZFX表達陽性率之間的差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 胃癌組織中ZFX表達與臨床病理因素的關系n(%)

2.3胃癌組織中Axin表達與臨床病理因素的相關性分析:Duke分期Ⅰ～Ⅱ期患者胃癌組織中Axin表達陽性率高于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)，分化程度低分化、中分化、高分化患者胃癌組織中Axin表達陽性率逐漸升高(P<0.05)，浸潤深度黏膜外層、黏膜層、黏膜及其下層患者胃癌組織中Axin表達陽性率逐漸升高(P<0.05)，淋巴結轉移患者胃癌組織中Axin表達陽性率低于淋巴結未轉移患者(P<0.05)，但不同性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤位置患者胃癌組織中Axin表達陽性率之間的差異均無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 胃癌組織中Axin表達與臨床病理因素的關系n(%)

3 討 論

胃癌具有較高的惡性程度，患者缺乏顯著的早期癥狀，同時具有較為迅速的病情進展，在評估患者預后的過程中，單純依靠臨床與病理分期的特異性與準確性較低，因此需要將和腫瘤生長及發展相關的分子標志物尋找出來初步篩查、診斷、治療腫瘤疾病并判斷其預后[5]。ZFX歸屬于鋅指蛋白家族，在X染色體分布，在多種肝細胞的抗凋亡機制、自我更新過程中均發揮著極為重要的作用[6]。近年來，有研究表明[7]，惡性腫瘤患者的ZFX表達水平高。Axin是一種抑癌基因，現階段，有研究表明[8]，其對腫瘤進行抑制的途徑主要為對Wnt信號通路進行負調控，如果Axin表達反常，那么其就無法有效調控Wnt信號，進而造成細胞增殖、分化、遷移失衡，從而造成腫瘤發生發展。有研究表明[9]，卵巢癌的組織學分級、臨床分期、淋巴結轉移和Axin表達相關。

本研究結果表明，胃癌組織中ZFX表達陽性率84.33%(253/300)高于癌旁組織17.14%(24/140)，陰性率15.67%(47/300)低于癌旁組織82.86%(116/140)(P<0.05)；Axin表達陽性率34.00%(102/300)低于癌旁組織84.29%(118/140)，陰性率66.00%(198/300)高于癌旁組織15.71%(22/140)(P<0.05)。Duke分期Ⅰ～Ⅱ期患者胃癌組織中ZFX表達陽性率低于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)，分化程度低分化、中分化、高分化患者胃癌組織中ZFX表達陽性率逐漸降低(P<0.05)，浸潤深度黏膜外層、黏膜層、黏膜及其下層患者胃癌組織中ZFX表達陽性率逐漸降低(P<0.05)，淋巴結轉移患者胃癌組織中ZFX表達陽性率高于淋巴結未轉移患者(P<0.05)，說明胃癌疾病進展、轉移、惡性程度和ZFX表達水平提升關系密切。原因可能為ZFX能夠對腫瘤細胞增殖、凋亡進行調節，途徑為將下游一些基因表達修改[10]。有研究進一步表明[11]，與ZFX陽性患者相比，ZFX陰性患者具有較長的平均生存時間，以此認為在胃癌患者預后的評價中，ZFX可以作為一個潛在分子標志物。

本研究結果還表明，Duke分期Ⅰ～Ⅱ期患者胃癌組織中Axin表達陽性率高于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)，分化程度低分化、中分化、高分化患者胃癌組織中Axin表達陽性率逐漸升高(P<0.05)，浸潤深度黏膜外層、黏膜層、黏膜及其下層患者胃癌組織中Axin表達陽性率逐漸升高(P<0.05)，淋巴結轉移患者胃癌組織中Axin表達陽性率低于淋巴結未轉移患者(P<0.05)，說明在胃癌的發生發展過程中，Axin可能是關鍵基因，胃癌的分化會在Axin表達水平下降的情況下下降，轉移性、侵襲性會在Axin表達水平下降的情況下提升，從而為胃癌的發生發展提供有利條件。Axin表達下調或缺失后就無法有效抑制腫瘤，有研究進一步表明[12]，Axin會在β-cantenin作用，表達下調會為β-cantenin異常表達提供有利條件，可能在胃癌的發生發展過程中參與。

綜上所述，胃癌組織中X染色體連鎖鋅指蛋白表達陽性率提升，軸蛋白表達陽性率降低，均與臨床病理因素中Duke分期、分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移相關，值得臨床重視。