羊源沙門(mén)氏菌的分離鑒定及致病性和耐藥性分析

王思敏，楊江峰，趙曉錕，張 雷，郭晶晶，蘭金蘋(píng)，于小杰，王 凈

(1.張家口市宣化區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，張家口 075100；2.河北北方學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，河北省肉羊產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新戰(zhàn)略聯(lián)盟，張家口 075000)

沙門(mén)氏菌(Salmonella)是一種可引起人和動(dòng)物感染的致病菌，其耐寒、耐干燥、不耐熱，在日常環(huán)境中到處存在，在不同的環(huán)境中可存活數(shù)周甚至數(shù)月。沙門(mén)氏菌被美國(guó)細(xì)菌學(xué)家丹尼爾·埃爾默·薩爾蒙(Daniel Elmer Salmon)發(fā)現(xiàn)，于1885年首次從豬中分離出腸炎沙門(mén)氏菌血清型豬霍亂弧菌[1]。到目前為止，沙門(mén)氏菌屬分為邦格沙門(mén)氏菌和腸炎沙門(mén)氏菌2種，超過(guò)2 600種不同的血清型已被分離鑒定[2]。羊沙門(mén)氏菌病是由多種血清型沙門(mén)氏菌引起羊的一種傳染病，而引起羊患病的有腸炎沙門(mén)氏菌亞種羊流產(chǎn)沙門(mén)氏菌[3]、雙亞利桑那腸沙門(mén)氏菌[4-6]和鼠傷寒沙門(mén)氏菌[7]可引起羊發(fā)燒、食欲不振、腹瀉及排黏稠的糞便，母羊流產(chǎn)、消瘦、出現(xiàn)敗血病及急性或慢性腸炎，甚至死亡[8]。羊源沙門(mén)氏菌影響了羔羊的生長(zhǎng)發(fā)育和成活率，降低了羊的生產(chǎn)性能，給養(yǎng)羊業(yè)帶來(lái)很大經(jīng)濟(jì)損失。同時(shí)羊源沙門(mén)氏菌具有多元化的基因，根據(jù)地區(qū)差異和氣候特征會(huì)演化出多種耐藥機(jī)制，加上人為的不合理用藥，導(dǎo)致菌株產(chǎn)生耐藥性而難以防治。因此，監(jiān)測(cè)菌株的耐藥性和致病性可提供合理的防治措施。

本試驗(yàn)旨在研究張家口某地區(qū)羊源沙門(mén)氏菌的耐藥性和致病性，檢測(cè)分離株的耐藥基因和毒力基因，分析其耐藥性、致病性與相關(guān)基因的關(guān)系，以期為羊源沙門(mén)氏菌的耐藥性和分子流行病學(xué)監(jiān)測(cè)提供可靠依據(jù)，為臨床檢測(cè)和實(shí)際用藥提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株及試驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)所用標(biāo)準(zhǔn)菌株鼠傷寒沙門(mén)氏菌ATCC 14028和大腸桿菌ATCC 44102均購(gòu)自河南信陽(yáng)萊耀生物科技有限公司。4周齡體重約20 g SPF級(jí)健康昆明雌性小鼠購(gòu)自河北北方學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.1.2 樣品來(lái)源 2020年11月從張家口市宣化區(qū)隨機(jī)選擇了15個(gè)羊場(chǎng)采集150份羔羊肛拭子樣品。

1.1.3 主要試劑 緩沖蛋白胨水培養(yǎng)基、SS瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、LB肉湯培養(yǎng)基、MH肉湯培養(yǎng)基均購(gòu)自杭州百思生物技術(shù)有限公司；PBS、沙門(mén)氏菌成套生化鑒定管(SMGB)均購(gòu)自青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司；革蘭氏染色液購(gòu)自深圳康泰生物制品股份有限公司；沙門(mén)氏菌屬診斷血清購(gòu)自寧波天潤(rùn)生物藥業(yè)有限公司；青霉素(PEN)、阿莫西林(AMO)、復(fù)方新諾明(T/S)等藥敏片均購(gòu)自常德比克曼生物科技有限公司；AxyPrep細(xì)菌基因組DNA小量試劑盒購(gòu)自康寧生命科學(xué)有限公司；DNA Marker購(gòu)自天根生化科技(北京)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌分離鑒定

1.2.1.1 細(xì)菌分離培養(yǎng) 將肛拭子放入緩沖蛋白胨水培養(yǎng)基(BPW)中，于37 ℃培育12～15 h。用接種環(huán)接種到伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基和SS培養(yǎng)基中，于37 ℃培育24～36 h，檢測(cè)是否存在沙門(mén)氏菌菌落，分別觀察到琥珀色菌落和無(wú)色透明菌落即可[9]。挑選疑似菌落接種于LB培養(yǎng)基中，于37 ℃培育20～24 h后，4 ℃保存。

1.2.1.2 革蘭氏染色及生化鑒定 挑選純化培養(yǎng)的單菌落進(jìn)行革蘭氏染色，顯微鏡下觀察菌體形態(tài)[10]。使用沙門(mén)氏菌成套生化鑒定管試劑盒進(jìn)行生化鑒定。選擇可疑菌落，接種到色氨酸肉湯(靛基質(zhì))、賴(lài)氨酸脫羧酶培養(yǎng)基等[11]。于37 ℃培養(yǎng)24～28 h,參照GB 4749.4-2010標(biāo)準(zhǔn)判斷結(jié)果[12]。

1.2.1.3 細(xì)菌血清型鑒定 采用玻板凝集試驗(yàn)法用沙門(mén)氏菌屬診斷血清試劑盒對(duì)分離菌進(jìn)行血清型鑒定[13]。

1.2.1.4 PCR擴(kuò)增鑒定 使用AxyPrep細(xì)菌基因組DNA小量試劑盒提取分離菌DNA,-20 ℃保存?zhèn)溆谩８鶕?jù)沙門(mén)氏菌屬基因invA的核苷酸序列(GenBank登錄號(hào)：MK017942.1)合成1對(duì)引物，PCR檢測(cè)鑒定分離菌株。 引物序列為：上游引物F:5′-GTGAAATTATCGCCACGTTCGGGC-3′；下游引物R：5′-TCATCGCACCGTCAAAGGAACC-3′。預(yù)期擴(kuò)增片段大小為284 bp[14]。PCR反應(yīng)體系20 μL：PCR 2×TaqPlus MasterMix 10.5 μL，上、下游引物各0.75 μL，DNA模板 1.5 μL，滅菌蒸餾水6.5 μL。PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性30 s，59 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min；4 ℃保存。取 PCR 反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

1.2.2 分離株致病性與毒力基因相關(guān)分析

1.2.2.1 致病性試驗(yàn) 將65只SPF級(jí)健康昆明小鼠分為5組，4個(gè)感染組(A、B、C、D組)和1個(gè)對(duì)照組，每株分離株為1個(gè)感染組，每組15只，對(duì)照組5只，每個(gè)感染組分為有3小組，每小組5只，分別腹腔注射不同梯度濃度的菌液0.5 mL，對(duì)照組注射等體積滅菌生理鹽水。感染后分籠喂養(yǎng)連續(xù)觀察7 d，每天隔6 h觀察1次[15]。觀察小鼠精神狀態(tài)和飲食狀態(tài)，記錄小鼠的發(fā)病和死亡數(shù)量。根據(jù)統(tǒng)計(jì)情況，按改良寇氏法公式計(jì)算小鼠半數(shù)致死量(LD50)。

LD50=lg-1[Xm-i(∑P-0.5)]

其中，Xm，最大劑量組劑量對(duì)數(shù)值；i，相鄰兩組劑量高劑量與低劑量之比的對(duì)數(shù)；∑P，各組動(dòng)物死亡率之總和[16]，剖檢死亡小鼠，觀察病理變化，取感染組織進(jìn)行細(xì)菌分離鏡檢。試驗(yàn)結(jié)束后撲殺所有小鼠，隨機(jī)選擇試驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠剖檢和鏡檢。

1.2.2.2 毒力基因PCR擴(kuò)增和測(cè)序 參考GenBank登錄的毒力基因序列和相關(guān)文獻(xiàn)[17-20]，設(shè)計(jì)9對(duì)引物分別擴(kuò)增毒力島基因hilA、avrA、sseL、ssaQ、mgtC、siiD、sopB，腸毒素基因stn，質(zhì)粒毒力基因spvR。引物信息見(jiàn)表1。引物均由深圳華大基因股份有限公司合成。PCR反應(yīng)體系25 μL：PCR 2×TaqPlus Master Mix 12.5 μL，上、下游引物各0.75 μL，DNA模板 2 μL，ddH2O 9 μL。PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性30 s，退火(退火溫度見(jiàn)表1)45 s，72 ℃延伸1 min，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min;4 ℃保存。根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果，將毒力基因陽(yáng)性的PCR產(chǎn)物送深圳華大基因股份有限公司進(jìn)行測(cè)序，并與NCBI中相應(yīng)的參照基因進(jìn)行BLAST比對(duì)分析。

1.2.3 分離株耐藥性與耐藥基因的相關(guān)分析

1.2.3.1 藥敏試驗(yàn) 采用Kirby-Bauer紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。用無(wú)菌棉簽將菌液均勻涂抹在MH固體培養(yǎng)基上，藥敏片粘貼到培養(yǎng)基表面，37 ℃培養(yǎng)20～24 h，測(cè)量抑菌圈直徑[21]。按照CLSI指定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定。

1.2.3.2 耐藥基因PCR擴(kuò)增和測(cè)序 參考GenBank登錄的耐藥基因序列和相關(guān)文獻(xiàn)[22-24]，設(shè)計(jì)11對(duì)引物并送深圳華大基因股份有限公司合成。引物信息見(jiàn)2。用AxyPrep細(xì)菌基因組DNA小量試劑盒提取DNA模板，分別擴(kuò)增β-內(nèi)酰胺類(lèi)耐藥基因blaTEM、blaCMY、blaOXA，氟喹諾酮類(lèi)耐藥基因qnrS、oqxA、oqxB，磺胺類(lèi)耐藥基因sul1、sul2、sul3，四環(huán)素類(lèi)耐藥基因tetB和氨基糖苷類(lèi)耐藥基因aadA1。PCR反應(yīng)體系25 μL：PCR 2×TaqPlus MasterMix 12.5 μL，DNA模板 2 μL，ddH2O 9 μL，上、下游引物各0.75 μL。PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性30 s，退火(溫度見(jiàn)表1)45 s，72 ℃延伸1 min，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min；4 ℃保存。根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果，將耐藥基因陽(yáng)性的PCR產(chǎn)物送深圳華大基因股份有限公司進(jìn)行測(cè)序，并與NCBI中相應(yīng)的參照基因進(jìn)行BLAST比對(duì)分析。

表1 毒力基因PCR引物信息

表2 耐藥基因PCR引物信息

續(xù)表

2 結(jié) 果

2.1 沙門(mén)氏菌分離鑒定

2.1.1 沙門(mén)氏菌分離培養(yǎng) 對(duì)150份羔羊肛拭子樣品進(jìn)行沙門(mén)氏菌分離，培養(yǎng)24 h后在SS培養(yǎng)基上呈圓形，凸起，無(wú)色半透明狀，表面圓潤(rùn)光滑(圖1)，初步分離得到4株沙門(mén)氏菌N1、N2、N3、N4，分離率為4/150(2.7%)。

圖1 SS培養(yǎng)基上疑似沙門(mén)氏菌菌落形態(tài)Fig.1 Morphology of suspected Salmonella colonies on the SS medium

2.1.2 沙門(mén)氏菌鏡檢和生化鑒定 分離菌株經(jīng)革蘭氏染色后顯微鏡鏡檢，可見(jiàn)革蘭氏陰性短桿菌，單獨(dú)存在，偶見(jiàn)2個(gè)一起(圖2)。生化鑒定結(jié)果顯示，甘露醇、山梨醇、衛(wèi)矛醇、賴(lài)氨酸脫羧酶陽(yáng)性，色氨酸、尿素酶、氰化鉀、水楊苷、丙二酸鹽、ONPG陰性(表3)，4株分離株都符合沙門(mén)氏菌的生化特性。

圖2 分離株革蘭氏染色鏡檢圖(1 000×)Fig.2 Gram staining microscopic examination of the isolated strains (1 000×)

表3 生化試驗(yàn)結(jié)果

2.1.3 沙門(mén)氏菌PCR鑒定和血清型鑒定 根據(jù)沙門(mén)氏菌屬基因invA核苷酸序列，PCR擴(kuò)增4株分離株，結(jié)果表明，所有分離株均擴(kuò)增出大小為284 bp的明亮條帶(圖3)，確定分離到4株沙門(mén)氏菌。對(duì)分離株進(jìn)行血清型鑒定，結(jié)果顯示,4株沙門(mén)氏菌均為B群血清型，均為鼠傷寒沙門(mén)氏菌。

2.2 沙門(mén)氏菌分離株致病性與毒力基因檢測(cè)及相關(guān)分析

2.2.1 沙門(mén)氏菌分離株致病性試驗(yàn)結(jié)果 試驗(yàn)組小鼠感染后出現(xiàn)精神萎靡、腹瀉、食欲下降、被毛凌亂等癥狀，部分小鼠24～72 h后死亡，而對(duì)照組小鼠體征正常。試驗(yàn)組小鼠剖解后表現(xiàn)腸系膜充血出血，腸壁充血變薄，腸內(nèi)腫脹和充滿稀樣黑褐色糞便，說(shuō)明分離株對(duì)小鼠具有致病性。測(cè)定其LD50介于5.67×107～6.45×107CFU之間，具體信息見(jiàn)表4。

M,DNA Marker Ⅱ;1～4,分離株N1、N2、N3和N4；+，陽(yáng)性對(duì)照；-，陰性對(duì)照。下同M,DNA Marker Ⅱ;1-4,Isolates N1,N2,N3 and N4，respectively;+，Positive control;-，Negative control.The same as below圖3 沙門(mén)氏菌分離株invA基因PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.3 PCR amplification results of invA gene of Salmonella isolates

表4 沙門(mén)氏菌分離株對(duì)小鼠的毒力

2.2.2 沙門(mén)氏菌分離株毒力基因PCR擴(kuò)增及測(cè)序分析 毒力基因PCR檢測(cè)結(jié)果表明，在檢測(cè)的9種毒力基因中有6種毒力基因(avrA、sseL、mgtC、sopB、stn和spvR基因)的檢出率均為100%。檢測(cè)的另外3種毒力基因中hilA和siiD基因陽(yáng)性檢出率為75%，ssaQ基因陽(yáng)性檢出率為50%，毒力基因的檢出率均>50%(圖4)。9種毒力基因的測(cè)序結(jié)果經(jīng)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，相似性達(dá)96.3%以上。

2.2.3 沙門(mén)氏菌分離株毒力表型與毒力基因相關(guān)性分析 由表5可知，分離株毒力表型和毒力基因呈正相關(guān)關(guān)系，4株分離株均攜帶8種以上毒力基因，其中N4攜帶9種毒力基因，毒力最強(qiáng)，其余3株中，N1缺少毒力島基因ssaQ，N2缺少毒力島基因siiD，N3缺少毒力島基因hilA，毒力N3>N1>N2。

表5 沙門(mén)氏菌分離株毒力表型與毒力基因?qū)Ρ?/p>

2.3 羊源沙門(mén)氏菌分離株耐藥性與耐藥基因檢測(cè)結(jié)果

2.3.1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 采用Kirby-Bauer紙片擴(kuò)散瓊脂法測(cè)定分離株對(duì)10種抗菌藥物的敏感性。結(jié)果顯示，沙門(mén)氏菌分離株對(duì)復(fù)方新諾明、利福平、林可霉素、青霉素、氨芐西林耐藥率為100%；對(duì)阿莫西林的耐藥率為50%；對(duì)頭孢拉定、四環(huán)素的耐藥率為25%；對(duì)慶大霉素、環(huán)丙沙星的耐藥率為0(表6)。表明羊源沙門(mén)氏菌分離株對(duì)復(fù)方新諾明、利福平、林可霉素、青霉素和氨芐西林產(chǎn)生了很強(qiáng)的耐藥性，對(duì)環(huán)丙沙星和慶大霉素較為敏感。

表6 沙門(mén)氏菌分離株藥敏試驗(yàn)結(jié)果

R,耐藥;I,中介;S,敏感

R,Resistant;I,Intermediate;S,Sensitivity

2.3.2 沙門(mén)氏菌分離株耐藥基因PCR擴(kuò)增及測(cè)序分析 耐藥基因檢測(cè)結(jié)果顯示，blaTEM、qnrS、sul1、sul2基因檢出率為100%，aadA1基因檢出率為75%，blaCMY、oqxA和sul3基因檢出率均為50%，blaOXA基因檢出率為25%，而oqxB和tetB基因則未被檢出(圖5)。9種耐藥基因的測(cè)序結(jié)果經(jīng)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，相似性均達(dá)94.7%以上。

2.3.3 沙門(mén)氏菌分離株耐藥表型與耐藥基因相關(guān)性分析 由表7可知，分離株耐藥表型和耐藥基因整體呈正相關(guān)，分離株攜帶β-內(nèi)酰胺類(lèi)耐藥基因blaTEM、blaCMY、blaOXA越多，耐藥表型對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物耐藥的越多；分離株攜帶2種以上磺胺類(lèi)耐藥基因sul1、sul2、sul3，耐藥表型對(duì)磺胺類(lèi)藥物均耐藥；4株分離株均未攜帶四環(huán)素類(lèi)耐藥基因tetB，3株的耐藥表型對(duì)四環(huán)素類(lèi)藥物敏感；分離株N1不攜帶氟喹諾酮類(lèi)耐藥基因和氨基糖苷類(lèi)耐藥基因，耐藥表型對(duì)這2類(lèi)藥物都敏感；但另外3株N2、N3、N4均攜帶氟喹諾酮類(lèi)耐藥基因qnrS、oqxA和氨基糖苷類(lèi)耐藥基因aadA1，耐藥表型顯示對(duì)這2類(lèi)藥物表現(xiàn)中介或敏感。

A～I(xiàn),分別為blaTEM、blaCMY、blaOXA、qnrS、oqxA、sul1、sul2、sul3和aadA1基因A-I,blaTEM,blaCMY,blaOXA,qnrS,oqxA,sul1,sul2,sul3 and aadA1 genes,respectively圖5 沙門(mén)氏菌分離株耐藥基因PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.5 PCR amplification of drug resistance gene of Salmonella isolates

表7 沙門(mén)氏菌分離株耐藥表型與耐藥基因?qū)Ρ?/p>

3 討 論

羊源沙門(mén)氏菌是一種重要的人獸共患病病原，英國(guó)動(dòng)植物衛(wèi)生機(jī)構(gòu)(APHA)在2017年在對(duì)羊群進(jìn)行死后檢查時(shí)發(fā)現(xiàn)了一種潛在的新鼠傷寒沙門(mén)氏菌菌株，該羊群512只羊中有207只在1個(gè)月內(nèi)死亡[25]。這種新的鼠傷寒沙門(mén)氏菌菌株與英國(guó)以前暴發(fā)的菌株不同，可能相差5個(gè)核苷酸多態(tài)性突變，其對(duì)所有抗生素均耐藥。這種分離株引起的疾病一旦暴發(fā)，會(huì)危及所有人類(lèi)和動(dòng)物。而本研究分離得到的4株羊源沙門(mén)氏菌血清型均為鼠傷寒沙門(mén)氏菌，鑒于羊源沙門(mén)氏菌潛在的危險(xiǎn)性和羊源沙門(mén)氏菌可用數(shù)據(jù)的稀缺性，加強(qiáng)對(duì)羊源沙門(mén)氏菌的研究尤為重要。

沙門(mén)氏菌共有約90%的毒力基因存在于DNA中，其余10%毒力基因存在于毒力因子中，這部分主要決定該血清型致病性的結(jié)構(gòu)、產(chǎn)物和方式[26]。其大多數(shù)編碼此類(lèi)因子的基因位于沙門(mén)氏菌致病島(SPI)中，也可能在毒力質(zhì)粒(pSLT)中，更確切地說(shuō)在毒力質(zhì)粒的spv操縱子上。但尚未明確在spv操縱子中產(chǎn)生的某些蛋白質(zhì)的機(jī)制及其在毒力中的作用，需進(jìn)行更全面的研究[27]。本試驗(yàn)中4株分離株均攜帶毒力島基因avrA、mgtC、sopB、sseL和腸毒素基因stn及質(zhì)粒毒力基因spvR，hilA、siiD、ssaQ基因陽(yáng)性檢出率也均在50%以上。分離株毒力表型和毒力基因呈正相關(guān)，4株分離株均攜帶8種以上毒力基因，其中N4攜帶9種毒力基因，毒力表型毒力最強(qiáng)。宋晟等[28]分離出1株雞源沙門(mén)氏菌，該菌株共有致病基因27個(gè)，攜帶包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡致病基因、侵襲上皮細(xì)胞致病基因和介導(dǎo)菌株對(duì)宿主細(xì)胞的黏附致病基因等多種致病因子。張捷等[29]通過(guò)研究北京地區(qū)禽類(lèi)中分離的36株沙門(mén)氏菌基因型及毒力基因，獲得11個(gè)ST型。菌株均攜帶毒力島SPI1～SPI5代表性基因，66.7%含毒性質(zhì)粒spvB。沙門(mén)氏菌毒力島基因相對(duì)穩(wěn)定，但攜帶毒力基因?qū)Χ玖Ρ硇偷牟顒e有一定影響。目前不同毒力基因?qū)ρ蛟瓷抽T(mén)氏菌致病性影響的研究較少，需進(jìn)一步研究。

藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，4株羊源沙門(mén)氏菌分離株對(duì)10種抗菌藥呈不同程度耐藥，且均為多重耐藥菌。分離株均對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)的青霉素、氨芐西林、利福平耐藥，對(duì)磺胺類(lèi)的復(fù)方新諾明和大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)的林可霉素也表現(xiàn)耐藥，且都攜帶2種以上的β-內(nèi)酰胺酶類(lèi)耐藥基因blaTEM、blaCMY、blaOXA和磺胺類(lèi)耐藥基因sul1、sul2、sul3，耐藥表型和耐藥基因整體呈正相關(guān)，但有些基因可能不表現(xiàn)，與馮林等[30]和江萍等[31]研究結(jié)果相同之處是對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素耐藥嚴(yán)重，不同的是其分離的羊源沙門(mén)氏菌均對(duì)氟喹諾酮類(lèi)耐藥嚴(yán)重，而本研究得到的羊源沙門(mén)氏菌對(duì)磺胺類(lèi)抗生素存在耐藥表型和耐藥基因，檢出率較高。由此可知，由于地域不同及用藥差異，羊源沙門(mén)氏菌耐藥情況有所不同，需加強(qiáng)監(jiān)測(cè)，為避免羊源沙門(mén)氏菌耐藥范圍擴(kuò)大，應(yīng)合理規(guī)范使用抗生素。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)分離得到4株羊源沙門(mén)氏菌，血清型均為鼠傷寒沙門(mén)氏菌，有一定致病性，毒力基因檢出率較高，均在50%以上。分離株對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)和磺胺類(lèi)抗菌藥耐藥嚴(yán)重，耐藥表型和耐藥基因均存在，臨床用藥可考慮慶大霉素和環(huán)丙沙星作為治療藥物。