外周血miR-92a、miR-424、miR-145在食管癌中的表達及意義

徐 孟，肖航宇，張 曜，蒲小兵

食管癌好發于中老年人，大部分患者確診時已為中晚期，5年生存率≤30%，故盡早確診非常重要[1]。近年發現微小核糖核酸(miR)表達失調與腫瘤發生發展密切相關[2]。據功能miR可分為抑癌miR及致癌miR，其中miR-92a在結直腸癌等消化道腫瘤中呈致癌效應[3]，miR-424在肝細胞癌、食管鱗癌中也呈致癌效應[4]，miR-145則在結直腸、食管、肺等腫瘤中呈抑癌效應[5]。基于此，本研究分析外周血miR-92a、miR-424、miR-145水平與食管癌發生發展的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月—2020年12月我院68例食管癌作為食管癌組。納入標準：經手術病理診斷食管癌；臨床病理、實驗室等檢查資料完整。排除標準：術前行放化療等抗腫瘤治療；術中死亡；有惡性腫瘤病史及治療史；有藥物或乙醇濫用史；伴心腎等器官功能障礙；妊娠期婦女。另納入68例體檢健康者作為對照組。2組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2研究方法 食管癌組在入院次日清晨抽取空腹外周靜脈血4 ml，對照組取體檢當日空腹外周靜脈血樣4 ml；3000 r/min離心5 min，棄上清，加入等體積磷酸鹽及淋巴細胞分離液，2000 r/min離心30 min后，取乳白色層與細胞洗滌液混合，12 000 r/min離心5 min，獲得沉淀為外周血單個核細胞；加入Trizol提取液抽提總RNA，經試劑盒逆轉錄，采用熒光定量聚合酶鏈式反應檢測miR-92a、miR-424、miR-145；擴增條件：95 ℃預熱10 min，95 ℃變性15 s，60 ℃退火60 s，45個循環，最后72 ℃延伸5 min；利用紫外光凝膠成像系統攝像觀察，采用2-ΔΔCt法以目的基因與內參U6比值作為目的基因mRNA相對表達量。

2 結果

2.12組外周血miR-92a、miR-424、miR-145相對表達量 食管癌組外周血miR-92a、miR-424相對表達量顯著高于對照組，miR-145相對表達量低于對照組(P<0.01)，見表1。

表1 食管癌患者和體檢健康者外周血miR-92a、miR-424、miR-145相對表達量比較

2.2外周血miR-92a、miR-424、miR-145相對表達量對食管癌的診斷價值 ROC曲線分析發現，外周血miR-92a、miR-424、miR-145相對表達量均對食管癌有較高的診斷價值，見表2。

表2 外周血miR-92a、miR-424、miR-145相對表達量對食管癌的診斷價值分析

2.3不同臨床病理特征食管癌患者外周血miR-92a、miR-424、miR-145相對表達量 TNM分期Ⅲ期者外周血miR-92a、miR-424相對表達量顯著高于Ⅰ～Ⅱ期者，miR-145相對表達量顯著低于Ⅰ～Ⅱ期者(P<0.05，P<0.01)；淋巴結轉移者外周血miR-92a、miR-424相對表達量顯著高于非淋巴結轉移者，miR-145相對表達量顯著低于非淋巴結轉移者(P<0.01)。見表3。

2.4食管癌臨床病理特征與外周血miR-92a、miR-424、miR-145相對表達量的相關性 食管癌TNM分期及淋巴結轉移與外周血miR-92a、miR-424相對表達量呈正相關(r=0.692、0.511、0.496、0.404，P<0.05)，與miR-145相對表達量呈負相關(r=-0.475、-0.382，P<0.05)。

3 討論

PENG等[6]指出miR-92a可輔助診斷早期結直腸癌，且有望成為新型抗腫瘤藥物的作用靶點。ALCANTARA和GARCIA[7]還指出，miR-92a可通過調控神經纖維瘤Ⅱ型表達，參與結直腸、肺等腫瘤的發生發展。近年FASSAN等[8]發現，血液miR-92a可用于診斷Barrett食管，有望成為預測食管癌發生風險的生物學標志物。本研究中，食管癌組外周血miR-92a相對表達量顯著高于對照組，且經ROC曲線分析，外周血miR-92a相對表達量對食管癌診斷有利，提示外周血miR-92a過表達可能參與了食管癌的發生。不僅如此，TNM分期及淋巴結轉移與外周血miR-92a相對表達量呈正相關，提示miR-92a發揮致癌效應，還可調控食管癌細胞侵襲及遷移。體外實驗發現，miR-92a可通過調節細胞因子信號傳導抑制蛋白及信號傳導與轉錄激活因子表達，增強細胞致癌能力[9]。

表3 不同臨床病理特征食管癌患者外周血miR-92a、miR-424、miR-145相對表達量比較

miR-424與人體血管生成及血管重建功能有關，在腦缺血性疾病中，miR-424過表達可保護腦損傷[10]。本研究也發現，TNM分期及淋巴結轉移與外周血miR-424相對表達量呈正相關，提示miR-424表達增強對提升食管癌細胞侵襲遷移能力有利。

miR-145在宮頸、肺、食管等腫瘤中表達下調，并通過多種信號途徑調控靶基因表達，發揮抑癌基因作用。本研究中，食管癌組外周血miR-145相對表達量低于對照組，且其相對表達量對食管癌診斷有利，提示miR-145可能發揮抑癌效應。本研究也發現，TNM分期及淋巴結轉移與外周血miR-145相對表達量呈負相關，提示miR-145可能通過調控靶基因表達，抑制食管癌細胞的侵襲及遷移能力。

綜上，食管癌患者外周血miR-92a、miR-424表達升高，miR-145表達下降，上述miR與食管癌的發生發展有關，有望成為食管癌診療的新靶點。