唾液相關因子與口腔微生態pH平衡的關系及臨床意義

黃 巖，邊玉婷，王明麗，王 芳，劉元元

我國兒童齲病嚴重，若未得到及時診治，嚴重影響兒童口腔及全身健康[1]。目前已證實，口腔微生態pH偏酸性在兒童齲病發生進展中起主要促進作用。碳酸酐酶Ⅵ(CA-Ⅵ)在唾液中廣泛存在，系細胞分泌型碳酸酐酶，具有調控細胞凋亡、維持pH平衡等作用，對維持口腔生理功能起重要作用[2]。據既往研究，CA-Ⅵ基因多態性可影響口腔微生物群組成和齲齒風險[3]。基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)是降解變性膠原纖維的金屬蛋白酶，其含量升高是影響齲齒發生的重要因素[4]。CC趨化因子配體28(CCL28)對致齲菌白色念珠菌具有抗菌活性，通過調節細菌影響口腔微生態平衡[5]。而目前關于唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28與口腔微生態pH平衡的關系及臨床意義報道較少，本文對此展開研究。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年12月—2021年8月我院收治的287例兒童口腔健康檢查者，其中34例有齲病(齲病組)，253例無齲病(無齲病組)。納入標準：兒童齲病及齲源性牙髓炎診斷參考《齲病學》；配合本研究；入組前6個月無抗齲治療史；年齡3～15歲。排除標準：其他原因引起的牙髓炎者；不能配合完成牙科檢查者；未能成功收集唾液標本者；合并自身免疫性疾病者。

1.2研究方法

1.2.1齲病嚴重程度評估：齲壞程度[6]：淺齲：齲壞局限于釉質，無自覺癥狀，探診也無反應；中齲：齲壞達牙本質淺層，有齲洞，可有探痛，對冷、食物嵌入、酸、熱等刺激出現疼痛反應，刺激源去除后疼痛立即消失；深齲：表現為大而深的齲洞，或入口小而深層有較為廣泛的破壞，齲壞已達牙本質深層，對外界刺激反應較中齲重，刺激源去除后疼痛立即消失。齲失補指數(DMFT)[6]：<3為低齲，3～5為中齲，≥5為高齲。

1.2.2唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28、pH值檢測：于入院時清晨空腹狀態下采集受檢者唾液標本2 ml置入EP管中，離心10 min，取上清應用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗檢測CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28水平，采用pH計標定的pH試紙檢測唾液pH值。

1.3觀察指標 比較2組唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28、pH值；分析唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28與pH值的相關性；分析兒童齲病易感性的影響因素；分析唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28與齲病病情進展的關系；分析唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28單一及聯合預測兒童齲病易感性的價值。

2 結果

2.1唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28、pH值比較 齲病組唾液CA-Ⅵ、pH值低于無齲病組，MMP-2、CCL28高于無齲病組(P<0.01)。見表1。

表1 2組行口腔健康檢查兒童唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28、pH值比較

2.2唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28與pH值的相關性 唾液CA-Ⅵ與pH值呈正相關(r=0.859，P<0.01)，MMP-2、CCL28與pH值呈負相關(r=-0.782、-0.707，P<0.01)。

2.3兒童齲病易感性影響因素分析 唾液CA-Ⅵ是兒童齲病易感性保護因素，MMP-2、CCL28是兒童齲病易感性危險因素(P<0.01)。見表2。

表2 兒童齲病易感性多因素Logistic回歸分析

2.4唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28與齲病病情進展的關系 齲病組淺齲0例，中齲8例，深齲26例；低齲0例，中齲15例，高齲19例。相關性分析顯示，唾液CA-Ⅵ與齲壞程度、DMFT情況呈負相關(r=-0.722、-0.763，P<0.01)；MMP-2、CCL28與齲壞程度呈正相關(r=0.700、0.766，P<0.01)，與DMFT情況呈正相關(r=0.723、0.720，P<0.01)。

2.5唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28單一及聯合預測兒童齲病易感性的ROC曲線分析 唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28預測兒童齲病易感性的曲線下面積(AUC)分別為0.763、0.738、0.794，三者聯合預測的AUC為0.894。

3 討論

CA-Ⅵ可催化生物體內二氧化碳和碳酸氫根離子的相互轉化，維持口腔pH平衡。本研究發現，齲病組唾液CA-Ⅵ低于無齲病組，提示唾液CA-Ⅵ與兒童齲病易感性有關。唾液pH值與兒童齲病發生密切相關。本研究結果顯示，唾液CA-Ⅵ與pH值呈正相關，唾液CA-Ⅵ越低，pH值越低。唾液CA-Ⅵ可調節酸堿平衡，維持牙齒礦物質過飽和，降低釉質溶解速度，保護牙齒，故唾液CA-Ⅵ降低會增加兒童齲病風險[7]。本研究還顯示，唾液CA-Ⅵ與齲壞程度、DMFT情況呈負相關，表明唾液CA-Ⅵ越低患兒齲病越嚴重。入院時唾液CA-Ⅵ預測齲病易感性的AUC為0.763，呈現出一定的預測價值。

MMP-2生理狀態下，以無活性酶原形式存在于牙本質中，唾液中含量較少。本研究顯示，齲病患兒唾液MMP-2高于無齲病者，提示MMP-2與兒童齲病易感性有關，多因素Logistic回歸分析證實其是兒童齲病易感性的危險因素。BARBOSA-RIBEIRO等[8]報道，MMP-2較高者具有更高水平的致病菌，從而影響牙周健康。牙齒齲壞脫礦后，牙本質暴露在酸性環境中，刺激MMP-2合成與分泌，對有機膠原基質起到降解作用，促進齲病進展[9]。本研究相關性分析顯示，兒童齲病齲壞程度與DMFT情況越嚴重，MMP-2越高。MMP-2升高時，口腔有害菌群處于生長優勢，有益菌生長受抑制，口腔微生態環境破壞，pH值降低，可通過影響嬰幼兒口腔微生物菌群參與齲病的發生與進展[10]。本研究唾液MMP-2預測兒童齲病易感性的AUC為0.738，提示單純依賴MMP-2預測價值有限。

CCL28是一種趨化因子，可誘導細胞膜通透性改變及穿孔的形成。本研究顯示，齲病組唾液CCL28高于無齲病組，還是兒童齲病易感性的危險因素，且兒童齲病越嚴重CCL28水平越高。JIANG等[11]報道，CCL28能在體外強烈抑制生活在生物膜中的變形鏈球菌，將重組CCL28質粒遞送至大鼠腮腺誘導唾液中CCL28水平升高，顯著減少大鼠牙菌斑中變形鏈球菌生長，提示CCL28具有預防齲齒作用。既往報道，CCL28具有雙向功能，除以上作用外，還可介導免疫球蛋白分泌嗜酸粒細胞等，并能趨化這些細胞至病變部位，使黏膜表面發生疏水性改變、牙體與黏膜表面聚集炎性介質，誘導菌斑形成[12]。本研究CCL28預測兒童齲病易感性的AUC為0.794，在單一指標中最高，但仍低于唾液CA-Ⅵ、MMP-2聯合CCL28預測的AUC。

綜上，唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28與口腔微生態pH平衡有關，CA-Ⅵ降低及MMP-2、CCL28升高引起的口腔酸性環境為兒童齲病易感性和病情進展提供了病理基礎，能為防治兒童齲病提供新思路。