膀胱癌患者PF4水平及AQP1、AQP3表達與疾病進展、預后的關系

劉建洪，黃 宇，劉貴喜，胡 旭，李 響

膀胱癌是泌尿系常見惡性腫瘤，具有較高的進展、復發率。血管新生在膀胱癌細胞增殖、侵襲等過程中發揮重要作用[1]。血小板因子4(PF4)對血管生成具有抑制作用[2]。腫瘤細胞需更多的水分子參與快速跨膜轉運，以滿足快速增殖的需要[3]。研究顯示，水通道蛋白(AQP)在多種腫瘤組織中高表達，且AQP抑制劑可有效抑制腫瘤轉移[4]。本研究旨在探討膀胱癌患者PF4水平及AQP1、AQP3表達與疾病進展、預后的關系。

1 對象與方法

1.1研究對象 選取2016年1月—2018年1月我院92例膀胱癌作為觀察組。納入標準：符合膀胱癌診斷標準；入組前未行任何抗腫瘤治療。排除標準：伴其他部位惡性腫瘤、血液系統疾病、自身免疫性疾病或嚴重肝腎功能損害者。另選擇我院同期體檢健康者50例作為對照組。2組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2隨訪 以手術開始為隨訪起點，按照《中國泌尿外科疾病診斷治療指南》[5]膀胱癌隨訪要求，以腫瘤復發和(或)因膀胱癌死亡視為預后不良。

1.3研究方法 比較2組血清PF4水平及觀察組癌、癌旁組織AQP1、AQP3表達情況；分析觀察組臨床病理特征與血清PF4及癌組織AQP1、AQP3的關系；采用Pearson相關性分析探討血清PF4水平與癌組織AQP1、AQP3表達量的相關性；比較預后不佳與預后良好患者血清PF4水平與癌組織AQP1、AQP3表達量；采用受試者工作特征(ROC)曲線分析血清PF4及癌組織AQP1、AQP3表達對膀胱癌不良預后的預測效能。

1.4檢測方法

1.4.1血清PF4檢測：采集2組靜脈血，3000 r/min離心15 min分離血清，采用酶聯免疫吸附試驗測定血清PF4水平。

1.4.2AQP1、AQP3檢測：手術獲取癌及癌旁組織用多聚甲醛浸泡固定，石蠟包埋，獲取5 μm厚連續切片；石蠟切片脫蠟脫水，PBS液沖洗3次，每次5 min；3%過氧化氫滴加于玻片上，室溫放置10 min；PBS液沖洗3次，每次5 min；加枸櫞酸鹽緩沖液10 min(95 ℃)，室溫冷卻30 min，PBS液沖洗3次，每次5 min；滴加封閉液，室溫放置20 min后用濾紙吸除多余液體；滴加一抗AQP抗體50 μl，4 ℃放置過夜；37 ℃復溫45 min；PBS液沖洗3次，每次5 min，滴加生物素標記的兔二抗，37 ℃放置60 min；PBS液沖洗3次，每次5 min，滴加新配制DAB，避光顯色10 min，10%蘇木精復染2 min，梯度乙醇脫水、二甲苯透明、封片。低倍鏡下找陽性細胞密集區，圖像分析系統檢測AQP1、AQP3陽性面積及強度灰度值，用陽性指數表示AQP1、AQP3陽性表達量，陽性指數=陽性面積/所測組織面積×陽性強度灰度值。

2 結果

2.12組血清PF4比較 觀察組血清PF4水平為(0.58±0.19)ng/ml，對照組為(0.22±0.07)ng/ml，觀察組高于對照組(P<0.01)。

2.2觀察組癌及癌旁組織AQP1、AQP3表達比較 觀察組癌組織AQP1、AQP3表達均高于癌旁組織(P<0.01)，見表1。

2.3不同臨床病理特征膀胱癌患者血清PF4及癌組織AQP1、AQP3表達 TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤最大徑>2 cm、有淋巴結轉移患者血清PF4水平與癌組織AQP1、AQP3表達分別高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤最大徑≤2 cm、無淋巴結轉移患者(P<0.01)，見表2。

表1 膀胱癌患者癌及癌旁組織AQP1、AQP3表達情況比較

表2 不同臨床病理特征膀胱癌患者血清PF4及癌組織AQP1、AQP3表達情況

2.4膀胱癌患者血清PF4與癌組織AQP1、AQP3相關性分析 膀胱癌患者血清PF4水平與癌組織AQP1、AQP3表達呈正相關(r=0.721、0.709，P<0.01)。

2.5不同預后膀胱癌患者血清PF4及癌組織AQP1、AQP3表達比較 預后不良患者血清PF4水平與癌組織AQP1、AQP3表達量均高于預后良好患者(P<0.01)，見表3。

表3 不同預后膀胱癌患者血清PF4及癌組織AQP1、AQP3表達比較

2.6血清PF4及癌組織AQP1、AQP3表達對膀胱癌不良預后的預測效能分析 血清PF4水平與癌組織AQP1、AQP3表達單獨及聯合預測膀胱癌不良預后的最佳截斷值分別為0.620 ng/ml、190.395、182.555、18.353，敏感度/特異度分別為0.885/0.833、0.654/0.864、0.962/0.742、0.923/0.955，曲線下面積分別為0.924、0.822、0.948、0.975。

3 討論

血管新生是膀胱癌發生發展、浸潤、轉移的關鍵因素[6]。PF4為內源性血管抑制因子，可通過多種途徑抑制腫瘤血管生成。既往報道證實，肝癌患者血清PF4顯著升高，且隨臨床分期的升高而升高，可將其作為肝癌診斷、分期的依據[7]。本研究發現，觀察組血清PF4水平高于對照組，且TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤最大徑>2 cm、有淋巴結轉移患者血清PF4水平分別高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤最大徑≤2 cm、無淋巴結轉移患者，證實PF4與膀胱癌的發生發展有關。

機體諸多活動存在水分子跨細胞膜轉運。AQP介導的被動跨膜轉運是水進出細胞重要途徑[8]。細胞內水經水通道外溢是細胞凋亡的開始，推測AQP表達可通過影響水分子運輸而影響細胞周期[9]。本研究顯示，TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤最大徑>2 cm、有淋巴結轉移患者癌組織AQP1、AQP3表達分別高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤最大徑≤2 cm、無淋巴結轉移患者，提示AQP1、AQP3與膀胱癌的發生及臨床病理特征密切相關。另外還發現，膀胱癌患者血清PF4水平與癌組織AQP1、AQP3表達呈正相關，提示PF4與AQP1、AQP3共同參與膀胱癌的發生、侵襲、轉移。

有研究表明，膀胱癌具有較高的組織間隙液壓，新生血管對許多高分子物質具有高通透性，這在惡性腫瘤的生長、侵襲、轉移中也發揮重要作用[10]。本研究證實血清PF4水平及癌組織AQP1、AQP3表達與膀胱癌患者上述臨床病理特征密切相關，故推測三者與患者預后有關。本研究顯示，預后不良患者血清PF4水平與癌組織AQP1、AQP3表達均高于預后良好患者，ROC曲線顯示，血清PF4水平與癌組織AQP1、AQP3表達聯合預測膀胱癌不良預后的敏感度、特異度分別為0.923、0.955，曲線下面積為0.975，提示聯合檢測對膀胱癌不良預后具有較高的預測價值。

綜上，膀胱癌患者血清PF4水平及癌組織AQP1、AQP3表達與臨床病理特征密切相關，可將三者聯合檢測作為預后預測指標。