TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 在早期胚胎停育中的意義

金力榮，楊麥青，徐洪波，魏燕妮

（1.昌邑市人民醫院產科，山東 昌邑 261300；2.昌邑市人民醫院病理科，山東 昌邑 261300；3.濰坊市人民醫院病理科，山東 濰坊 261041；4.昌邑市人民醫院輸血科，山東 昌邑 261300；5.濰坊護理職業學院健康管理系，山東 濰坊 261041）

早期胚胎停育（early embryonic arrest）又稱為稽留流產，是自然流產中的一種，是婦產科常見病，占所有臨床妊娠的15%[1，2]。近年來，隨著飲食、生活習慣的改變和電離輻射、環境異常等原因，早期胚胎停育的發病率逐漸升高，影響了廣大育齡女性的身心健康。早期胚胎停育發病機制非常復雜，目前尚不清楚[3，4]。尋求新的用于早期診斷和有效的干預治療的生物分子對于早期胚胎停育的研究和臨床治療意義重大。妊娠是機體同種移植中的特例，機體會通過免疫調節使母體對胚胎形成免疫耐受，而這個過程與機體細胞產生的多種細胞因子有關[5]。研究認為[6，7]，自身免疫系統的紊亂在流產過程中有重要的作用。轉化生長因子β（TGF-β）包括3 種亞型：TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3，這3 種亞基生物學效應基本相同，其中TGF-β1 作用最強。TGF-β1 是一種分子量為25 kD 的細胞因子，具有多種生物學功能，參與調節細胞分化、炎癥反應及免疫應答等[8，9]。輔助性T細胞分泌細胞因子的平衡是維持機體免疫功能的前提。輔助性T 細胞分為Th0、Th1、Th2，Th1 細胞主要分泌TNF-α、Interleukin（IL-2）、Interferon-γ 等，負責細胞免疫；Th2 細胞主要分泌Interleukin（IL-4）、Interleukin（IL-5）、Interleukin（IL-6）等，負責體液免疫[10，11]。TNF-α 有157 個氨基酸，是炎癥的中樞調節因子，對腫瘤和病毒具有抑制作用[12，13]。IL-4、IL-6介導體液免疫，是維持體內免疫平衡的典型細胞因子[13-16]。TGF-β1 在胚胎停育中的研究有過相關報道，但TGF-β1 聯合TNF-α、IL-4、IL-6 在早期胚胎停育中的報道甚少。為此，本實驗通過檢測早期胚胎停育患者血清中TGF-β1 表達水平的變化及與TNF-α、IL-4、IL-6 表達之間的關系，探究TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 在早期胚胎停育過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018 年1 月-2021 年8 月在昌邑市人民醫院產科就診并經過臨床診斷的35 例早期胚胎停育患者作為觀察組，均經彩超確診為宮內妊娠，胚胎停止發育。另選同期35 例健康產婦作為對照組，彩超提示孕囊內見胚芽組織、心管搏動。兩組年齡、停經天數、孕周、孕囊大小比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性，見表1。納入標準：①月經周期規律；②血常規、凝血功能正常；③經血液及彩超檢查排除染色體、解剖異常。排除標準：①無高血壓病、糖尿病、免疫性疾病；②顯性遺傳病史。所有受試者均由兩名產科醫師明確診斷，均對本研究知情同意并簽署知情同意書。

表1 兩組一般資料比較（）

表1 兩組一般資料比較（）

1.2 方法 所有受試者保證清晨空腹，抽取清晨空腹靜脈血5 ml，放入非抗凝試管中，以3000 r/min 離心10 min 后取血清做好標記，放入-80 ℃冰箱。檢測TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 的表達水平時，自冰箱內取出血清，冰上解凍，然后2000 r/min，離心15 min，取上清液，嚴格按照說明書用雙抗體夾心ABCELISA 法檢測。試劑盒購買于武漢賽培生物科技有限公司，使用美國全自動酶聯檢測儀450 nm 讀取OD 值，將OD 值代入標準曲線及標準公式計算出樣品濃度。

1.3 觀察指標 比較兩組血清TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 的表達水平；分析早期胚胎停育患者血清TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 表達與臨床指標的關系及血清TGF-β1 與TNF-α、IL-4、IL-6 表達的關系。

1.4 統計學處理 采用SPSS 17.0 處理本實驗數據，計量資料用（）表示，組間比較采取t檢驗；計數資料采用[n（%）]表示，行X2檢驗，相關關系采用Pearson 相關性分析，P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 表達水平比較觀察組血清TGF-β1、IL-4、IL-6 表達水平低于對照組，血清TNF-α 表達水平高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 水平比較（）

表2 兩組TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 水平比較（）

2.2 觀察組血清TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 的表達與臨床指標的關系 觀察組血清TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 表達水平分別與年齡、停經天數、孕周、孕囊大小無關，差異無統計學意義（P＞0.05），見表3。

表3 觀察組血清TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 與臨床指標的關系（n）

2.3 觀察組血清TGF-β1 與TNF-α、IL-4、IL-6 表達的關系 TGF-β1 的表達與IL-4（r=0.368）、IL-6（r=0.338）的表達呈正相關，與TNF-α 的表達呈負相關（r=-0.329），見表4、圖1。

圖1 TGF-β1 與TNF-α、IL-4、IL-6 的相關性

表4 觀察組血清TGF-β1 與TNF-α、IL-4、IL-6 表達的關系（n）

3 討論

早期胚胎停育是一種常見的產科疾病，其致病原因有遺傳因素、內分泌紊亂、免疫因素、社會心理因素等。因停止發育的孕囊滯留在宮腔未自然完全排出，可能會引起孕產婦的凝血功能障礙[17]。但早期胚胎停育的發病機制仍不明確，近年來隨著發病率的增加，嚴重影響廣大育齡女性的身心健康[1，17，18]。有研究指出[19]，妊娠子宮局部和母體全身免疫系統的功能對于維持正常的妊娠至關重要。

TGF-β1 是TGF-β 亞型的一種，機體多種細胞可以合成，參與細胞生長、代謝的多種生理病理過程。在機體活動中，其作用方式比較復雜，與多種其他細胞因子互相作用，產生的生物學效應也各不相同。有研究證實[20]，TGF-β1 參與正常妊娠成功的關鍵過程，包括蛻膜化、滋養層細胞的侵襲、血管生成和免疫調節等。由此可見，TGF-β1 對于維持正常的妊娠過程，起著重要的作用。本研究表明，TGFβ1 在早期胚胎停育患者血清中的表達比對照組低，印證了TGF-β1 的減少參與了早期胚胎停育的發生發展。

T 淋巴細胞對于妊娠的作用主要靠輔助性T 細胞，輔助性T 細胞包括Th0、Th1、Th2。Th1 分泌的細胞因子有TNF-α、IL-2、Interferon-γ 等，參與細胞免疫；Th2 分泌的細胞因子有細胞IL-4、IL-5、IL-6 等，參與體液免疫。在妊娠過程中Th2 參與體液免疫主要起保護作用，妊娠的成功需要Th1、Th2 的功能保持動態平衡，任何一方的免疫過度，都會影響到妊娠的結局[10，11]。研究表明，在懷孕期間，TNF-α 能夠影響激素的合成、胎盤結構和胚胎發育。TNF-α 水平升高與流產和先兆子癇相關，TNF-α 水平升高能影響胎兒營養的供應，還可能通過改變胎盤免疫調節因子的分泌而影響母嬰關系，進而影響母體免疫細胞細胞因子的表達[21，22]。TNF-α 水平的改變會進一步影響IL-4、IL-6 的表達，進而加重免疫紊亂的過程[23]。使用TNF-α 拮抗劑可在妊娠相關疾病中起到一定的臨床效果[21]。本研究發現，在早期胚胎停育患者血清中TNF-α 的表達增多，而IL-4、IL-6 的表達水平降低，說明TNF-α、IL-4、IL-6 介入了早期胚胎停育的發展，Th1、Th2 介導參與的免疫平衡被打破。

本研究發現，TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 的表達在早期胚胎停育患者中與年齡、停經天數、孕周、孕囊的大小均無關。TGF-β1 的表達與TNF-α、IL-4、IL-6 的表達變化有關，且TGF-β1 的表達與TNF-α的表達呈負相關，與IL-4、IL-6 的表達呈正相關，說明TGF-β1 與Th1、Th2 介導參與的免疫平衡相關；與IL-4、IL-6 可發揮協同作用。但是TGF-β1 是如何引發的Th1、Th2 介導參與的免疫平衡，本研究尚未探究，今后將從該方向進一步研究。

綜上所述，TGF-β1、IL-4、IL-6 在早期胚胎停育患者血清中的表達降低，而TNF-α 表達升高，TGF-β1 的表達與TNF-α 的表達呈負相關，與IL-4、IL-6 的表達分別呈正相關。隨著分子生物技術的不斷提高，TNF-α 拮抗劑可能會有效地應用于早期胚胎停育的治療。