薄層色譜法檢測聚維酮K90中肼*

吳紅洋，詹宇杰，李莎，韓海燕，武靜文，范能全

（重慶市食品藥品檢驗檢測研究院，重慶 401121）

聚維酮K90是以單體乙烯基吡咯烷酮為原料，通過本體聚合、溶液聚合等方法得到的均聚物，黏合性、增溶性、可壓性均良好，廣泛應(yīng)用于食品、藥品、化妝品等行業(yè)［1-2］。肼又稱聯(lián)氨，劇毒，具有強致癌性，為聚維酮K90在生產(chǎn)過程中加入的對人體有害的偶氮引發(fā)劑［3-4］。美國國家環(huán)境保護局等已將其列入優(yōu)先控制污染物名單［5］。目前，主要采用薄層色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法、分光光度法等方法檢測肼［6-10］，但肼無紫外吸收，故采用后3種方法需進行衍生化或萃取等前處理。薄層色譜法前處理簡單，操作簡便，熒光斑點集中［11-12］。肼與水楊醛反應(yīng)可生成水楊醛吖嗪，故本研究中以水楊醛吖嗪為對照品，建立了檢測聚維酮K90中肼的薄層色譜法。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Visualizer/DAX252型薄層色譜成像儀（瑞士Camag公司）；XPE205型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司，精度為0.01 mg）；Multifuge X1R型高速冷凍離心機（賽默飛世爾科技＜中國＞有限公司）；HHS-21-8型恒溫水浴鍋（上海博迅實業(yè)有限公司）；GF254薄層層析硅膠板（以下簡稱薄層板）、RP-2 GF254薄層板、RP-18 GF254薄層板（德國Merck公司）。

1.2 試藥

水楊醛吖嗪對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為190119-201501，純度為97.3%）；聚維酮K90（企業(yè)A，批號為013；企業(yè)B，批號為021；企業(yè)C，批號為064）；甲醇、乙醇、二氯甲烷、水楊醛、甲苯均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

取水楊醛吖嗪對照品0.045 0 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加甲苯溶解并定容，即得對照品貯備液；精密吸取上述溶液0.5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲苯溶解并定容，配制成質(zhì)量濃度為9 μg/mL的對照品溶液。

取聚維酮K90 2.5 g，精密稱定，置50 mL離心管中，加超純水25 mL，攪拌使溶解。加5%水楊醛甲醇溶液0.5 mL，搖勻，置60℃水浴中加熱15 min，放冷至室溫。精密吸取甲苯2.0 mL置離心管中，密塞，劇烈振搖，離心（轉(zhuǎn)速為4 000 r/min）10 min，取甲苯層上清液，即得供試品溶液。

2.2 色譜條件優(yōu)化

薄層板：以甲醇-水（4∶1，V/V）為展開系統(tǒng)，精密吸取2.1項下對照品溶液與供試品溶液各10 μL，分別點于GF254薄層板、RP-2 GF254薄層板、RP-18 GF254薄層板，預飽和30 min，展開至溶劑前沿到達薄層板3/4處，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果RP-2 GF254薄層板和RP-18 GF254薄層板的比移值適中，分離效果較好。色譜圖見圖1。

1，4，5.對照品溶液2，3，6.供試品溶液（批號為021）A.GF254薄層板B.RP-2 GF254薄層板C.RP-18 GF254薄層板圖1 不同薄層板薄層色譜圖（365 nm）1，4，5.Reference solution 2，3，6.Test solution（batch No.：021）A.GF254 TLC plate B.RP-2 GF254 TLC plate C.RP-18 GF254 TLC plateFig.1 TLC chromatograms with different TLC plates（365 nm）

展開系統(tǒng)：以甲醇-水為展開系統(tǒng)，精密吸取2.1項下對照品溶液與供試品溶液各10 μL，分別點于RP-2 GF254薄層板和RP-18 GF254薄層板，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。當展開系統(tǒng)為甲醇-水（2∶1，4∶1，V/V）時，RP-2 GF254薄層板展開后比移值分別為0.31和0.62，前者比移值適中；當展開系統(tǒng)為甲醇-水（4∶1，7∶1，V/V）時，RP-18 GF254薄層板展開后比移值分別為0.220和0.346，對照品溶液與供試品溶液色譜圖斑點的比移值均適中，分離度均較好。綜合考慮，展開系統(tǒng)選擇甲醇-水（2∶1，V/V）。色譜圖見圖2。

進樣量：以甲醇-水（2∶1，V/V）為展開系統(tǒng)，吸取2.1項下對照品溶液和供試品溶液各5，10，15 μL，分別點于同一RF-2 GF254薄層板，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。點樣量為5 μL，熒光斑點不明顯；點樣量為15 μL，點樣時間較久；點樣量為10 μL，點樣時間適中，熒光斑點集中、清晰，故點樣量選擇10 μL。色譜圖見圖3。

2.3 驗證試驗

1，4，6，8.對照品溶液 2，3，5，7.供試品溶液（批號為021）A1，A2.RP-2 GF254薄層板［甲醇-水（2∶1，4∶1，V/V）］B1，B2.RP-18 GF254薄層板［甲醇-水（4∶1，7∶1，V/V）］圖2 不同展開系統(tǒng)色譜圖（365 nm）1，4，6，8.Reference solution 2，3，5，7.Test solution（batch No.：021）A1，A2.RP-2 GF254 TLC plate［methanol-water（2∶1，4∶1，V/V）］B1，B2.RP-18 GF254 TLC plate［methanol-water（4∶1，7∶1，V/V）］Fig.2 TLC chromatograms with different development systems（365 nm）

1，4，5.對照品溶液2，3，6.供試品溶液（批號為021）A.5 μL B.10 μL C.15 μL圖3 不同點樣量薄層色譜圖（365 nm）1，4，5.Reference solution 2，3，6.Test solution（batch No.：021）A.5 μL B.10 μL C.15 μLFig.3 TLC chromatograms with different sample volumes（365 nm）

精密吸取2.1項下對照品溶液和供試品溶液各10 μL，分別點于同一RP-2 GF254薄層板上，以甲醇-水（2∶1，V/V）為展開系統(tǒng)，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。在對照品溶液色譜相應(yīng)位置處，2批（批號分別為013和064）供試品溶液未出現(xiàn)熒光斑點，1批（批號為021）供試品溶液的熒光斑點弱于對照品溶液。色譜圖見圖4。

1，3，4.供試品溶液（批號分別為013，021，064）2.對照品溶液圖4 驗證試驗薄層色譜圖（365 nm）1，3，4.Test solution（batch No.：013，021，064）2.Reference solutionFig.4 TLC chromatograms of the verification test（365 nm）

3 討論

3.1 供試品溶液制備方法選擇

由于聚維酮K90黏度較大，加水不能直接溶解，故前處理主要考察振搖、攪拌、超聲3種溶解方法。結(jié)果聚維酮K90與水接觸后迅速包裹成團狀，振搖和超聲均無法使之迅速溶解，攪拌能最大程度地破壞分子間的作用力，使樣品在短時間內(nèi)充分溶解。

3.2 硅膠薄層板選擇

由于水楊醛吖嗪在紫外光燈（365 nm）下可觀察到熒光斑點，故本研究中選擇帶有熒光劑的GF254薄層板、RP-2 GF254薄層板、RP-18 GF254薄層板。結(jié)果GF254薄層板色譜圖中熒光斑點的比移值超過0.8，且熒光斑點接近溶劑前沿位置；RP-2 GF254薄層板和RP-18 GF254薄層板色譜圖中熒光斑點的比移值為0.2～0.8，符合2020年版《中國藥典（四部）》通則0502中對比移值的要求。

3.3 展開系統(tǒng)選擇

展開系統(tǒng)的極性越大，對化合物的洗脫能力就越大，薄層板上主要熒光斑點離基線越遠，比移值就越大［13-14］。本研究中主要以甲醇-水為展開系統(tǒng)，通過改變二者的比例，考察展開系統(tǒng)對薄層色譜的影響。結(jié)果不同薄層板的比移值各不同，分離效果也不同。當甲醇-水比例逐漸增大時，RP-2 GF254薄層板和RP-18 GF254薄層板展開后的比移值均逐漸增大。調(diào)節(jié)甲醇-水的比例在適當范圍內(nèi)，RP-2 GF254薄層板和RP-18 GF254薄層板展開后的比移值均可達到0.3，符合2020年版《中國藥典（四部）》要求，對照品溶液與供試品溶液色譜圖中熒光斑點的比移值適中，分離度均較好，提示RP-2 GF254薄層板和RP-18 GF254薄層板均可用于聚維酮K90中肼的檢測。為減少有機溶劑對身體的傷害，本研究中最終以甲醇-水（2∶1，V/V）為展開系統(tǒng)，薄層板采用RP-2 GF254。

3.4 點樣量選擇

點樣量過少，熒光斑點不明顯，尤其含量較少的供試品溶液的薄層色譜結(jié)果偏差較大；點樣量過多，點樣時間較久，且多次點樣時點樣中心不易重合，造成斑點異常，色譜圖質(zhì)量不好。