高效液相色譜法同時測定前胡藥材中白花前胡甲素和白花前胡乙素含量*

邱明鳴，朱育鳳，倪昌榮

（江蘇省中醫院，江蘇 南京 210029）

前胡為常用化痰止咳藥，始載于《名醫別錄》，臨床應用歷史悠久，具有降氣化痰、散風清熱功效，主要用于治療痰熱喘滿、咯痰黃稠、風熱咳嗽痰多等［1］。前胡為傘形科植物白花前胡Peucedanum praeruptorumDunn的干燥根，含有香豆素類、揮發油、黃酮、色原酮、苯丙衍生物等化學成分［2-7］，具有鎮咳祛痰、抗心腦缺血、抗心衰、抗氧化、降血壓等作用［8-9］。姚蓉等［10］對湖南市場的前胡藥材進行檢測，結果14批藥材中含量符合藥典標準的僅占35.71%。市售前胡藥材按照2020版《中國藥典（一部）》含量測定方法進行檢測，大部分達不到藥典要求，說明現行標準需要改進和完善。本研究中收集安徽、浙江、四川、湖南等地產的31批前胡藥材樣品，以白花前胡甲素和白花前胡乙素為指標性成分，參考2020年版《中國藥典（一部）》前胡含量測定項下方法，建立了測定上述2種成分含量的高效液相色譜法，為制訂前胡藥材的質量標準提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國Agilent公司），配有G1312B型二元泵、G1367E型高性能自動進樣器、G1316A型柱溫箱、G4212B型二極管陣列檢測器、G1322A型脫氣機；AX224ZH/E型電子天平（常州奧豪斯儀器有限公司，精度為十萬分之一）；KQ-1000型醫用超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率為300 W，頻率為40 kHz）。

1.2 試藥

白花前胡甲素標準品（批號為B20035），白花前胡乙素標準品（批號為B20037），均購自上海源葉生物科技有限公司，純度均不低于98%；甲醇（色譜純，Merck Lichrosolv Reag.ph eur，批號為jc20213088）；其他試劑均為分析純，水為純凈水。前胡藥材樣品經江蘇省中醫院朱育鳳主任中藥師鑒定為正品，樣品信息見表1。

表1 31批前胡藥材樣品信息Tab.1 Information of 31 batches of Peucedani Radix samples

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Agilent Eclipse-XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：水-甲醇（25∶75，V/V）；流速：1 mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：321 nm；進樣量：10 μL。理論板數按白花前胡甲素峰計應不低于3 000，色譜圖見圖1。可見，供試品溶液色譜中，在與混合對照品溶液色譜相應保留時間處有色譜峰出現。

1.白花前胡甲素2.白花前胡乙素A.混合對照品溶液B.供試品溶液圖1 高效液相色譜圖1.Praeruptorin A 2.Praeruptorin B A.Mixed reference solution B.Test solutionFig.1 HPLC chromatograms

2.2 溶液制備

取前胡藥材樣品粉末（過3號篩）0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷25 mL，密塞，稱定質量，超聲（功率為250 W，頻率為33 kHz）10 min，放冷，再稱定質量，用三氯甲烷補足減失的質量，搖勻，濾過；精密量取續濾液5 mL，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移至25 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，離心（轉速為3 000 r/min）10 min，取上清液，用0.22 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。取白花前胡甲素標準品1.49 mg和白花前胡乙素標準品1.45 mg，精密稱定，加甲醇5 mL使溶解，配制成質量濃度分別為0.298 mg/mL和0.290 mg/mL的混合對照品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察：精密吸取2.2項下混合對照品溶液適量，按倍比稀釋法（分別稀釋2倍、10倍、50倍、100倍、625倍）稀釋成系列濃度對照品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，以對照品溶液質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標、色譜峰峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程為Y甲=16 504X甲+9.579 3（r=0.999 8，n=5）和Y乙=15 112X乙+28.403 1（r=0.999 9，n=5）。結果表明，白花前胡甲素和白花前胡乙素質量濃度分別在3.880 2～248.333 3 μg/mL和1.888 0～120.833 3 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取2.2項下混合對照品溶液10 μL，按2.1項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果白花前胡甲素和白花前胡乙素峰面積的RSD分別為0.22%和0.15%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取樣品（批號為20201126）0.5 g，精密稱定，按2.2項下方法制備供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10，12 h時按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果白花前胡甲素和白花前胡乙素峰面積的RSD分別為1.37%和1.08%（n=7），表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

重復性試驗：取樣品（批號為20201126）0.5 g，精密稱定，共6份，按2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算含量。結果白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量分別為1.16%和0.15%，RSD分別為0.57%和0.82%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為20201126）粗粉（過3號篩）0.5 g，精密稱定，共6份，分別加入白花前胡甲素和白花前胡乙素對照品適量，按2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算回收率。結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果（n=6）Tab.2 Results of the recovery test（n=6）

2.4 樣品含量測定

取31批前胡藥材樣品粗粉（過3號篩）各0.5 g，精密稱定，每批各取3份，按2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算干燥樣品中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量。結果見表3。

3 討論

本研究中收集的31批前胡藥材樣品來自安徽、浙江、四川、湖南等地，所建立的含量測定方法與2020年版《中國藥典（一部）》前胡含量測定項下方法一致，規定按干燥品計算，含白花前胡甲素（C21H22O7）不得少于0.90%，含白花前胡乙素（C24H26O7）不得少于0.24%。由表3可知，31批前胡藥材樣品中，有24批白花前胡甲素含量合格，合格率為77.42%；僅10批白花前胡乙素含量合格，合格率為32.26%；白花前胡甲素和白花前胡乙素含量均合格的僅9批，占29.03%。按現行標準，70.97%的前胡藥材判定為劣藥，不能使用，前胡藥材合格率低，無法滿足臨床用藥需求。

表3 前胡藥材樣品含量測定結果（%，n=3）Tab.3 Results of content determination of praeruptorin A and praeruptorin B in the Peucedani Radix samples（%，n=3）

若以2020年版《中國藥典（一部）》前胡含量檢測項下要求的白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量之和（1.14%）為依據，則有23批合格，占74.19%，合格率大大提高，可緩解臨床用藥問題，故建議《中國藥典（一部）》中以白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量之和1.14%設限，修訂前胡含量測定項下標準。類似的不同產地藥材質量的研究還有很多［11-13］，部分研究是在實際工作中發現問題，并進一步進行驗證。如在實際工作中發現蓮子心含量合格率低，王協和等［14］也做了相關研究，2020年版《中國藥典（一部）》將蓮子心的含量測定成分從蓮心堿修訂為甲基蓮心堿后，蓮子心含量基本能合格。王琦等［15］分析了大孔吸附樹脂和離子交換樹脂在藥品檢驗標準中的應用情況，提出《中國藥典》藥品標準中需進一步規范樹脂的使用，以提高標準的可行性。

綜上所述，市售前胡藥材質量參差不齊，合格率低，需要一個切合實際的質量控制方法來評價和控制其質量，以滿足臨床用藥需求，可為2025年版《中國藥典（一部）》中前胡相關標準的修訂提供數據支持。