液相色譜-質譜法同時測定水果和蔬菜中28種農藥的殘留量

李 倩，王朝杰

(1 浙江銳翱檢測技術服務有限公司，浙江 杭州 311300；2 臨安區產品質量監測中心，浙江 杭州 311300)

我國蔬菜生產中廣泛使用多種農藥，過量的農藥殘留在蔬菜和水果中，隨著我們的飲食進入到人體中，導致人體腹瀉性疾病等，對人體健康極為不利[1-2]。由于使用的農藥種類繁多，單獨檢測耗費大量的人力物力，效率低。因此，建立一種適用于多種基質，能夠同時檢測多種農藥殘留的方法非常必要。傳統的氣相色譜法(GC)、液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質譜聯用法 (GC-MS)等檢測方法，檢測的精準性和全面性有限、覆蓋的農藥數量較少，且操作過程繁瑣、有機溶劑使用量較大，成本較高[3-6]，且很多農藥不適合用氣相色譜分析。本試驗參考國家標準《水果和蔬菜中450種農藥及相關化學品殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》(GB/T20769-2008)上的檢測方法并進行了優化，根據國內外殘留限量的要求，建立了蔬菜中28種農藥的高效液相色譜-串聯質譜 (LC-MS)同時檢測的高通量方法，實現了短時間內批量樣品的多種類農殘準確定性定量檢測。

1 實 驗

1.1 儀器與試劑

1.1.1 實驗儀器

LA-259安捷倫三重串聯四級桿液質聯用儀；Heating Bath B-100旋轉蒸發儀；KQ5200DE超聲波清洗機；HR2168制樣攪拌機；HC-3108離心機；布奇勻漿機；睿科全自動氮吹儀；水浴鍋。

1.1.2 實驗試劑

甲醇(色譜純)、乙腈(色譜純)、氯化鈉(分析純)、超純水、甲苯(優級純)、無水硫酸鈉(分析純)、農藥及相關化學品有證標準溶液：100 μg/mL，1 mL；基質混合標準工作溶液：農藥及相關化學品基質混合標準工作溶液是用空白樣品基質溶液配成不同濃度的基質混合標準工作溶液，用于做標準工作曲線，現配現用。

1.1.3 耗材

微孔過濾膜(尼龍)、安譜氨基固相萃取柱。

1.2 樣品預處理

1.2.1 試樣提取

稱取20 g試樣于80 mL離心管中，加入40 mL乙腈，用勻漿機15000 r/min勻漿提取1 min，加入5 g氯化鈉，再勻漿提取1 min，在3800 r/min 離心5 min，取上清液20 mL (相當于10 g試樣量)，在40 ℃水浴中旋轉濃縮至約1 mL，待凈化。

1.2.2 凈化

在氨基柱中加入約 2 cm 高無水硫酸鈉，并放入下接雞心瓶的固定架上。加樣前先用4 mL乙腈+甲苯(3+1)預洗柱，當液面到達硫酸鈉的頂部時，迅速將樣品濃縮液轉移至凈化柱上，并更換新接收瓶接收。再每次用2 mL乙腈+甲苯(3+1) 洗滌三次，并將洗滌液移入柱中。在柱上加上50 mL貯液器，用25 mL乙腈+甲苯(3+1)洗脫農藥及相關化學品，合并于雞心瓶中，并在 40 ℃水浴中旋轉濃縮至約0.5 mL。將濃縮液置于氮氣吹干儀上吹干，迅速加入1 mL的乙腈+水(3+2)，混勻，經0. 2 μm濾膜過濾后進行液相色譜-串聯質譜測定。

1.3 色譜條件的選擇

(1)色譜柱：ZORBAX SB-C18，3.5 μm，100 mm×2.1 mm(內徑)；

(2)流動相及梯度洗脫條件見表1 和表2。

表1 正離子掃描色譜條件流動相及梯度洗脫條件

表2 負離子掃描色譜條件流動相及梯度洗脫條件

柱溫：40 ℃；流速：200 μL/min；進樣量：10 μL；離子源：AJS ESI；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：MRM；電噴霧電壓：4000 V；流速：10 L/min；干燥氣溫度：250 ℃；鞘氣溫度：250 ℃；鞘氣流速：11 L/min。

2 結果與討論

2.1 待測農藥的質譜圖及相關參數

經過反復試驗并參考有關文獻，得到28種農藥的最佳質譜條件，結果詳見圖1～圖3，表3～表5。

圖1 A組19種農藥混標的總離子流圖

表3 A組19種農藥混標的質譜參數

圖2 B組7種農藥混標的總離子流圖

圖3 C組2種農藥混標的總離子流圖

表5 C組2種農藥混標的質譜參數

2.2 各農殘組分的線性方程與檢出限

在進行液相色譜-質譜檢測農藥殘留量方法的線性關系、檢出限實驗中，由于存在基質效應，會影響化合物定量分析的準確度及重現性，故采用空白基質，配置不同濃度的混合標液進行測定，以各農藥的峰面積對質量濃度繪制工作曲線，得到線性回歸方程及相關系數。以3倍的信噪比(S/N)對應的空白樣品添加的質量濃度作為方法的檢出限(LOD)，結果見表6。

表6 各農殘組分的線性方程與檢出限結果表

2.3 方法的精密度與回收率

本實驗室對未檢出的陰性樣品橙子進行三個濃度的加標實驗，每個濃度6次平行，模擬加標回收試驗，測定結果見表7。

表7 各農殘組分的精密度和回收率結果

續表4

如表7所示，在橙子陰性樣品中添加三個濃度的農藥進行加標回收試驗，測得加標回收率在60%～120%之間，實測數據的最大相對標準偏差RSD<15%。結果表明此方法具有良好的精密度和準確度，能夠滿足農藥殘留檢測的要求[7]。

3 結 論

農藥具有除草、防治病蟲害、提高作物產量等作用，但是農藥的不規范使用，會使農產品存在農藥殘留超標的風險，對人體和環境造成危害[8]。本文參考國家標準《水果和蔬菜中450種農藥及相關化學品殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》[9](GB/T20769-2008)上的檢測方法并進行了優化，根據國內外殘留限量的要求，建立了蔬菜中28種農藥的高效液相色譜-串聯質譜 (LC-MS)同時檢測的方法，能夠完成短時間內批量樣品的多種類農殘準確定性定量檢測。經實驗證明該方法分離度強、靈敏度高且選擇性好，可以對復雜基質中的痕量物質進行檢測分析，對未來農藥殘留檢測分析中具有重要的作用。