QuEChERS-GC-MS/MS測定茶葉中吡唑醚菌酯、嘧菌酯的殘留量

2022-06-14 02:01:28梁少東伍國怡

廣州化工 2022年10期

梁少東，伍國怡，張銓

(北海市食品藥品檢驗所，廣西北海 536000)

吡唑醚菌酯、嘧菌酯屬于甲氧基丙烯酸類殺菌劑，其主要作用于真菌的線粒體呼吸，從而抑制真菌生長或殺死。因其具有高效、低毒的特點，其使用量在全球逐漸增長[1]，在我國茶葉種植中也有使用。我國對茶葉中的吡唑醚菌酯最大允許殘留量為10 mg/kg，但對茶葉中嘧菌酯的最大允許殘留量卻沒有規定[2]。日本肯定列表制度中嘧菌酯在茶葉中的最大允許殘留量為10 mg/kg，歐盟對茶葉中的嘧菌酯最大允許殘留量為0.1 mg/kg。目前我國氣質聯用法檢測茶葉的國標中[3-4]，其檢測的農藥并沒有包括吡唑醚菌酯和嘧菌酯。因此，本研究在借鑒檢測甲氧基丙烯酸類殺菌劑[5-9]以及茶葉中檢測農殘文獻方法[10-13]的基礎上，建立了一種利用QuEChERS凈化技術，快速測定茶葉中的吡唑醚菌酯和嘧菌酯的方法。

1 實驗

1.1 儀器、試劑與材料

TQ-8040NX氣相色譜-串聯質譜儀，日本島津公司；XSE205電子天平，瑞士METTLER TOLEDO公司；ST40R高速冷凍離心機，Thermo scientific。

乙腈，美國Fisher公司；乙酸，上海安譜公司；吡唑醚菌酯(100 μg/mL，1.2 mL)、嘧菌酯(100 μg/mL，1.2 mL)標準物質，壇墨質檢科技股份有限公司；水為娃哈哈純凈水。

樣品來源市場抽檢茶葉15份。

1.2 標準溶液的配制

取吡唑醚菌酯、嘧菌酯標準物質各1.0 mL置于10 mL棕色容量瓶中，乙腈定容至刻度，配成濃度為10 μg/mL的標準儲備液；取適量吡唑醚菌酯、嘧菌酯標準混合液，用乙腈稀釋，配制成0.01,0.02,0.05,0.10,0.20 μg/mL系列濃度。取1 mL空白基質溶液氮氣吹干，加入1 mL相應濃度的混合標準溶液復溶，過0.22 μm微孔濾膜。基質混合標準溶液應現用現配。

1.3 樣品處理

稱取2.00 g試樣于50 mL塑料離心管中，加10 mL水渦旋混勻，靜置10 min。加入10 mL乙腈-乙酸(99:1)，6 g無水硫酸鎂、1.5 g醋酸鈉及1顆陶瓷均質子，劇烈振蕩1 min，4200 r/min離心5 min。吸取8 mL上清液加到含1.2 g硫酸鎂、400 mg PSA、400 mg C18及400 mg GCB的塑料離心管中，渦旋混勻1 min。4200 r/min離心5 min，取上清液0.22 μm過微孔濾膜，上GC-MS/MS測試。

1.4 色譜條件

(1)SH-Rxi-5Sil MS 色譜柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；進樣口溫度280 ℃；載氣為高純氦氣，流速1.0 mL/min;恒流模式；不分流進樣；進樣量1 μL。色譜柱升溫溫度：初始溫度100 ℃，以30 ℃/min升至200 ℃，10 ℃/min升至300 ℃，保持10 min。

(2)質譜條件:將吡唑醚菌酯，嘧菌酯進行全掃描，確定母離子，再給予一定的碰撞能量，掃描二級子離子，選取豐度較高的2個子離子分別為定量離子對和定性離子對，最后以MRM模式優化最佳碰撞能量。優化后的質譜參數及保留時間見表1。

表1 質譜參數

(3)吡唑醚菌酯、嘧菌酯基質標準溶液色譜圖見圖1。

圖1 吡唑醚菌酯、嘧菌酯基質標準溶液色譜圖(0.10 μg /mL)

2 結果與討論

2.1 提取凈化方法

2.1.1 基質效應

基質效應的定義：“樣品中除目標分析物以外的其他成分對待測物測定值的影響”。基質效應可以是基質抑制，也可以是基質增強。在GC-MS/MS中，由于基質的影響，容易產生基質增強效應[14]。茶葉基質復雜，增加凈化步驟容易造成待測農藥的損失。因此本實驗采用茶葉空白樣品提取液，配制基質曲線，外標法定量。

2.1.2 樣品提取溶液

茶葉中農藥殘留的提取，提取液種類較多，主要有乙腈、丙酮、乙酸乙酯、正己烷等。乙腈作為提取劑時，相對其它溶劑，基質本底比較干凈，凈化后的溶液也較少色素殘留。而國標提取處理中，有用乙腈直接提取，也有用乙腈-乙酸(99:1)直接提取。因此，本文主要研究乙腈直接提取與乙腈-乙酸(99:1)提取對回收率的影響作比較。經實驗表明，吡唑嘧菌酯、嘧菌酯在乙腈和乙腈-乙酸(99:1)兩種提取體系中，兩種農藥總體回收率都不高，尤其吡唑醚菌酯回收率不到20%，嘧菌酯回收率在65%左右。但吡唑嘧菌酯在乙腈-乙酸(99:1)體系中回收率比乙腈體系中回收率高，嘧菌酯回收率相差不大，故提取溶劑選擇了乙腈-乙酸(99:1)。

2.1.3 樣品加水浸泡時間

現行國標中對茶葉前處理過程中，有選擇加水浸泡乙腈提取，也有不加水浸泡乙腈直接提取。因此，本文僅就吡唑醚菌酯、嘧菌酯是否加水浸泡，以及加水浸泡時間提取對回收率的影響作研究。經實驗表明，加水浸泡后，回收率比不加水回收率明顯要高。尤其是吡唑醚菌酯加水浸泡后，回收率明顯提高。故本研究前處理過程選擇加水浸泡后乙腈-乙酸(99:1)提取。為選擇最佳的浸泡時間，本實驗將茶葉樣品在同樣的蒸餾水浸泡，分別在10,20,30 min作檢測。比較發現，浸泡10 min，20 min，30 min提取，回收率沒有統計學上的顯著差異。綜合提取時間和回收率的影響，故選擇樣品在提取前加水浸泡10 min。

因為茶葉成品通常是干樣，加水浸泡可以使茶葉充分潤濕，加大了樣品與水的接觸面積，增加提取溶劑乙腈的親和度，更加容易形成分層。乙腈加入醋酸，可以和乙酸鈉形成弱酸性緩沖體系，弱酸性提取對某些農藥不容易造成分解，故最終前處理方法選擇樣品加水浸泡10 min后，乙腈-乙酸(99:1)提取。

2.2 方法的線性、檢出限、定量限、回收率和精密度

以濃度為橫坐標，定量離子對的峰面積為縱坐標繪制標準曲線，結果顯示在相應濃度范圍內，定量離子對的峰面積于質量濃度呈良好的線性關系，相關系數R2均在0.997以上。以S/N=3計算檢出限，S/N=10計算定量限，結果見表2。在陰性茶葉中分別添加3個水平的待測物，每個水平平行測定6次，考察方法的回收率和精密度。結果顯示，方法回收率為75.2%～91.0%，RSD為2.12%～7.14%(n=6)。結果見表2。