大鼠自然戒斷和小鼠催促戒斷模型評價宣肺止嗽合劑的軀體依賴作用

宋月紅 陳 瑛 張晨熙 賈艷麗 董福天 韓 剛 董延生 宋敏平▲

1.甘肅普安制藥股份有限公司，甘肅武威 733006；2.國科賽賦河北醫藥技術有限公司，河北廊坊 065500

藥物依賴性是由于長期或反復使用某種藥物，與機體相互作用而產生對個體精神和軀體上的依賴性[1]，反復用藥會使機體不斷進行新陳代謝調整，以適應藥物作用下的生理活動，機體一旦適應，中斷用藥后會導致機體產生不適或心理上的強烈需求，長期處于強烈用藥欲望會使神經細胞和腦機能受損，生理及代謝活動發生嚴重絮亂或病理性改變，出現戒斷癥狀[2-4]。

宣肺止嗽合劑是臨床上比較常用的止咳中成藥，以宣肺止咳化痰為主[5]。其處方中的蜜罌粟殼含嗎啡等生物堿，而嗎啡是臨床上常用的可致依賴性的藥物[6-12]。本課題組前期研究（未發表）顯示，宣肺止嗽合劑（等效為人臨床擬用劑量的1、2、4 倍）在大鼠條件性位置偏愛模型上未表現出精神依賴性，為進一步判斷其是否有軀體依賴隱患，根據《藥物非臨床依賴性研究技術指導原則》[13]相關要求，本實驗以鹽酸嗎啡作為陽性對照藥物，考察了宣肺止嗽合劑的軀體依賴性，以期為臨床安全用藥提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

自然戒斷實驗：SPF 級SD 大鼠60 只，雌雄各半，5～7 周齡，體重160～230 g。催促戒斷實驗：SPF 級Balb/c 小鼠60 只，雌雄各半，3～6 周齡，體重16～24 g，動物均購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，生產許可證號：SCXK（京）2016-0006，實驗動物使用許可證號：SYXK（冀）2020-010。飼養環境：屏障動物房，12 h/12 h 晝夜自然規律，通風良好，溫度20～26℃，濕度40%～70%，飲水和飼料供動物自由攝取。本研究實驗設計等遵循國科賽賦河北醫藥技術有限公司實驗動物倫理委員會相關規定。

1.2 藥品與儀器

宣肺止嗽合劑（甘肅普安制藥有限公司，批號：CP002200106，規格：200 ml/支，6 支/盒）；鹽酸嗎啡注射液（morphine hydrochloride injection，Mor）[東北制藥集團沈陽第一制藥有限公司，批號：190202-1（有效期至2024-01-31），規格：10 mg/ml，購自華潤河北醫藥有限公司，藥品使用獲得河北省藥品監督管理局審批]；氯化鈉注射液（河北天成藥業股份有限公司，批號：1150442，規格：100 ml/瓶）；電子天平（日本島津公司，型號：AEL-200，精密度0.1 mg）。

1.3 研究方法

1.3.1 大鼠自然戒斷試驗

1.3.1.1 分組與給藥 根據體重隨機分為五組，每組12 只，分別為溶劑對照組，低、中、高劑量宣肺止嗽合劑組和鹽酸嗎啡組，本試驗設置的低、中、高劑量宣肺止嗽合劑組根據原液中嗎啡實際濃度折算，分別為原液的1/5 倍、1/2 倍和1 倍，約與人臨床擬用劑量的2.4、6.0、12.0 倍等效[14]。給藥周期和頻率均為連續30 d，3 次/d。各組給藥途徑、劑量、制劑、濃度、體積見表1。

表1 大鼠自然戒斷模型評價宣肺止嗽合劑的軀體依賴作用劑量設計表

1.3.1.2 戒斷評分 從第31 天（即自然戒斷第1 天）開始，觀察末次給藥后12、18、36、42、60、66、84、108、132 及156 h 的癥狀，按照以下評分標準對各組大鼠的戒斷癥狀進行評分。①跳躍、濕狗樣搖體、扭體、搖頭、打哈欠、掃尾。0 分=無；1 分=1～5 次；2 分=6～10 次；3 分>10 次。②齒顫、咀嚼（次與次之間至少間隔3 s）、舔生殖器。0 分=無；1 分=1～10 次；2 分=11～20 次；3 分>20 次。③流涎、流淚、豎毛、激惹、眼瞼下垂、腹瀉。0 分=無；1 分=輕度“+”；2 分=中度“++”；3 分=重度“+++”。將動物放入戒斷觀察箱中觀察出現上述癥狀的次數或程度，根據上述標準對相應癥狀進行評分，匯總所有癥狀的得分即為該動物的戒斷癥狀評分[14-17]。

1.3.1.3 體重變化 自然戒斷第1～14 天每天測定1 次體重，體重變化為戒斷期間體重與末次給藥當天體重的差值。

1.3.2 小鼠催促戒斷實驗

將小鼠根據體重隨機分為五組，每組12 只，分別為溶劑對照組，低、中、高劑量宣肺止嗽合劑組和鹽酸嗎啡組。低、中、高劑量宣肺止嗽合劑組經口灌胃給藥，連續給藥5 d，每天給藥3 次，給藥劑量根據原液中嗎啡實際濃度折算分別為宣肺止嗽合劑的1/5 倍、1/2 倍及1 倍，分別約等效為人臨床擬用劑量的2.4、6.1、12.2 倍[18]。各組給藥途徑、劑量、制劑、濃度、體積見表2。

表2 小鼠催促戒斷模型評價宣肺止嗽合劑的軀體依賴作用劑量設計表

于末次給藥6 h 內，腹腔注射納洛酮2 mg/kg 進行催促戒斷，觀察戒斷后30 min 內小鼠的跳躍、扭體次數及戒斷前后約1 h 的體重變化，體重變化=給納洛酮后體重-給納洛酮前體重。

1.4 統計學方法

采用Stata/IC 15.0 軟件對結果進行統計分析，偏態分布計量資料的描述以中位數（四分位數）[M（P25，P75）]表示，比較采用Kruskal-Wallis H 秩和檢驗。以P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 大鼠自然戒斷試驗

試驗第26 天，溶劑對照組第2 次給藥后1 只動物死亡，大體解剖觀察未見異常臟器改變，考慮由灌胃操作引起，因此溶劑對照組只數為11 只。

2.1.1 戒斷評分

與溶劑對照組比較，鹽酸嗎啡組戒斷評分升高，宣肺止嗽合劑低劑量組在12、18 h 的戒斷評分顯著升高，宣肺止嗽合劑中、高劑量組在12、18、36、66、84、108 h 的戒斷評分顯著升高，差異有統計學意義（P ＜0.05）。見表3。

表3 自然戒斷期間各組SD 大鼠戒斷評分[分，M（P25，P75）]

2.1.2 大鼠體重變化

與溶劑對照組比較，鹽酸嗎啡組體重變化在自然戒斷第2～7 天顯著降低（P ＜0.05），自然戒斷第8～14 天兩組體重變化比較，差異無統計學意義（P ＞0.05）；低、中、高劑量宣肺止嗽合劑組在自然戒斷第1～14 天體重變化與溶劑對照組比較，差異無統計學意義（P ＞0.05）。見圖1。

圖1 自然戒斷期間各組SD 大鼠體重變化

2.2 小鼠催促戒斷試驗

給藥第5 天，溶劑對照組給藥后1 只小鼠死亡，考慮因灌胃操作不當所致，因此溶劑對照組只數為11 只。

與溶劑對照組比較，鹽酸嗎啡組小鼠跳躍次數、扭體次數升高，體重變化顯著降低（P ＜0.05），低、中、高劑量宣肺止嗽合劑組小鼠的跳躍、扭體次數和體重變化與溶劑對照組比較，差異無統計學意義（P ＞0.05）。見表4。

表4 催促戒斷期間各組Balb/c 小鼠戒斷指標[M（P25，P75）]

3 討論

采用反復給予動物依賴性藥物一段時間后，通過中斷給藥建立自然戒斷成癮模型，可根據評分標準對戒斷癥狀嚴重程度進行定量評定[19-21]。跳躍次數、體重變化和扭體指標是反映催促戒斷的主要指標[22-24]，本研究以上述3 個指標來評價宣肺止嗽合劑在小鼠催促戒斷模型上的軀體依賴作用，方法可靠。

本研究中大鼠自然戒斷結果示宣肺止嗽合劑出現了輕微的戒斷反應，最低成癮劑量為0.732 mg/（kg·d）（按嗎啡實際濃度折算劑量計），約為60 kg 成人臨床用藥劑量的2.4 倍；小鼠催促戒斷結果顯示宣肺止嗽合劑組小鼠的跳躍次數、扭體次數和體重變化與溶劑對照組比較，差異無統計學意義（P ＞0.05），但是高劑量組編號為5F005 的小鼠跳躍32 次，考慮該動物出現了輕微的戒斷反應，同時本研究選用動物數較少，因此不能排除該劑量下宣肺止嗽合劑不會引起戒斷癥狀出現，最低成癮劑量為9.15 mg/（kg·d）（按嗎啡實際濃度折算劑量計），約為60 kg 成人臨床用藥劑量的12.2 倍，而在成人臨床劑量6.1 倍下未表現出軀體依賴潛能。綜上，宣肺止嗽合劑質量標準中對活性成分實行定量檢測和嚴格控制，要求嗎啡含量在0.030～0.080 mg/ml 范圍內，既保證了藥品有效性，又防止了因嗎啡含量過高而引起藥物成癮[25]。患者在病愈的情況下可自覺停止服藥，不會發生濫用現象和藥物依賴性。