多囊卵巢綜合征患者血清PPARr、SFRP5的表達及對胰島素抵抗的診斷價值

王麗先，吳暖暖，林芳，金潔瓊，王燕

(青島市膠州中心醫院婦科，山東 青島 266300)

多囊卵巢綜合征(polycystic ovarian syndrome，PCOS)是常見婦科內分泌疾病，主要表現為雄激素分泌過多、卵巢多囊性改變、排卵功能障礙、代謝功能異常等，在育齡期女性中發病率約為6%，是女性不孕不育的常見原因之一[1]。部分PCOS患者伴有胰島素抵抗(insulin resistance，IR)和高胰島素血癥，增加子宮內膜癌、血脂異常、心血管疾病和2型糖尿病的風險，誘發多種慢性消耗性疾病，嚴重影響女性健康[2]。過氧化物酶體增殖激活物受體γ(peroxisome proliferators-activated receptor γ，PPARγ)能調節脂肪細胞的增殖分化及炎性因子的釋放，對糖脂代謝的調控具有重要作用[3]。分泌型卷曲相關蛋白5(Secreted Frizzled Related Protein 5，SFRP5)作為抗炎脂肪因子，可抑制脂肪組織中炎癥細胞的激活，減少炎性因子分泌[4]。有研究[5]表明，POCS的發病過程與IR密切相關，而PPARγ及SFRP5能夠調節糖、脂代謝過程，可能直接或間接參與了IR的發生過程。因此，本研究擬通過分析PCOS患者PPARγ、血清SFRP5、IR及糖、脂代謝情況，明確PPARγ、SFRP5與胰島素抵抗及其它指標的相關性，為PCOS的評估及臨床干預提供進一步的理論基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年6月至2021年12月青島市膠州中心醫院收治的102例PCOS患者為研究對象，根據胰島素抵抗指數(HOMA-IR)將患者分為IR組(HOMA-IR≥2.69，n=58)和非IR組(HOMA-IR<2.69，n=44)。本研究經院倫理委員審核批準，患者及其家屬知情同意。兩組患者年齡、BMI、家族史、月經情況、平均卵巢體積、血壓及腰臀比等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。納入標準：(1)符合《多囊卵巢綜合征中國診療指南》中關于PCOS的診斷標準[6]：患者表現為無排卵或稀發排卵；月經紊亂或出現高雄激素血癥；經超聲檢查至少一側卵巢體積>10 cm或直徑2～9 cm小卵泡>12個，以上3種情況滿足其中兩種并排除柯興氏綜合征、先天性腎上腺皮質增生等其他造成雄激素過高的病因；(2)均為育齡期女性。排除標準：(1)存在排卵性月經失調；(2)子宮內膜異位癥；(3)合并嚴重肝腎功能不全、循環系統疾病或惡性腫瘤；(4)伴其他內分泌系統疾病；(5)納入研究前3個月內有激素類藥物史或手術史。

表1 兩組患者一般資料比較

1.2 方法

抽取所有受試者晨起空腹外周靜脈血標本5 mL，3 000 rpm離心10 min取血清于-80 ℃保存備用。(1)采用酶聯免疫吸附法(晶抗生物工程有限公司)檢測血清PPARγ、SFRP5、白細胞介素-6(IL-6)、促黃體生成素(LH)、睪酮(T)表達水平，選取聚苯乙烯板條，將待測樣本10 μL置于板條的反應孔內，加入樣本稀釋液40 μL，將不同濃度的標準品50 μL加入標準品孔內。反應孔及標準品孔均加入新鮮稀釋的酶標抗體0.1 mL，于37 ℃下孵育45 min，經洗滌后加入TMB底物0.1 mL，于37 ℃下孵育30 min。各孔均加入硫酸終止液50 μL，于15 min內在450 nm處檢測各孔OD值并求出患者上述指標表達水平。(2)采用全自動蛋白分析儀(Beckman，IMMAGE 800)行免疫比濁法檢測血清超敏C反應蛋白(hs-CRP)表達水平。(3)收集受試者空腹血糖(FPG)，檢測患者空腹血漿胰島素(Fins)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平，利用穩態模型評估穩胰島素抵抗指數(HOMA-IR)，即HOMA-IR=FPG× FIns/22.5。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 兩組患者血清PPARγ、SFRP5、炎癥因子及性激素水平比較

IR組患者PPARγ、血清SFRP5水平低于非IR組；hs-CRP、IL-6、LH及T水平高于非IR組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者血清PPARγ、SFRP5、炎癥因子及性激素水平比較

2.2 兩組患者糖脂代謝指標比較

IR組患者FPG、FIns、TC、TG水平高于非IR組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者糖脂代謝指標比較

2.3 血清PPARγ、SFRP5診斷PCOS患者合并IR的價值

ROC曲線分析顯示，血清PPARγ、SFRP5及二者聯合診斷PCOS患者合并IR的效能均較高(P<0.05)。見表4。

表4 PPARγ、SFRP5診斷PCOS患者合并IR的價值

2.4 PPARγ、SFRP5與IR及其他指標的相關性

PCOS患者PPARγ表達與HOMA-IR、hs-CRP、IL-6、LH、T、FPG、FIns、TG水平呈負相關(P<0.05)，SFRP5與HOMA-IR、hs-CRP、IL-6、FPG、FIns、TC、TG水平呈負相關(P<0.05)。見表5。

表5 PPARγ、SFRP5與IR及其他指標的相關性

3 討論

PCOS患者可出現不同程度的IR，國外研究[7]顯示，PCOS患者IR發生率為50%～70%，糖、脂代謝與其發病密切相關。由于PCOS患者存在線粒體突變或功能異常，影響細胞能量代謝，引起胰島細胞的凋亡，導致胰島素代謝紊亂，故IR也是目前研究和治療針對的重要臨床靶點之一[8]。PPARγ參與卵巢的正常生理功能調節，是調節卵巢功能的關鍵因子；SFRP5由脂肪組織分泌，是調節機體炎癥反應及糖、脂代謝的重要脂肪因子。有研究[9]發現，血清PPARγ、SFRP5的表達水平與PCOS患者的發生發展有關。若能明確血清PPARγ及SFRP5與IR的關系，對PCOS患者臨床治療效果的提升有重要意義。

本研究結果顯示，IR組患者血清PPARγ、SFRP5水平低于非IR組(P<0.05)，FPG、FIns、TC、TG、血清hs-CRP、IL-6、LH及T水平均高于非IR組(P<0.05)，說明PCOS合并IR患者的PPARγ及SFRP5表達更低，雄激素分泌更多，糖、脂代謝紊亂情況更加嚴重，提示PPARγ、SFRP5可能與IR有關，且IR在促進性激素及糖、脂分泌，調節炎癥反應，加重卵巢功能障礙方面具有重要作用。基于IR的病理基礎，PCOS患者出現不同代謝指標水平差異的原因包括：(1)IR患者出現高胰島素血癥，過多的胰島素作用于卵巢顆粒細胞，激活細胞內17α羥化酶，促進雄烯二酮的合成，造成高雄激素血癥，再通過下調肝臟性激素結合球蛋白水平，致使血清T水平升高，加重患者性激素的紊亂，卵巢功能障礙進一步加重[10]；(2)IR患者血液中的葡萄糖進入細胞的通路受阻，影響脂肪的合成代謝，使糖、脂肪代謝紊亂[11]；(3)PCOS患者長期處于慢性炎癥狀態，有研究[12]表明，IR與炎癥反應關系密切，患者發生性激素紊亂、胰島素抵抗，可促進脂多糖介導卵巢組織炎癥因子大量釋放，同時通過反饋調節系統加重高胰島素血癥，最終引起IR的升高。

本研究進一步分析了PPARγ、SFRP5與IR及其他指標的關系，結果顯示，血清PPARγ及SFRP5診斷PCOS患者合并IR的效能均較高，而二者聯合診斷PCOS患者合并IR的效能最高，AUC達0.809，且PPARγ表達與SFRP5成正相關(P<0.05)，與HOMA-IR、hs-CRP、IL-6、LH、T、FPG、FIns、TG水平呈負相關(P<0.05)，SFRP5與HOMA-IR、hs-CRP、IL-6、FPG、FIns、TC、TG水平呈負相關(P<0.05)，提示PPARγ與SFRP5可作為診斷PCOS患者是否伴發IR的輔助檢查手段，也說明PPARγ與SFRP5通過調控機體細胞因子及代謝物水平，參與IR的發生發展過程，原因可能為PPARγ作為激素、內源性代謝物及外源性化合物的傳感器，能夠調節與細胞分化，發育和代謝相關基因的表達，參與調控淋巴細胞分泌IL-6等炎癥因子，是脂肪細胞增殖、分化及胰島素信號轉導的重要調節因子，而SFRP5是PPARγ在脂肪細胞中轉錄調控的靶基因[13]。另外，PPARγ的正常表達可維持卵巢生理功能的穩定，其與顆粒細胞中雌激素應答元件相結合，可抑制芳香化酶表達，限制雄激素到雌激素的轉換，并調節LH的分泌，刺激T釋放[14]。王超等[15]對IR小鼠模型采用氧化苦參堿后發現，氧化苦參堿通過上調PPARγ水平來改善肝臟脂質代謝及胰島素紊亂。SFRP5內富含半胱氨酸，該氨基酸也大量存在于配體蛋白質Wnt受體中SFRP5可充當Wnt受體與配體結合，負向調控分泌蛋白的Wnt信號通路，阻斷炎癥因子釋放信號的傳導，從而降低炎癥因子水平，減輕炎癥反應[16]。國外研究[17]表明，血清SFRP5參與肝臟的糖異生過程，其高表達狀態可抑制糖異生，通過激活胰島素AKT、相關信號通路，提高細胞組織對胰島素的敏感性，從而改善患者IR情況。

綜上所述，PCOS患者合并IR患者血清PPARγ及SFRP5呈低表達，PPARγ與SFRP5通過調節炎癥反應、卵巢功能及糖脂代謝，改善患者IR，二者均可作為診斷PCOS患者是否伴發IR的輔助檢查手段。