miR-423-5p與miR-212在生長激素型垂體腺瘤患者血清中的表達及與預后的相關性研究*

沈海濤，焦榮紅，姚曉陽

1.上海中醫藥大學附屬第七人民醫院檢驗科，上海 200137；2.上海市浦東新區人民醫院檢驗科，上海 201299

垂體腺瘤是顱內最常見的良性腫瘤之一，可分泌包括催乳素、生長激素(GH)、促甲狀腺素等多種激素，造成患者內分泌功能的紊亂[1]。其中，GH型垂體腺瘤是垂體腺瘤中的常見類型，可分泌過多的GH，造成患者肢端肥大癥等綜合征[2]。目前，GH型垂體腺瘤的發病機制及預后的影響因素尚不明確，因此，探尋可早期預測GH型垂體腺瘤的生理指標具有重要意義[3]。既往研究表明，微小RNA(miR)-423-5P能夠抑制垂體腺瘤細胞增殖并誘導其凋亡，在GH3細胞中發揮重要作用[4]；miR-212是近期發現的一種miRNA，在腫瘤細胞凋亡、免疫應答及惡性膠質瘤的抗輻射特性中具有重要作用[5]。因此，推測miR-423-5p、miR-212與GH型垂體腺瘤細胞的增殖與治療效果有關，但二者與GH型垂體腺瘤患者的預后關系尚不明確。因此，本研究通過檢測GH型垂體腺瘤患者血清中miR-423-5p、miR-212表達水平并分析二者與其預后的關系，旨在為今后臨床工作中評估GH型垂體腺瘤患者預后提供一定的參考依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2018年1月至2020年1月收治的GH型垂體腺瘤患者為研究對象，以中國垂體腺瘤協作組牽頭制定的《肢端肥大癥診治中國專家共識(2020版)》為診斷標準進行診斷[6]。納入標準：(1)符合上述診斷標準，且經過術后病理證實；(2)所有患者對本研究知情，自愿參加本研究并簽署知情同意書。排除標準：(1)合并肝、腎、心等重要臟器功能不全；(2)合并其他良、惡性腫瘤的患者；(3)合并其他內分泌疾病；(4)嚴重傳染性疾病，不適宜參加本研究的患者。隨訪結束后，共有108例患者納入本研究，根據患者血清中GH水平與MRI影像學資料，64例患者評價為緩解，44例患者評價為未緩解。其中，緩解組患者中男38例、女26例，平均年齡(31.36±8.72)歲；對照組中男20例、女24例，平均年齡(29.43±7.88)歲。兩組患者性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2主要試劑 miRNeasy Serum/Plasma Kit(德國QIAGEN公司)；SYBR PrimeScriptTMmiRNA RT-PCR Kit(德國QIAGEN公司)。

1.3方法

1.3.1樣本收集 采集觀察組及對照組清晨空腹肘正中靜脈血5 mL置于EDTA抗凝管中，室溫靜置并離心后吸取血清并立即存放于-80 ℃冰箱中保存以備后續試驗。

1.3.2血清總RNA提取、反轉錄及PCR 使用miRNeasy Serum/Plasma Kit血液RNA提取試劑盒提取各組血清，嚴格按照試劑盒說明書進行操作，通過分光光度儀檢測所提取RNA的A260/A280值，當該值為1.9～2.1時逆轉錄為cDNA。根據SYBR PrimeScriptTMmiRNA RT-PCR Kit試劑盒說明書配制反應體系，以95 ℃ 10 min、62 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s為反應體系，共反應45個循環，以U6作為內參照，采用2-ΔΔCt方法計算miR-423-5p與miR-212相對表達水平，反應體系所使用引物序列見表1。

表1 引物序列

1.4治療 本研究患者均采用內鏡下經鼻蝶垂體腺瘤切除術進行治療，手術由本科室主任醫師完成，術后常規止痛等對癥支持治療。

1.5隨訪方法及評估標準 以術后次日為隨訪起點，通過電話、短信及門診復查方式進行隨訪，隨訪周期為6個月，并根據患者預后，分為緩解組(即預后良好)與未緩解組(即預后不良)。所有患者評價預后為緩解的標準如下：(1)隨訪期內患者空腹GH<10 μg/L；(2)隨訪期內患者頭顱MRI未見復發。根據隨訪結果，將患者分為緩解組與未緩解組。

2 結 果

2.1兩組患者血清miR-423-5p與miR-212表達水平比較 PCR結果顯示，與緩解組相比，未緩解組患者血清miR-212與miR-423-5p表達水平降低，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者血清miR-423-5p與miR-212表達水平比較

2.2血清miR-423-5p與miR-212對GH型垂體腺瘤患者預后評價 ROC曲線顯示，血清miR-212水平預測GH型垂體腺瘤患者預后的曲線下面積為0.857，此時其靈敏度為85.2%，特異度為90.3%；血清miR-423-5p水平預測GH型垂體腺瘤患者預后的曲線下面積為0.829，此時其靈敏度為72.3%，特異度為78.4%。

3 討 論

GH型垂體腺瘤是功能性垂體腺瘤中的一類，是常見的鞍區腫瘤之一[7]。GH型垂體腺瘤不僅能夠引起鞍區占位效應，導致顱內壓增高、頭痛及視乳頭水腫，還可因為分泌過量的GH導致巨人癥與肢端肥大癥，部分患者還會引起糖耐量降低、睡眠障礙與睡眠呼吸暫停等癥狀[8]。目前，GH型垂體腺瘤的治療主要以手術治療為主，部分患者可采取生長抑素類藥物治療，或手術輔助藥物治療等手段[9]。近年來，隨著神經內鏡技術的不斷發展，手術治療垂體腺瘤能夠獲得較為滿意的療效，但是少部分患者仍然存在GH水平過高或腫瘤易復發等問題，對GH型垂體腺瘤患者預后的預測仍然缺乏有效手段[10]。既往研究表明，miRNA在許多腫瘤的發生、發展中發揮重要的生物學作用，兩者之間具有密切關系，miRNA常常參與基因的轉錄與調控，起到類似原癌基因或抑癌基因的作用[11]。此外，miR-212可通過調控c-Met水平抑制腫瘤細胞的增殖與侵襲，從而在腫瘤的發生、發展中起到抑癌基因的作用[12]。有研究顯示，GH型垂體腺瘤患者體內miR-212的表達水平明顯下調，提示miR-212可能與GH型垂體腺瘤的發生與發展關系密切[13]。趙斯達等[14]通過研究發現，對比GH型垂體腺瘤與對照組血清miRNA表達水平差異，共找到169個差異表達的miRNA，其中miR-423-5p在GH型垂體腺瘤中低表達；經過對比后發現，miR-423-5p具有抑制GH型垂體腺瘤細胞增殖、誘導其凋亡并減少GH釋放的作用。細胞凋亡在腫瘤的發生、發展過程中具有重要作用，而研究已經證實，miR-212與細胞凋亡關系密切[15]。既往研究表明，在前列腺癌患者中，其腫瘤組織與癌旁組織內miR-212的表達水平不同，腫瘤組織內miR-212水平顯著降低，進一步研究發現miR-212能夠顯著提高前列腺癌細胞的凋亡水平[16]。同時有研究表明，miR-212在乳腺癌組織中表達水平顯著降低，上調其表達水平能夠顯著抑制乳腺癌細胞的增殖及侵襲能力并促進其凋亡。有研究顯示，在GH型垂體腺瘤中，miR-212同樣發揮類似“抑癌基因”作用，及機制可能與其能夠促進垂體腺瘤細胞凋亡有關[17]，但具體機制尚不明確。本研究結果顯示，未緩解組患者血清中miR-212表達水平降低，這與既往研究結果一致。盡管miR-212在調控GH型垂體腺瘤的作用機制尚不是十分清楚，但結合既往在其他腫瘤中的研究，其分子機制可能與miR-212對腫瘤細胞凋亡的調控有關[18]。

既往研究表明，miR-423-5p在多種腫瘤組織中表達異常，參與多種腫瘤組織的發生及發展，且在不同腫瘤組織中發揮不同的生物學功能，例如，miR-423-5p在神經膠質瘤組織中高表達，下調miR-423-5p的表達水平可抑制膠質瘤細胞的增殖并抑制腫瘤增長；相反，上調膠質瘤細胞中的miR-423-5p表達則會增強細胞的增殖及侵襲能力[14-15]。外源性miR-423-5p能夠提高胃癌細胞的異型性，并能夠增強胃癌細胞的侵襲能力[19-20]。但是，miR-423-5p在GH型垂體腺瘤組織中發揮的作用鮮有報道，miR-423-5p對GH型垂體腺瘤細胞的生物學功能尚不清楚。本研究對兩種預后結局患者血清中miR-423-5p表達水平進行對比，發現緩解組患者血清中miR-423-5p表達水平較未緩解組患者血清高，說明在GH型垂體腺瘤組織中miR-423-5p的表達對腫瘤細胞具有促進作用，但其作用機制尚不明確，也可能與本研究的樣本量較少，術后隨訪時間較短有關。

綜上所述，GH型垂體腺瘤患者血清miR-212與miR-423-5p表達水平與患者預后有關，二者的表達水平對GH型垂體腺瘤患者的預后具有一定的診斷價值。