鋅轉(zhuǎn)運蛋白8抗體和酪氨酸磷酸酶抗體檢測在不同分型糖尿病診斷中的臨床價值

巫翠云，魏小斌，杜梅英，范維麗，趙慶珠，翁雪燕

（1.中南大學湘雅醫(yī)學院附屬海口醫(yī)院檢驗科；2.中南大學湘雅醫(yī)學院附屬海口醫(yī)院內(nèi)分泌科，海南海口 570208）

糖尿病是由遺傳、環(huán)境、行為等多種因素誘發(fā)的代謝性疾病，臨床以胰島素分泌不足或胰島作用障礙為特征，導致血糖水平異常升高。糖尿病呈進行性發(fā)展，最終可累及微血管和周圍神經(jīng)，導致不良預后的發(fā)生[1]。而糖尿病的分型診斷是開展精準治療的前提，我國糖尿病以2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）最為常見，該病起病緩慢，臨床具有較大異質(zhì)性[2]。但臨床偶見1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus，T1DM）和成人隱匿性自身免疫性糖尿病（latent autoimmune diabetes in adults，LADA）。不同分型糖尿病臨床癥狀相似[3]，既往報道顯示，抗體檢測有助于不同糖尿病分型的鑒別診斷[4]。鋅轉(zhuǎn)運蛋白8抗體（ZnT8A）自2007年被發(fā)現(xiàn)以來，有關其在糖尿病發(fā)病機制中的認識不斷深入[5]，酪氨酸磷酸酶抗體（IA-2A）屬Ⅰ型跨膜黏蛋白，有報道顯示，其在LADA患者中呈異常高表達[6]。推測ZnT8A、IA-2A可能有助于糖尿病分型的鑒別診斷。為驗證這一結(jié)果，本研究探討兩者在糖尿病分型鑒別診斷中的臨床應用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年3月至2022年1月中南大學湘雅醫(yī)學院附屬海口醫(yī)院收治的314例糖尿病患者，根據(jù)不同分型將患者分為T1DM組（23例，1型糖尿病）、T2DM組（279例，2型糖尿病）和LADA組（12例，成人隱匿性自身免疫性糖尿病），另選取同期院內(nèi)30例健康體檢者作為對照組進行回顧性分析。T1DM組患者中男性9例，女性14例；年齡12～81歲，平均年齡（53.92±17.64）歲；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）20.80～26.50 kg/m2，平均BMI（22.96±1.79）kg/m2；糖尿 病 家族 史7例。T2DM組患者中男性161例，女性118例；年齡15～83歲，平均年齡（52.08±15.72）歲；BMI 21.00～26.20 kg/m2，平均BMI（23.02±1.84）kg/m2；糖尿病家族史72例。LADA組患者中男性8例，女性4例；年齡24～75歲，平均年齡（52.20±15.23）歲；BMI 21.10～26.45 kg/m2,平均BMI（23.34±1.80）kg/m2；糖尿病家族史4例。對照組研究對象中男性17例，女性13例；年齡21～75歲，平均年齡（53.16± 14.84）歲；BMI 20.50～26.00 kg/m2，平均BMI（23.12±1.77）kg/m2；空腹血糖在參考范圍內(nèi)，無自身免疫性疾病。4組研究對象性別、年齡、BMI及糖尿病家族史等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05），組間具有可比性。本研究經(jīng)中南大學湘雅醫(yī)學院醫(yī)學附屬海口醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。納入標準：①患者均符合《中國2型糖尿病防治指南(2017年版)》[7]中糖尿病的診斷標準；②臨床病例資料完整。排除標準：①繼發(fā)性糖尿病者；②合并惡性腫瘤者；③妊娠或哺乳期患者；④肝、腎功能嚴重不全或有嚴重心、肺基礎疾病者。

1.2 檢測方法 ①標本采集：抽取研究對象清晨空腹肘靜脈血3 mL，采用離心機（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司，型號：KDC-40型）對血液標本以2 500 r/min離心5 min，取上清液，冷凍保存?zhèn)溆谩＂诿庖哂≯E檢測：取出試劑盒，將抗原膜條置于孵育槽內(nèi)，每槽加1.5 mL樣本緩沖液，均勻搖晃5 min后棄孵育槽內(nèi)的液體；在每槽內(nèi)加1.5 mL解凍稀釋后的血清樣品，將膜條置于搖擺床，輕微搖晃孵育30 min；棄孵育槽內(nèi)液體，在每槽內(nèi)加1.5 mL清洗緩沖液，將膜條置于搖擺床上，輕微搖晃5 min，去孵育槽內(nèi)液體，重復洗滌2次；棄孵育槽內(nèi)液體，每槽加1.5 mL稀釋后的酶結(jié)合物，將膜條置于搖擺床上輕微搖晃，孵育30 min；棄孵育槽內(nèi)液體，每槽加1.5mL底物液，在室溫下將膜條置于搖擺床上孵育10 min；棄孵育槽內(nèi)液體，每槽加1.5 mL蒸餾水，室溫下將膜條置于搖擺床上輕微搖晃1 min，棄孵育槽內(nèi)液體，重復洗滌2次。待膜條干燥后將膜條檢測帶與標準帶結(jié)果進行對照，記錄檢測結(jié)果。

1.3 觀察指標 ①比較4組研究對象ZnT8A和IA-2A陽性率。②分析ZnT8A和IA-2A在鑒別診斷不同糖尿病分型中的價值。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理。計量資料以（x）表示，多組間比較行方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗；計數(shù)資料以[例(%)]表示，組間比較行χ2檢驗。ZnT8A和IA-2A的診斷價值采用受試者工作曲線（ROC）分析，結(jié)果以曲線下面積（AUC）表示，以AUC＞0.75為準確性高。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 4組研究對象ZnT8A和IA-2A陽性率比較 T1DM組研究對象ZnT8A陽性率顯著高于其他3組，IA-2A陽性率顯著高于T2DM組和對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。T1DM組與LADA組研究對象IA-2A陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 4組研究對象ZnT8A和IA-2A陽性率比較[例(%)]

2.2 ZnT8A和IA-2A判斷T1DM價值分析 分別以ZnT8A、IA-2A及二者聯(lián)合預測概率為檢驗變量，以是否為T1DM為狀態(tài)變量，繪制ROC曲線，見圖1。ROC分析結(jié)果顯示，ZnT8A與IA-2A單項指標對判斷T1DM具有一定價值（P＜0.05），二者聯(lián)合預測概率對診斷T1DM具有較高準確性（AUC＞0.75，P＜0.05），ZnT8A與IA-2A聯(lián)合預測概率判斷T1DM的AUC值顯著高于ZnT8A、IA-2A單一指標（z=-2.291，1.978；P=0.008，0.014），見表2。

表2 ZnT8A和IA-2A判斷T1DM價值分析

圖1 ZnT8A和IA-2A判斷T1DM的ROC曲線

3 討論

近年來，隨著人們物質(zhì)生活水平的不斷提高和生活方式的日益多樣化，糖尿病發(fā)病率呈上升趨勢，糖尿病已成為威脅人們生命健康的嚴重公共衛(wèi)生問題[8]。本研究共選取314例糖尿病患者為研究對象，其中T2DM患者例數(shù)最多，有279例，占88.85%，與既往報道一致[9]。隨著人們對糖尿病認知的不斷深入，糖尿病分型也不斷地更新。既往糖尿病分型主要基于患者臨床癥狀和血清胰島素含量，而LADA像是從T2DM向T1DM的過渡[10]。隨著臨床經(jīng)驗的積累和檢測技術(shù)進步，糖尿病自身抗體譜試劑盒出現(xiàn)和推廣，臨床分型傾向于檢測血清免疫標記物表達情況。患者血清存在糖尿病自身抗體是T1DM和LADA的特點之一。自身抗體免疫學檢測被認為具有自身免疫性疾病預測作用。因而，及時、準確地發(fā)現(xiàn)體內(nèi)糖尿病自身抗體將有助于糖尿病分型診斷，以最大程度地保護胰島細胞功能，延緩病情進展。

ZnT8A主要分布在胰島β細胞內(nèi)含有胰島素顆粒的囊泡膜上，胰島素顆粒中的Zn2+累積會影響胰島素的正常分泌、儲存。研究顯示，Zn2+與糖尿病早期發(fā)病的關系密切，而鋅的轉(zhuǎn)運需要大量高效的鋅轉(zhuǎn)運蛋白抗體來完成[11]。ZnT8A通過影響胰島素中Zn2+聚集，調(diào)節(jié)胰高血糖素和胰島素旁分泌。低鋅血癥在糖尿病患者中較為常見，而鋅轉(zhuǎn)運蛋白抗體高表達多提示鋅含量及顆粒細胞儲存能力增強。在胰島β細胞自身免疫反應中，ZnT8A屬典型自身抗原，ZnT8A作為異常體液免疫應答對胰島β細胞進行攻擊的重要標志[12]，可作為其診斷的預警信息，在T1DM患者出現(xiàn)臨床癥狀之前，可以早期預測并指導臨床治療。

IA -2A代表胰島β細胞的特異性免疫。這種抗體是自身反應性T淋巴細胞的靶分子，主要在腦和胰腺中發(fā)揮作用，能以較高敏感度和特異度反映β細胞損傷引起的早期發(fā)病[13-14]。LADA早期臨床特點與T2DM類似，成為誤診、漏診的原因[15]。因LADA病程長、臨床癥狀出現(xiàn)晚，多數(shù)患者在檢測糖尿病自身抗體時才發(fā)現(xiàn)體內(nèi)存在自身抗體，此時患者胰島細胞已被破壞[16]。

本研究結(jié)果也顯示，T1DM組研究對象ZnT8A陽性率顯著高于其他3組，IA-2A陽性率顯著高于T2DM組和對照組，提示檢測ZnT8A與IA-2A可能有助于糖尿病的分型診斷；而進一步ROC分析顯示，ZnT8A與IA-2A聯(lián)合預測判斷T1DM的敏感度達0.867，提示兩者聯(lián)合檢測可彌補IA-2A單項檢測難以鑒別LADA與T1DM的不足，這對于糖尿病分型診斷具有重要價值。

綜上，ZnT8A與IA-2A與糖尿病發(fā)生、發(fā)展密切相關，兩者聯(lián)合檢測有助于糖尿病分型的診斷和鑒別診斷，具有較高的臨床應用價值。