成纖維細胞生長因子受體3的表達預測膀胱癌預后

黃玉清，張 良，周海濱，李丹丹 (九江學院附屬醫院，江西 九江 332000)

膀胱癌作為臨床常見泌尿科常見惡性腫瘤之一，在全世界癌癥發病率排名中占據前十，且男性發病率顯著高于女性，50～70歲是患者病癥高發階段。雖然當前針對膀胱癌治療方法存在多元化，但仍有報道指出，50%～70%的表淺性膀胱癌存在高復發風險，10%～20%患者會發展成浸潤性膀胱癌，嚴重者可能誘發肌層浸潤性膀胱癌，縮短患者生存時間，降低其5年內生存率[1]。

當前，臨床針對膀胱癌患者除去手術切除病灶，還主張配合全身化療來提高其治療效果，藥物首選他濱、順鉑，均有一定確切療效。但大量研究證實，患者化療后的平均生存期只有15個月，5年內生存率未超過20%，病死率也未得到顯著降低。與此同時，病灶根除術式優化方向尚未明朗，臨床研究指出膀胱腫瘤發病與多條信號通路存在關聯，尤其是成纖維細胞生長因子受體3(FGFR3)，在腫瘤發生和進展中占據重要地位，因此臨床表明可借此為方向來研發新型靶點治療藥物[2]。基于此，本研究選擇2017年4月～2021年4月收治的膀胱癌患者80例，對其腫瘤組織進行FGFR3基因突變和蛋白表達檢測，評估此類因子表達對膀胱癌預后關系的預測價值。

1 資料與方法

1.1一般資料：本次研究均醫院倫理會審批，將2017年4月～2021年4月收治的膀胱癌80例為觀察對象，術后均配合病理檢查，并經病理科主任醫生多次閱片確診，符合移性細胞癌相關診斷標準，同時對本次研究保有知情同意權。所選患者中，男女所占比例為60∶20；年齡35～85歲，平均年齡(64.11±10.34)歲；病癥類型：低級別尿路上皮癌46例，高級別尿路上皮癌34例；手術類型：55例患者行經尿道膀胱腫瘤電切術，25例患者行根治性膀胱切除術+尿流改道術+術后GC化療(吉西他濱+順鉑)。將癌組織標本置于10%甲醛溶液固定24 h后，選擇5 μm厚蠟塊對組織進行連續切片，其中1片行蘇木精-伊紅染色，1片行FGFR3免疫組化染色，1片與PBS液反應做成一抗空白對照。FGFR3單克隆抗體及免疫組化試劑盒分別于英國Abeam公司中國分公司、北京中杉金橋生物技術有限公司購買，操作步驟參照相關說明書，FGFR3-抗視為工作液，以1∶20的比例將濃度稀釋后，有序完成色、復染、脫水和透明后封片等步驟。

1.2突變檢測：檢測所需組織是經包埋石蠟組織塊中切取，選擇于Omega Bio-Tec公司購買的試劑盒，完成組織DNA的分離和提取，后配合定量分析法對DNA質量進行評估，直至檢測樣本質量達到合格標準。模板設計引物采取FGFR3基因熱點突變外顯子7、10和15，DNA行PCR擴增。20 μl的PCR擴增體系包括腫瘤DNA(1 μl)、Taq高保真酶(0.15 μl)、引物(0.8 μl)、dNTP(0.8 μl)、Mg2+(0.8 ml)、ddH2O(14.45 μl)、10×buffer(2 μl)。反應條件包括外顯子在15～95 ℃溫度下的預變性(用時7 min)，94℃的變性(用時1 min),62℃退火(用時1.5 min)；外顯子7和10需在61 ℃溫度下退火(用時1.5 min)，后調整溫度至72 ℃，延長1 min反應時間，經40個循環后在72℃環境下延長7 min反應時間。對擴增后所得產物經電泳分離來提高產物純度，后經Sanger測序法得出產物結構序列，應用Chromas pro2.1.3軟件來判讀基因突變數值。

1.3評估標準：FGFR3蛋白表主要以細胞膜或細胞質為參考值，經高倍鏡(×400)下，從5個不同視野來觀察所有患者腫瘤組織的免疫組化切片，其中，腫瘤細胞中著色呈黃色或棕黃色，視為陽性表達，無著色視為陰性。

1.4統計學分析：采用SPSS22.0統計學軟件，計量資料行t檢驗，計數資料行χ2檢驗，當P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1患者FGFR3基因突變、蛋白表達與各項參數值的相關性：FGFR3基因突變率、蛋白表達率分別為18.75%(15/80)、27.50%(22/80)，FGFR3蛋白表達與臨床各參數無較大關聯(P>0.05)；FGFR3基因突變與年齡、吸煙史、病理分期、腫瘤大小、復發情況等參數指標存在相關性(P<0.05)。見表1。

表1 FGFR3基因突變、蛋白表達與各項參數值相關性[n(%)]

2.2FGFR3基因突變和蛋白表達的關聯性：FGFR3基因突變和蛋白表達一致性為33.33%(5/15)，但二者沒有關聯(P>0.05)，見表2。

表2 FGFR3基因突變和蛋白表達的關聯性(n)

2.3FGFF3基因突變和蛋白表達對預后的影響：FGFR3基因突變和野生型的總生存期(OS)分別為(30.44±1.33)個月、(26.33±2.45)個月，差異無統計學意義(P>0.05)；FGFR3蛋白表達陽性、陰性分別是(27.89±1.33)個月、(27.33±1.63)個月，兩組數據差異無統計學意義(P>0.05)；FGFR3基因突變和野生型的無瘤生存期(DFS)分別為(29.44±1.56)個月、(38.23±2.69)個月，前者DFS顯著低于后者(P<0.05)；FGFR3蛋白表達陽性、陰性分別是(30.11±1.21)個月、(32.35±1.44)個月，差異無統計學意義(P>0.05)。由此可見，FGFR3基因突變和蛋白表達與患者總生存期OS無聯系，FGFR3 蛋白表達對DFS不會造成影響，但FGFR3基因突變型膀胱癌與患者DFS有直接聯系。

3 討論

膀胱癌作為全球常見惡性腫瘤疾病，早期落實預防和診療工作，是提高患者生存率的關鍵。因此，尋找能科學評估膀胱癌復發、進展和轉移的標志物，為患者治療提供科學依據。基于此，本次研究結果顯示FGFR3基因突變與年齡、吸煙史、病理分期、腫瘤大小、復發情況等參數指標存在相關性，且FGFR3基因突變型膀胱癌的DFS較野生型低，可見FGFR3基因突變與患者預后存在直接影響；分析FGFR3基因突變和蛋白表達可見二者沒有關聯，且對OS無影響，蛋白表達與DFS沒有關聯。綜合上述結果分析，可見高齡男性患者FGFR3基因突變風險較高，存在吸煙史患者更甚，應倡導全民戒煙來控制惡性腫瘤發生風險[3]。與此同時，FGFR3基因突變與患者術后腫瘤高復發存在明顯關聯，究其原因，分析可能是受其突變體激活下游的信號通路影響，加上此類突變會對機體急性炎性反應和免疫反應進行抑制，促進腫瘤發展或誘導病發。因此，臨床針對膀胱癌患者FGFR3基因突變現象，建議采取卡介苗膀胱灌注作首選方案，有利于控制腫瘤復發風險[4]。當前，臨床仍需加大關于腫瘤分子特性定義的相關研究，尋找能準確預測病灶生物學的相關標志物，為提高靶向治療效果、延長患者生存時間提供參考數據。

綜上所述，FGFR3基因表達用于膀胱癌預后評估中有一定應用價值，但臨床仍需加大樣本研究證實其預測價值，僅供參考。